高静电场对体外培养癌细胞增殖的影响

研究高压静电场(high-voltage electrostatic field, HVEF)影响癌细胞增殖的量效和时程关系.量效实验以不同强度的高压静电场作用于体外培养的人肝癌细胞SMMC7721,用MTT比色法检测电场作用效果,并找出最适电压; 时程实验用台盼兰排斥法比较电场作用次数对细胞增殖的影响,并用流式细胞仪检测抑制效果.高压静电场处理后,各实验组细胞生长受到不同程度的抑制.U=2.5 kV时,细胞增殖活性降低最显著(P<0.01),并且随作用次数增多,电场对细胞增殖的抑制效果增强(P<0.01).一定强度的高压静电场作用能够有效抑制癌细胞增殖.     

高压静电场对丝裂霉素C抗癌作用的协同效应

以体外培养的人肝癌细胞SMMC7721和小鼠Lewis肺癌细胞为靶细胞,采用MTT比色法分别检测HVEF和MMC单独使用及联合应用对癌细胞增殖的抑制效果,并根据抑制率判定协同效应,从而探讨高压静电场（HVEF）与丝裂霉素C（MMC）联合应用对癌细胞生长是否具有协同抑制作用.结果表明：经HVEF与MMC联合作用后,两种癌细胞的增殖活性均低于单独使用MMC组,人肝癌细胞SMMC7721下降了20%~38%（P〈0.01）,小鼠Lewis肺癌细胞下降了7%~15%（P〈0.01）,且两种方法具有协同效应,说明一定强度的高压静电场能够增强丝裂霉素C的抗癌作用.     

抗HER-2嵌合抗体chA21对卵巢癌细胞MMP-2和TIMP-2表达的影响

目的观察抗HER-2嵌合抗体chA21对卵巢癌细胞MMP-2和TIMP-2表达的影响。方珐采用免疫细胞化学法检测不同质量浓度chA21（6mg／L和12mg／L组）作用36h后，培养的高表达HER-2人卵巢癌细胞株SKOV3中MMP-2和TIMP-2表达的变化；建立SKOV3裸小鼠移植瘤模型，制作组织芯片，观察chA21（30mg／kg）对肿瘤组织MMP-2和TIMP-2表达的作用。站杲细胞实验显示，随着chA21浓度的升高，MMP-2明显降低（P〈0．01，r=-0．945），而TIMP-2显著升高（P〈0．01，r=0．926），MMP-2／TIMP-2比值也明显降低（P〈O．01，r=-0．945），且均呈浓度依赖性改变；裸鼠荷瘤实验结果显示，chA21能明显下调MMP-2的表达（P〈0．01），上调TIMP-2的表达（P〈0．01），并使MMP-2／TIMP-2明显降低（P〈O．01）。结论chA21能调节高表达HER-2人卵巢癌细胞SKOV3的MMP-2和TIMP-2表达水平。     

高压静电场对丝裂霉素C抗癌作用的协同效应

以体外培养的人肝癌细胞SMMC7721和小鼠Lewis肺癌细胞为靶细胞,采用MTT比色法分别检测HVEF和MMC单独使用及联合应用对癌细胞增殖的抑制效果,并根据抑制率判定协同效应,从而探讨高压静电场(HVEF)与丝裂霉素C(MMC)联合应用对癌细胞生长是否具有协同抑制作用.结果表明:经HVEF与MMC联合作用后,两种癌细胞的增殖活性均低于单独使用MMC组,人肝癌细胞SMMC7721下降了20%～38%(P＜0.01),小鼠Lgwis肺癌细胞下降了7%～15%(P＜0.01),且两种方法具有协同效应,说明一定强度的高压静电场能够增强丝裂霉素C的抗癌作用.     

高压静电场治疗腹水瘤小鼠实验研究

初步探讨高压静电场(high-voltage electrostatic field, HVEF)对动物体内肿瘤的治疗效果.用不同强度高压静电场治疗腹水瘤C57BL/6小鼠,记录小鼠生存时间,计算生存概率,应用Kaplan-Meier氏方法绘制生存分析曲线.结果表明,不同强度静电场对荷瘤小鼠生存状况有不同影响. 电压为10kV和23kV的静电场对小鼠无治疗作用;电压为30kV时,电场的治疗作用不明显(P>0.05);而17kV组,小鼠存活时间明显延长(P<0.05). 高压静电场能够改善荷瘤小鼠生存状况,并且存在一定阈值,适宜强度的静电场能够有效延长荷瘤小鼠的生存期.     

