发育期锌缺乏对小鼠脑组织微管聚合作用的影响

目的通过观察发育期锌缺乏小鼠脑组织α－微管蛋白（α－Ｔｕｂ）、β－微管蛋白（β－Ｔｕｂ）及微管相关蛋白２（ＭＡＰ２）的表达情况,探讨膳食锌调节脑组织微管聚合作用的可能机制。方法 ８０只刚怀孕ＩＣＲ母鼠随机分为严重缺锌组、轻度缺锌组、适锌组、高锌组及高锌对喂组５组,在孕期和哺乳期分别饲喂含１ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ及１００ｍｇ／ｋｇ锌水平的实验饲料;断奶期（仔鼠２０     

着丝粒蛋白W在脑胶质瘤中的表达及其对侵袭的作用

目的探讨着丝粒蛋白W(centromere protein W,CENP-W)在人脑胶质瘤中的表达水平及与预后的相关性,并探讨其对脑胶质瘤细胞侵袭作用的影响。方法在高级别胶质瘤组织、低级别胶质瘤及瘤旁正常脑组织中,采用蛋白质印迹法、实时荧光定量PCR法检测CENP-W的表达水平,并统计分析表达水平与胶质瘤临床病理特征及预后的相关性,应用特异性siRNA干扰U251细胞中CENP-W表达使其下调后,通过Transwell侵袭实验观察转染CENPW siRNA对U251细胞侵袭能力的影响。结果胶质瘤组织CENP-W表达水平明显高于正常脑组织,并且与胶质瘤的病理级别呈正相关性;转染成功后,与空白对照组及阴性对照组比较,转染CENP-W-siRNA组的细胞侵袭及迁移能力均下降,Kaplan-Meier生存分析及Log-rank检验显示低表达CENP-W患者的PFS明显长于高表达组。结论CENP-W表达与胶质瘤的病理级别呈正相关,CENP-W可以促进脑胶质瘤的侵袭,预示CENP-W可作为胶质瘤治疗新靶点。     

脑源性神经营养因子融合蛋白真核表达质粒的构建及表达

目的 构建以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因的脑源性神经营养因子(BDNF)融合蛋白真核表达质粒,并对其表达和定位进行研究.方法 以人血白细胞DNA为模板,利用一对删除终止密码子的引物进行PCR获得BDNF基因片段,并将其与pEGFP-N1质粒载体连接,构建BDNF-EGFP融合蛋白真核表达质粒.以脂质体Lipofectamine2000 转染Hela细胞,提取总RNA,通过RT-PCR方法检测BDNF-EGFP在转录水平的表达,Western blot 及荧光显微镜进一步观察融合蛋白的表达定位.结果 酶切和PCR鉴定证实BDNF基因片段正确克隆入载体质粒中,转染Hela细胞后,RT PCR证实BDNF EGFP融合蛋白在转录水平有表达,荧光显微镜观察显示BDNF EGFP融合蛋白主要分布于细胞质中,Western blot结果显示Hela细胞培养液中有BDNF EGFP融合蛋白存在. 结论成功构建了BDNF EGFP融合蛋白真核细胞表达质粒,BDNF EGFP融合蛋白能够在Hela细胞中表达,主要位于细胞质中并可以分泌到细胞外.     

