耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的基因多态性分型研究

目的 探索一种准确、快速、可靠的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的分子生物学分型方法,了解医院内MRSA的多态性,为临床合理、有效地使用抗生素和控制耐药基因在种群间的传播提供帮助.方法 用MecA基因相关高变区PCR扩增(HVR-PCR)和随机扩增多态性DNA(RAPD)两种方法,对MRSA菌株进行多态性分析.HVR-PCR检测MecA基因相关高变区正相重复序列元件(DRUs)的长度,根据DRUs数目的 不同对MRSA分型;RAPD根据电泳图谱中条带的数目及位置,经NTSYS统计软件进行聚类分析,得到遗传树状图,按MRSA菌株之间的相关性进行分型.结果 应用HVR-PCR方法可将31株MRSA标本分为7型,分别含有7、8、9、10、11、12和16个DRUs,其中10DRUs型最多[11/31(35.48%)],16DRUs型最少[1/31(3.23%)];应用RAPD分型,31株MRSA共分10型,其中以Ⅳ型为主[10/31(32.26%)],其他型分布比较接近.在11株HVR-PCR分型的10DRUs型中RAPD Ⅳ型4株[4/11(36.36%)],RAPD Ⅲ型和RAPD Ⅳ型各2株[2/11(18.18%)];10株RAPD Ⅳ型中9DRUs型、10DRUs型各4株[4/10(40.00%)].结论 RAPD方法和HVR-PCR方法对MRSA的分型率都比较高,而且这两种方法都比较简单、稳定、可靠、快速,实用性强,具有广阔的应用前景.     

蒜氨酸、蒜酶及二者联用对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抗菌作用

目的了解蒜氨酸、蒜酶及蒜氨酸+蒜酶对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的体外抗菌活性。方法采用液体稀释法、平板计数法检测蒜氨酸、蒜酶及蒜氨酸+蒜酶对10株临床分离的MRSA体外抗菌活性,并采用菌落法绘制时间-杀伤曲线。结果蒜氨酸和蒜氨酸+蒜酶均对MRSA有抗菌活性,而蒜酶无作用。结论蒜氨酸和蒜氨酸+蒜酶均为对MRSA敏感的抗菌药物,有望用于治疗由MRSA引起的感染性疾病。     

头孢西丁耐药的葡萄球菌mecA基因检测及耐药性分析

目的对头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的可靠性进行评价,并分析头孢西丁耐药的葡萄球菌即MRS感染及耐药性情况,以指导临床合理用药。方法临床分离葡萄球菌310株,以PCR检测葡萄球菌mecA基因为判断MRS的标准,按美国国家临床实验室标准化研究所(CLSI/NCCLS)标准操作规程进行头孢西丁、苯唑西林纸片扩散法(K-B法)药敏试验检测MRS,同时检测MRS及甲氧西林敏感葡萄球菌(MSS)对10种常用抗生素的耐药性。结果在310株葡萄球菌中金黄色葡萄球菌198株,凝固酶阴性葡萄球菌112株,经mecA基因检测,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)为57.1%(113/198),耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)为62.5%(70/112);头孢西丁纸片扩散法检测MRSA的敏感性和特异性均为100%,检测MRCNS敏感性为98.6%,特异性为100%;除复方新诺明和万古霉素外,MRS对其余8种抗生素的耐药率明显高于MSS,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论头孢西丁纸片扩散法操作简便,结果可靠,可作为临床实验室检测MRS的常规方法;MRS的感染发生率及耐药性较高,且对各类抗生素多重耐药,需加强其耐药性监测。     