人类宫颈癌中自细胞介素-6与髓样细胞白血病-1表达的相关性及临床意义

目的研究白细胞介素-6（IL-6）、髓样细胞白血病-1（MCL-1）蛋白及MCL-1mRNA在宫颈癌、癌前病变及正常宫颈组织中的表达情况及其相关性。方法采用免疫组化法检测30例宫颈鳞癌、10例宫颈上皮内瘤变（CIN）及10例正常宫颈组织中IL-6和MCL-1蛋白表达情况，采用逆转录PCR法检测组织中MCL-1mRNA的表达情况。结果IL-6和MCL-1蛋白在宫颈癌组织中的表达高于正常宫颈组织及CIN组织（P〈0．01），且IL-6和MCL-1蛋白的表达呈正相关性（r=0．566，P〈0．01）；MCL-1蛋白与MCL-1mRNA表达呈正相关性（r=0．772，P〈0．01）。结论IL-6和MCL-1的表达在宫颈癌的发生、发展过程中起着共同调节作用，这一发现有助于对早期癌前病变的筛查，并为宫颈癌的治疗提供了一个细胞因子靶点。     

姜黄素对沙土鼠脑缺血再灌注后海马CAl区及CA3区Bcl-2、Bax表达的影响及意义

目的探讨姜黄素对沙土鼠脑缺血再灌注后凋亡相关基因Bcl-2、Bax在海马CA1区、CA3区表达的影响及意义。方法制作沙土鼠双侧颈总动脉阻断缺血再灌注损伤模型。随机分为假手术组（SH）．脑缺血再灌注组（IR）、姜黄素组（CU）、对照组（SC），每组据再灌注时间点不同又分为1、3、5、7d4个亚组，每组6只动物。在预定时间点行开阔法行为学检查，TUNEL法检测海马CA1区、CA3区细胞凋亡，免疫组织化学染色测定Bcl-2、Bax蛋白在海马CA1区、CA3区的表达变化。结果姜黄素可显著减少沙土鼠探索活动及海马CA1、CA3区凋亡锥体细胞数量（与IR组相比，P〈0．01），诱导Bcl-2蛋白及抑制Bax蛋白表达（与IR组相比，P〈0．01）。结论姜黄素有脑保护作用，调控凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白的表达可能是其作用机制之一。     

肿瘤浸润淋巴细胞和重组人白细胞介素-2对进展期肿瘤患者细胞免疫功能的影响

对20例经手术切除的进展期肿瘤患者用活化的肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）和重组人白细胞介素-2（rhIL－2）治疗，检测治疗前后细胞免疫功能变化。其中8例治疗后PBL对同种异体相同组织学类型靶细胞的细胞毒性从43．2升高到1249．0溶解单位（P＜0．05），而NK活性无明显变化；T4、T8淋巴细胞亚群荧光强度明显升高，从1．9到3．9（P＜0．05）及4．4到7．2（P＜0．05）。所有患者PPD及PHA反应性明显增强，从10．9mm到13．6mm（P＜0．01）及7．9mm到12．7mm（P＜0．01），15例有一过性寒战、发热，其中10例伴轻度恶心、呕吐。结果提示：TIL和rhIL－2治疗后可明显提高进展期肿瘤患者的细胞免疫功能，而无明显毒副作用，可能成为进展期肿瘤术后重要的辅助治疗方法。     

表皮生长因子及其受体在培养的人脑膜瘤细胞中的表达和作用

目的　探讨表皮生长因子 (EGF)在脑膜瘤细胞中的表达和作用 ,以及体外针对该生长调节环路抑制脑膜瘤细胞增殖的可能性。方法　通过对 2 1例脑膜瘤原代培养 ,采用ABC免疫细胞化学法检测EGF和EGF受体 (EGFR)在脑膜瘤细胞中的表达 ,并选用四唑盐 (MTT)比色法观察EGF、EGF单抗和EGFR单抗对脑膜瘤细胞的增殖调控作用。结果　脑膜瘤细胞可表达EGF和EGFR ;EGF以剂量依赖关系刺激培养脑膜瘤细胞增殖 ,而EGF单抗和EGFR单抗皆以剂量依赖关系抑制培养脑膜瘤细胞 ,且EGFR单抗的抑制效果明显强于EGF单抗 (P <0 .0 1)。结论　EGFR单抗较EGF单抗是更为有效的脑膜瘤增殖抑制单抗 ,为脑膜瘤的生物治疗提供新的实验基础     