氟对小鼠釉原蛋白基因表达的影响

目的 探讨氟对小鼠釉原蛋白基因表达的影响.方法 在建立小鼠中度及重度氟斑牙模型的基础上,应用原位杂交技术检测对照组(饮用去离子水)、低氟组(饮水F-浓度为50mg/L)、高氟组(饮水F-浓度为150mg/L)小鼠下切牙发育过程中釉原蛋白mRNA在成釉细胞增殖分化期﹑分泌期﹑成熟期的表达情况.结果 小鼠釉原蛋白mRNA在成釉细胞增殖分化期表达为阴性,分泌初期细胞内及新生釉基质中开始出现弱阳性表达;至分泌期,细胞内及新生釉基质中均呈强阳性表达;成熟釉质中无釉原蛋白mRNA的阳性表达.低氟组釉原蛋白mRNA在新生釉基质表面呈强弱交替的不均匀表达;高氟组釉原蛋白mRNA在新生釉基质表面及矿化釉质中均呈阳性表达;在成釉细胞分泌期,其表达多次中断.结论 氟影响釉原蛋白mRNA在成釉细胞、釉基质中的表达,过高浓度的氟周期性抑制成釉细胞分泌釉基质的功能,从而导致釉质的矿化不全、矿化不均及局灶性缺损.     

氟对小鼠釉鞘蛋白基因表达的影响

目的探讨氟对小鼠釉鞘蛋白基因表达的影响。方法在建立小鼠中度及重度氟斑牙模型的基础上,应用原位杂交技术观察对照组(饮用去离子水)、低氟组(饮水F-为50 mg/L)、高氟组(饮水F-为150 mg/L)小鼠下切牙发育过程中,釉鞘蛋白mRNA在成釉细胞增殖分化期、分泌期及成熟期的表达情况。结果对照组小鼠下切牙形态正常,牙齿表面呈半透明、乳白色,光滑而有光泽。镜下釉鞘蛋白mRNA在成釉细胞增殖分化期表达为阴性;分泌初期细胞内及新生釉基质中开始出现弱阳性表达;至分泌期,细胞内及新生釉基质中均呈强阳性表达;成熟釉质中无釉鞘蛋白mRNA的阳性表达。低氟组小鼠下切牙表面有或宽或窄的白垩色釉质矿化不良区与矿化较好的釉质条带相交替,镜下釉鞘蛋白mRNA在釉牙本质界附近的釉基质中有弱阳性表达。高氟组小鼠的下切牙表面大面积白垩色区域伴局灶性釉质缺损,镜下成釉细胞排列紊乱;在成釉细胞分泌期,釉基质分泌几乎中断;釉鞘蛋白mRNA在新生釉基质表面及釉牙本质界处阳性表达,在成釉细胞分泌期,其表达多次中断,并且在深层釉基质中也可见到釉鞘蛋白mRNA的较强阳性表达。结论氟影响釉鞘蛋白mRNA在成釉细胞、釉基质中的表达,过高浓度的氟周期性抑制成釉细胞分泌釉基质的功能,从而导致釉质的矿化不全、矿化不均及局灶性缺损。     

脑尔康对老年痴呆小鼠脑内胆碱酯酶活性及神经元的影响

目的　通过慢性铝中毒造成老年痴呆小鼠模型。观察复方中药脑尔康对小鼠学习记忆障碍的保护作用 ,探讨其对胆碱酯酶活性的影响及保护神经元的抗痴呆作用机理。方法　健康昆明种雄性小鼠 60只 ,随机分为 6组 ,除空白组外 ,连续造模 50d后 ,每组随机取 3只 ,用HE染色法 ,观察小鼠海马CA1区细胞数量及形态 ,其余动物迅速断头取脑 ,冰台分离海马及皮层 ,检测各自的胆碱脂酶活性。结果　模型组AchE活性明显增高 (P <0 0 1 ) ,用药各组与模型组比较 ,除小剂量组外AchE活性均明显低于模型组 (P <0 0 1 ) ;模型组海马CA1区神经元数量明显少于空白组 (P <0 0 1 ) ,可见神经元脱失 ,并有胶质细胞增生。用药各组与模型组比较 ,只有中药大、中剂量组神经元数量显著多于模型组 (P <0 0 5或P <0 0 1 )。结论　脑尔康能明显降低老年痴呆模型小鼠皮层及海马AchE活性 ,保护海马CA1区神经元的作用。     