西安市耐利福平结核分枝杆菌rpoB基因的突变型分析

目的西安市结核分枝杆菌临床分离株rpoB基因RRDR的基因型分析。方法采用PCR-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析32株结核分枝杆菌耐RFP株和10株RFP敏感株的rpoB基因PCR产物,并对8株具有代表性的菌株rpoB基因片段通过DNA测序进行验证。结果 rpoB基因PCR-SSCP分析灵敏度为56.3%(18/32),特异性为80%(8/10)。8株结核分枝杆菌rpoB基因经测序,6株耐RFP菌株中有5株的rpoB基因突变均发生在531或526密码子上。其中有两株在526密码子均发生了双碱基突变;1株PCR-SSCP呈现阴性的耐RFP结核分枝杆菌存在513密码子突变;两株RFP敏感株出现PCR-SSCP假阳性,其rpoB基因均涉及2～3个密码子的突变,其中518密码子突变型AAC→GAC为首次报道。结论 531和526密码子除了单点突变之外,亦出现同密码子双碱基突变型;RFP敏感株多密码子突变型值得关注。     

污水中分离的大肠杆菌噬菌体和金黄色葡萄球菌噬菌体的生物学特性分析

目的 以污水中分离的大肠杆菌噬菌体(Escherichia coli phage, ECP)和金黄色葡萄球菌噬菌体(Staphylococcus aureus phage, SAP)作为研究对象,初步分析其生物学特性,为研究噬菌体应用提供新的实验材料。方法 采用双层琼脂法纯化ECP和SAP,利用扫描电镜观察形态特征,通过最佳感染复数(multiplicity of infection, MOI)实验、一步生长曲线实验、温度、pH、氯仿及紫外线敏感性实验进行生物学特性分析。结果 根据形态将两种噬菌体归为肌尾噬菌体科,最佳MOI均为10^-1,均对紫外线具有较强的抵抗力。ECP和SAP的潜伏期分别为20 min和10 min,子代噬菌体裂解量分别为76.3 PFU/cell和8.3 PFU/cell。ECP对温度耐受范围较宽,能在30～50℃稳定存活,而SAP对温度较敏感,在50℃的条件下,作用1 h,即可完全失活;ECP在pH为5～11的范围内,SAP在pH为6～9的范围内维持较好的裂解活性;ECP对氯仿具有较强的耐受性,为无囊膜型噬菌体,而SAP对氯仿较敏感,为囊膜...     

乙型肝炎病毒B、C基因型与乙肝临床特征的相关性

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)B、C基因型与乙肝临床表现与转归的关系。方法对300例乙肝患者进行B、C基因型检测,比较这两种基因型的临床差异,并对影响乙肝的各种因素进行Logistic回归分析。结果在肝硬化、肝癌组中C基因型构成比和HBeAg阳性率显著高于B型(P分别为0、0.01);两种基因型在患者年龄、性别、丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平及HBV含量上的差异无统计学意义(P>0.05);Logistic回归分析表明,C基因型肝癌的发生率是B型的5.43倍(OR=5.43,P=0.01)。结论 HBV基因型是乙肝临床转归的重要因素之一。与B基因型比较,C型HBeAg阴转率较低,更容易导致严重的肝病。     

沙眼衣原体D型MOMP基因的克隆和序列分析

目的　从D型沙眼衣原体培养物中克隆主要外膜蛋白(MOMP)基因。方法　利用细胞培养法扩增沙眼衣原体后,提取基因组为模板,经聚合酶链反应(PCR)扩增全长MOMP基因,并用酶切、PCR扩增及序列测定等方法对重组质粒进行鉴定。结果　成功扩增了MOMP基因,并插入克隆载体 pUCmT中。结论　MOMP基因的克隆为进一步开展沙眼衣原体的疫苗研究奠定了基础。     

2型糖尿病合并毛霉菌病的临床分析

目的分析2型糖尿病合并毛霉菌病的临床特点和预后并结合国内外相关文献报道,进一步加深对疾病的认识并提高早期诊断水平。方法回顾性分析6例2型糖尿病合并毛霉菌病患者的临床资料。结果 6例患者中,分别为随机血糖>13mmol/L(6/6)、发热(6/6)、酮症(6/6)、白细胞升高(6/6)、酸中毒(5/6),头颅核磁共振(MRI)和胸部计算机断层扫描(CT)无特征性表现,真菌涂片阳性(3/6),病理活检阳性(5/6),早期应用两性霉素B配合局部清创、手术治疗治愈率(5/6)。结论 2型糖尿病合并毛霉菌病的诊断要点为随机血糖>13mmol/L、糖化血红蛋白>10%、酸中毒、白细胞升高及进行局部组织病理活检。早期足量应用两性霉素B和进行局部病变的手术治疗是治愈的关键。     