MTT法分析清肝饮对Ito细胞和成纤维细胞的调控作用

目的 研究中药清肝饮对人胚肺成纤维细胞，大鼠肝贮脂细胞增殖活性的影响。方法 采用胶原酶灌流、密度梯度离心方法分离大鼠肝Ｉｔｏ细胞，并以ＭＴＴ法观察细胞增殖效应。结果 清肝饮对ＨＬＦ、Ｉｔｏ细胞具有显著的抑制ＤＮＡ合成和细胞增殖作用，并随清肝饮浓度的升高而作用增强（Ｐ〈０．０５￣０．０１）。结论 清肝饮对肝纤维化相关细胞ＨＬＦ、Ｉｔｏ细胞增殖活性具有抑制作用。     

奥曲肽对人肝癌细胞株MHCC97-H的影响

目的探讨奥曲肽对人高转移潜能肝癌细胞株MHCC97-H的影响及其机制。方法奥曲肽体外作用于生长对数期人高转移潜能肝癌细胞株MHCC97-H,观察生长曲线的变化;应用MTT比色分析法分析细胞的生长抑制作用;透射电镜下观察细胞形态变化。结果奥曲肽在0.2 mg/L质量浓度下体外干预MHCC97-H细胞使生长受抑;透射电镜下观察呈现凋亡形态改变;在0.05-0.8 mg/L质量浓度范围内呈剂量依赖关系抑制人高转移潜能肝癌细胞株MHCC97-H增殖(P<0.01),并出现饱和现象。结论奥曲肽对人高转移潜能肝癌细胞株MHCC97-H增殖具有抑制作用,在一定范围内呈剂量依赖关系,其机制与诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

雷帕霉素对小鼠H_(22)肝癌细胞生长增殖的影响

目的 研究雷帕霉素(rapamycin, RPM)对H_(22)肝癌细胞生长增殖的影响.方法 体外培养小鼠H_(22)肝细胞癌株,分别与RPM、CsA、FK506和5-Fu共同孵育48 h,进行MTT实验.流式细胞仪测定各组H_(22)细胞的细胞周期变化,ELISA法测定各组上清液中VEGF含量.体内实验建立H_(22)肝细胞癌皮下移植瘤模型,同时完成C57BL/6→BALB/c小鼠异体皮肤移植模型.给予RPM、CsA、FK506和5-Fu灌胃,观察皮片存活情况.获取实验小鼠血清及肿瘤组织.计算各组肿瘤体积,通过CD34免疫组化染色测定各组肿瘤组织的微血管密度(MVD).结果 剂量为0.01、0.1、1 mg/L的RPM对对数生长的H_(22)肝细胞具有细胞毒性,抑制H_(22)小鼠肝癌细胞增殖,培养上清液中的VEGF浓度较对照组显著降低(P<0.05),细胞周期分析显示S期细胞数较其他免疫抑制剂组显著减少(P<0.05).体内实验显示给予1.5 mg/(kg·d)和4.5 mg/(kg·d)的RPM与5 mg/(kg·d) FK506、20 mg/(kg·d) CsA的皮片存活时间相等,而肿瘤体积显著减小(P<0.05).与对照组相比,实验剂量RPM显著降低了荷瘤小鼠血清中的VEGF含量(P<0.05),同时瘤组织内的MVD显著减少(P<0.05).结论 体外实验研究和动物实验证实,RPM具有抗免疫排斥和抗肿瘤增殖的特点,可能在肝移植治疗肝脏恶性肿瘤方面发挥优势.     