TRIM22与HIV衣壳蛋白p24在脑胶质瘤细胞中的表达特点及共定位研究

目的观察外源性三基序蛋白22(TRIM22)与HIV衣壳蛋白p24在U-251脑胶质瘤细胞中的表达特点及共定位情况。方法分别将pEGFP-N3-TRIM22或pDsRed1p24载体转染U-251细胞,通过激光共聚焦显微镜观察TRIM22-EGFP和p24-DsRed1的表达和分布情况。通过激光共聚焦xyz轴扫描,经ImageJ 1.50i软件进行3D结构重建,观察p24-Dsred1在U-251细胞中的分布特点。将pEGFP-N3-TRIM22和pDsRed1p24载体在U-251细胞中共表达,观察TRIM22-EGFP和p24-DsRed1是否存在共定位关系。结果单独转染pEGFP-N3-TRIM22或pDsRed1p24载体时,TRIM22-EGFP和p24-DsRed1在U-251细胞的胞体或突起中均有较高水平的表达;且3D结构重建显示外源性p24-DsRed1可迁移至U-251细胞的足突。在U-251细胞共转染pEGFP-N3-TRIM22和pDsRed1p24载体时,TRIM22-EGFP与p24-DsRed1存在共定位关系,并能以出胞形式脱离细胞。结论 TRIM22与HIV衣壳蛋白p24在U-251脑胶质瘤细胞中存在共定位关系。     

束缚应激对小鼠血浆α-klotho蛋白及肾脏α-klotho mRNA表达的影响

目的检测不同束缚应激条件下小鼠血浆皮质酮、α-klotho蛋白质量浓度及肾脏α-klotho mRNA表达的变化,分析α-klotho与束缚应激之间的关系,并探讨其在病态窦房结中可能的作用方式。方法本实验采用经典的束缚应激实验方法,运用血皮质酮浓度评估实验模型。将48只5周龄C57BL6/J小鼠分成1、10、20h组,每组设应激亚组和对照亚组,每亚组8只。运用ELISA方法测定血浆α-klotho蛋白和皮质酮浓度,实时定量PCR检测肾脏α-klotho mRNA表达的变化情况。结果束缚应激实验模型符合要求。1、10、20h对照亚组α-klotho蛋白质量浓度分别为(757.71±333.93)、(687.38±342.79)、(912.90±337.8)pg/mL;束缚应激亚组分别为(726.40±342.79)、(1 261.54±442.71)、(1 696.18±404.11)pg/mL。对照亚组各组之间质量浓度无统计学意义,但20h组较其他两组稍高。1h束缚应激亚组与对照亚组间无统计学差异,而10h与20h束缚应激亚组与其各自对照亚组间有统计学差异(P<0.05)。10h与20h束缚应激亚组肾脏α-klotho mRNA表达较空白对照亚组分别减低2.02倍和2.46倍。结论抗衰老基因α-klotho所表达的蛋白为急性期蛋白,束缚应激导致血α-klotho蛋白质量浓度升高的同时却减低肾脏α-klotho mRNA的表达;机体可能在应激条件下通过改变窦房结局部α-klotho蛋白质量浓度的方式,影响窦房结的功能。     

光照对发育期小鼠体重和学习记忆的影响

目的 研究不同强度光照对小鼠学习记忆和体重的影响,进一步揭示光污染对人体的危害.方法 50只20日龄小鼠随机分为200 W光照组、100 W光照组、60 W光照组、40 W光照组及对照组,每组10只.各组小鼠每日于不同光照强度持续照射8 h,连续1周,通过监测体重、跳台实验和Morris水迷宫行为学实验方法,观察光污染对小鼠体重和学习记忆的影响.结果 200 W组的小鼠体重增长率明显低于其他各组,其余4组之间体重增长率差异无统计学意义;光照处理各组与对照组相比,跳台实验潜伏期和错误次数以及Morris水迷宫潜伏期和穿越站台次数没有统计学差异.结论 短期高强度光照对小鼠的体重增长有抑制作用,短期光照对于小鼠的学习记忆没有影响.     