2型糖尿病并发周围血管病变的临床流行病学分析

目的通过对比分析2型糖尿病并发周围血管病变(DPVD)及未发生周围血管病变(非DPVD)病例的临床流行病学资料,明确2型糖尿患者伴发DPVD的相关危险因素,为其早期诊治和预防提供依据。方法收集157例40～70岁临床已诊断2型糖尿病患者的临床流行病学资料,依据周围血管病的诊断标准将其分为DPVD组和非DPVD组;以生化分析仪测定两组患者的血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和超敏C反应蛋白(hsCRP);用多因素Logistic回归分析相关危险因素。结果与未发生周围血管病变病例相比,DPVD组患者病程较长,且高血压、周围神经病变及糖尿病眼病的并发率较高,生化分析显示DPVD组患者血清中hsCRP、TC/HDL-C水平升高,而HDL-C降低;经多因素Logistic回归分析发现,病程、hsCRP、HDL-C、TC/HDL-C为DPVD的独立危险因素。结论病程、血压增高、周围神经病、眼病、HDL-C减低及hsCRP增高与2型糖尿病患者并发周围血管病变相关,并且病程、HDL-C、hsCRP、TC/HDL-C是周围血管病变的独立危险因素。     

2型糖尿病患者合并肺炎克雷伯菌败血症的临床分析

目的对糖尿病(diabetes mellitus,DM)和非DM患者合并肺炎克雷伯菌败血症的临床特征及抗生素药敏结果资料进行回顾性分析,以便为2型糖尿病(type 2diabetes mellitus,T2DM)合并肺炎克雷伯菌败血症治疗提供理论依据。方法收集2010年1月至2016年1月西安交通大学第一附属医院和榆林市第一医院细菌培养室记录,确定肺炎克雷伯菌败血症的患者92例,其中DM患者46例,非DM患者46例,并对他们的临床资料及药敏结果进行分析。结果两组病例都多见于社区感染,但DM组社区感染比例更高(82.6%vs.63%,P<0.05);DM组更易合并胆道疾病(54.3%vs.26.1%,P<0.05)、脂肪肝(15.2%vs.2.17%,P<0.05)、慢性肾功能不全(21.7%vs.2.17%,P<0.05);非DM组更易合并肿瘤(23.9%vs.45.6%,P<0.05)。DM组临床表现较非DM组体温升得更高(39.1±0.8vs.38.6±0.9,P<0.05),且寒战(78.3%vs.43.5%,P<0.01)、休克(15.2%vs.2.17%,P<0.05)常见。DM组更易形成脓肿(84.7%vs.21.7%,P<0.01),尤其是肝脓肿(23.9%vs.13.0%,P<0.05)、肺脓肿(10.8%vs.0%,P<0.05)、眼内炎(10.8%vs.0%,P<0.05)发生率较高。DM组与非DM组在抗菌素敏感率方面无明显差异,对碳青霉烯类、头孢菌素三代、四代、喹诺酮有较高的敏感性;抗菌素耐药率由高到低依次为氨苄西林、头孢菌素一代、二代、氨基糖甙类、氨曲南、磺胺类、硝基呋喃类,庆大霉素耐药率在两组之间差异有统计学意义(43.5%vs.13.0%,P<0.01)。结论 T2DM合并肺炎克雷伯菌败血症临床表现较重,更易形成脓肿和转移性感染,死亡率较高。及时选择合理的抗生素和脓肿引流对预后至关重要。