血管抑素对胰腺癌血管生成的抑制作用

目的观察血管抑素在胰腺癌血管生成中的作用。方法采用Lipofectamine 2000基因转染技术将真核表达载体pcDNA3.1(+)-angiostatin导入人胰腺癌PC-3细胞,筛选阳性克隆并扩大培养。PC-3细胞分为血管抑素转染组、空白对照组及脂质体对照组,分别检测各组血管抑素蛋白表达;利用显微镜下细胞计数法测定转染前后PC-3细胞的体外生长曲线;检测各组PC-3细胞培养上清所分泌的血管抑素对血管内皮细胞ECV-304增殖的影响。进一步建立种植瘤模型,通过CD34染色法检测Angiostatin对种植瘤中血管密度的影响。结果 Western blotting检测显示血管抑素转染组的PC-3细胞可分泌血管抑素,而空白对照组及脂质体对照组的PC-3细胞无血管抑素的分泌;细胞生长曲线显示,血管抑素转染组、空白对照组及脂质体对照组的细胞生长速度和倍增时间无明显差异;3组PC-3细胞上清液对内皮细胞ECV-304的生长有明显差异,血管抑素转染组的生长明显低于空白对照组及脂质体对照组。体内试验显示血管抑素转染组的种植瘤生长明显低于空白对照组及脂质体对照组。血管抑素转染组的种植瘤微血管密度(19.6±3.6)显著少于空白对照组(48.5±4.7)和脂质体对照组(51.1±5.4)。结论血管抑素可抑制血管内皮细胞的增殖,进一步产生抑制胰腺癌血管生成效应。     

粉防己碱诱导宫颈癌细胞凋亡的定性定量研究

目的 从定性定量角度探讨粉防己碱诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用.方法 采用MTT法检测不同浓度粉防己碱作用不同时间对人宫颈癌HeLa细胞株的增殖抑制作用.通过流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测细胞凋亡情况.结果 粉防己碱对宫颈癌HeLa细胞具有增殖抑制作用,且呈时间、浓度依赖性.应用流式细胞仪检测到15μmol/L粉防己碱诱导HeLa细胞产生的凋亡率为(51.8±0.97)%,显著高于对照组凋亡率(24.3±1.23)%(P<0.05).通过激光共聚焦显微镜观察,与对照组比较,粉防己碱作用后HeLa细胞具有明显的凋亡形态.结论 粉防己碱能够抑制HeLa细胞的增殖并诱导其凋亡.     

重组小鼠血管抑素基因在胆囊癌细胞中的表达及对血管内皮细胞增殖的抑制作用

目的　研究重组小鼠血管抑素基因真核表达质粒转染的胆囊癌细胞能否表达具有抑制血管内皮细胞生长活性的血管抑素蛋白。方法　应用脂质体LipofectAMINE 2 0 0 0将重组小鼠血管抑素基因的真核表达质粒 pcDNA3.1(+) angiostatin转染胆囊癌细胞株GBC SD ,G4 18抗性筛选 ;以Westernblot检测血管抑素的表达 ,以血管内皮细胞增殖分析检测其活性。结果　经Westernblot检测 ,得到高表达血管抑素的胆囊癌细胞克隆 ,其培养上清能有效抑制bFGF刺激的血管内皮细胞增殖 (P <0 .0 5 )。结论　小鼠血管抑素基因真核表达质粒 pcDNA3.1(+) angiostatin转导的胆囊癌细胞能够表达具有生物学活性的血管抑素蛋白 ,在胆囊癌的血管抑制基因治疗中有潜在临床应用价值     

原癌基因Fra-1高表达与乳腺癌细胞转移表型的关系

目的研究原癌基因Fra-1与人乳腺癌细胞系MCF-7细胞侵袭及迁移的关系。方法提取乳腺癌细胞系MDA231细胞的总RNA,通过RT-PCR扩增Fra-1全长基因,将其克隆入pcDNA3.1(-)myc-his表达载体;应用脂质体法转染MCF-7细胞,观察Fra-1过表达对MCF-7细胞增殖、黏附和迁移的影响。结果高表达Fra-1增强了MCF-7细胞的增殖、黏附和迁移的能力。结论原癌基因Fra-1可能通过促进肿瘤细胞的增殖、黏附和迁移,在肿瘤细胞的侵袭和转移过程中发挥作用。     

miRNA-449家族靶向CCNE2对胃癌细胞生长的抑制调节作用

目的研究miRNA-449在胃癌细胞中对细胞增殖、凋亡的影响,以及对靶基因CCNE2(cyclin E2)表达的影响。方法荧光定量PCR检测人低分化胃癌细胞株BGC823瞬时转染miRNA-449a/b及抑制剂后的表达;流式细胞术分析转染后细胞凋亡变化。Western blot检测miRNA-449a/b对靶基因表达的影响。结果在转染后,miRNA-449a/b组在48、72h对肿瘤细胞的增殖有明显的抑制作用(P<0.05),miRNA-449a/b组对肿瘤细胞凋亡有明显的促进作用(P<0.05),对CCNE2蛋白表达有显著抑制作用(P<0.05)。结论 miRNA-449a/b可能通过CCNE2来发挥其抑制胃癌细胞生长的作用。