miR-185*对癫痫海马神经元中BDNF-TrkB通路表达的影响

目的研究海马神经元癫痫模型中的BDNF/TrkB信号通路及miR-185*对其的调控。方法构建miR-185*表达载体。体外培养海马神经元,7d后将其随机分为正常组、癫痫组、正常+BDNF组、癫痫+BDNF组、正常转染miR-185*组、癫痫转染miR-185*组、癫痫转染miR-185*+BDNF组。免疫荧光、膜片钳及免疫印迹技术观察转染miR-185*后BDNF/TrkB通路的表达变化。结果癫痫+BDNF组海马神经元细胞的TrkB蛋白磷酸化水平较正常+BDNF组降低,有统计学意义(P<0.05);正常+BDNF组TrkB蛋白的磷酸化水平比正常组的磷酸化水平升高,有统计学意义(P<0.001);癫痫+BDNF组TrkB蛋白磷酸化水平比癫痫组升高,有统计学意义(P<0.05);而癫痫+miR-185*+BDNF组的TrkB蛋白磷酸化水平较癫痫+BDNF组和癫痫转染miR-185*组升高(P<0.001)。结论BDNF可以激活BDNF/TrkB信号通路,转染miR-185*后可以消除对癫痫状态下BDNF/TrkB信号传导通路的抑制。     

烧伤对不同性别小鼠肝脏和脾脏铁相关蛋白的影响

目的 研究不同性别小鼠肝脏和脾脏铁相关蛋白烧伤前后的变化.方法 90 ℃水蒸气制备烧伤小鼠模型,采用比色法测定烧伤小鼠肝脏和脾脏中的铁含量,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测肝脏hepcidin和膜铁转运蛋白1(Fpn1)表达,使用Western检测了肝脏和脾脏Fpn1蛋白表达.结果 烧伤后雄性小鼠脾脏铁含量升高,肝脏hepcidin表达升高同时肝脏和脾脏Fpn1蛋白含量减少.烧伤后雌性小鼠铁内稳态破坏程度较轻.结论 铁相关蛋白的表达变化可能是引起烧伤后铁内稳态破坏的重要原因,不同性别小鼠铁相关蛋白表达差异可能暗示了雌激素的保护作用.     

缺氧对膀胱平滑肌细胞缝隙连接蛋白表达的影响

目的 通过研究膀胱出口部分梗阻及缺氧环境下膀胱平滑肌细胞中缝隙连接蛋白表达的变化,探讨不稳定膀胱的发生规律.方法 建立不稳定膀胱大鼠模型、体外正常大鼠膀胱平滑肌细胞并造成其细胞缺氧状态;采用RT-PCR和Western blot分析膀胱平滑肌细胞的缝隙连接蛋白的表达.结果 不稳定膀胱组及缺氧组(15min、30min、1h)膀胱平滑肌细胞中Cx40、Cx43在mRNA及蛋白水平上均高于模型对照组及缺氧对照组(P＜0.01),其中缺氧15min组Cx43的mRNA及蛋白表达量均较缺氧30min组、缺氧1h组高(P＜0.01).结论 膀胱出口部分梗阻能引起平滑肌细胞缺氧与缝隙连接蛋白表达增多,平滑肌细胞缺氧也能引起缝隙连接蛋白表达增加.膀胱出口部分梗阻后导致的不稳定膀胱的发生可能与膀胱平滑肌细胞缺氧有着密切关系.     

饮用水中过量氟对儿童唾液蛋白表达的影响

目的　观察分别来自饮用水氟浓度为 3.6 8mg·L-1和 1.0 0mg·L-1两地区儿童间的刺激性颌 /舌下腺唾液中唾液蛋白是否存在差异。方法　测定受试对象的刺激性颌 /舌下腺唾液的唾液流率、唾液总蛋白浓度和单位时间唾液总蛋白的分泌量 ,分析唾液蛋白组成及各组分占总量的比例。结果　①F3 .68组颌 /舌下腺唾液流率高于F1.0 0组 (P <0 .1) ;②F3 .68组颌 /舌下腺唾液总蛋白浓度明显低于F1.0 0 组 (P <0 .0 1) ;③F3 .68组颌 /舌下腺单位时间唾液总蛋白的分泌量显著低于F1.0 0 组 (P <0 .0 5 ) ;④在十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)不连续电泳条件下发现 ,两组颌 /舌下腺唾液共发现 10～ 12条蛋白带 ,其中B10 、B12 蛋白带的出现率在F3 .68组显著低于F1.0 0 组(P <0 .0 5 ) ,且B9蛋白带的量占总蛋白量的比例在F3 .68组显著高于F1.0 0 组 (P <0 .0 1)。结论　两组刺激性颌 /舌下腺唾液中有关唾液蛋白的指标存在量的差异 ,提示饮用水中过量氟对儿童唾液蛋白表达有影响     

锂对慢性铝暴露大鼠脑内CDK5和PP2A表达的影响

目的 研究锂对慢性铝暴露大鼠脑内周期蛋白依赖性激酶5(CDK5)和蛋白磷酸酯酶2A(PP2A)表达的影响,进一步探讨锂抑制tau蛋白磷酸化的作用机制.方法 慢性铝暴露大鼠12只,随机分为锂治疗组和非治疗组.锂治疗组给予氯化锂[200mg/(kg·d)]溶液连续灌胃6周;非治疗组以等量生理盐水灌胃.另取6只同月龄非铝暴露大鼠为正常对照组.Morris水迷宫测试3组大鼠学习记忆功能;Western blotting检测大鼠大脑皮层及海马磷酸化tau蛋白、CDK5、PP2A的表达.结果 慢性铝暴露非治疗组大鼠脑内磷酸化tau蛋白含量、CDK5表达明显高于正常对照组大鼠(P<0.05),且慢性铝暴露非治疗组大鼠脑内磷酸化tau蛋白含量与CDK5表达呈正相关(r=0.702,P=0.036).锂治疗组大鼠脑内磷酸化tau蛋白含量、CDK5表达明显低于非治疗组(P<0.05),且锂治疗组大鼠脑内CDK5表达与磷酸化tau蛋白含量呈正相关(r=0.871,P=0.024),而正常组、锂治疗组和非治疗组大鼠皮层及海马PP2A含量无明显差异(P>0.05).结论 抑制脑内CDK5表达可能是锂降低tau蛋白过度磷酸化,减少大鼠脑内神经原纤维缠结的又一途径.     

中药复方对大鼠脑血流量的影响

用由人参、当归、三七、水姓、红花、黄芪、川可、丹参、淫羊藿、枸杞、熟地、枣皮、益智仁、首乌组成的中药给正常SD大鼠灌胃3d后，观察脑血流量的变化。结果示：不同剂量的中药均增加大鼠脑血流量，与对照组比较差异显著（P＜0．05）。表明本实验所用中药具有增加SD大鼠脑血流量作用。     

米非司酮对早孕绒毛组织EGFR、C-myc蛋白表达的影响

目的　观察米非司酮对早孕绒毛组织表皮生长因子受体 (EGFR)、C myc蛋白表达的影响 ,探讨米非司酮的作用机制。方法　采用免疫组织化学SP法 ,对 30例人工流产早孕妇女和 30例服用米非司酮药物流产的早孕妇女的绒毛组织EGFR、C myc蛋白的表达进行检测。 结果　EGFR在药物流产组的表达强度较人工流产组为弱 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。C myc蛋白在药物流产组与人工流产组的表达强度无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论　米非司酮可能通过抑制早孕绒毛组织EGFR的表达 ,促使妊娠终止。     

原肌球蛋白调节蛋白1对ApoE敲除小鼠糖脂代谢的影响

目的研究原肌球蛋白调节蛋白1(Tmod1)对载脂蛋白E(ApoE)基因敲除小鼠的糖脂代谢的影响。方法将心脏过表达而全身其他部位敲除Tmod1的小鼠(TOT/Tmod1~(-/-))与ApoE~(-/-)小鼠杂交获得ApoE和Tmod1的双敲小鼠(ApoE~(-/-)/TOT/Tmod1~(-/-))。对ApoE~(-/-)小鼠和双敲小鼠进行高脂饮食喂养,检测2种小鼠的体质量改变、脂肪含量、血脂水平、口服糖耐量(OGTT)和胰岛素耐量(ITT)。对肝脏和皮肤进行组织学分析。结果双敲小鼠较ApoE~(-/-)小鼠体质量减轻,体脂含量降低(P<0.05)。但喂养高脂饮食8周后,双敲小鼠体质量增加量、皮下脂肪组织的厚度、三酰甘油和总胆固醇水平均高于ApoE~(-/-)小鼠(P<0.05),而脂肪肝、口服葡萄糖耐量和胰岛素耐受水平则明显降低(P<0.05)。结论 Tmod1参与调节高脂饮食引起的ApoE~(-/-)小鼠糖脂代谢水平的改变。     

氟对体外器官培养人牙胚骨形成蛋白表达的影响

目的　通过研究氟对牙胚发育早期骨形成蛋白 (BMP)表达的影响 ,初步探讨氟在早期牙胚发育中的可能作用机制。方法　 4个月的人胚胎 ,取乳牙胚用RPMI16 4 0培养液进行器官培养 8d。免疫组化法研究 2 5mg·L-1和 5 0mg·L-1的氟对分泌前期牙胚的影响 ,观察培养第 2、4、6、8天时BMP表达的变化。采用图像分析仪对免疫组化染色结果进行灰度分析。结果　BMP的表达主要在造釉器。成釉细胞 ,中间层细胞和星网状层细胞均有BMP表达 ,牙乳头细胞或成牙本质细胞不表达BMP。 2 5mg·L-1氟时从培养第 6天开始BMP表达增强 ;5 0mg·L-1氟时从培养第 2天到第 6天BMP的表达增强 ,培养第 8天时BMP的表达降低。结论　氟可能通过促进BMP某一亚型或某几个亚型的表达而在牙胚发育中起作用     

粪便钙卫蛋白对溃疡性结肠炎诊断的临床价值

目的探讨粪便钙卫蛋白作为炎症性肠病诊断标志物的临床价值。方法选取溃疡性结肠炎(UC)患者30例和正常对照20例,采用ELISA方法测定粪便中钙卫蛋白含量,溃疡性结肠炎组织学严重程度根据Truelove Witts标准判断,与红细胞沉降率(ESR)和C反应蛋白(CRP)进行比较,评价粪便钙卫蛋白测定作为判断溃疡性结肠炎活动性的价值。结果活动期UC组粪便钙卫蛋白水平(578μg/g)显著高于缓解期组(8.4μg/g,P<0.01)和正常对照组(4.9μg/g,P<0.01),后两者之间差异无统计学意义(P>0.05);活动期各期组显著高于缓解期组P<0.01);粪便钙卫蛋白水平与活动期UC内镜分级显著相关(r=0.85,P<0.01),CRP和ESR与内镜分级的相关系数分别为r=0.67(P<0.01)和r=0.29(P<0.01),显著低于粪便钙卫蛋白。结论粪便中的钙卫蛋白含量可作为UC活动性的判断指标,敏感性和特异性均比血清学指标ESR和CRP高。     

清热祛湿方对肝纤维化大鼠TGF-β1蛋白表达的影响

清热祛湿方是我们长期应用于临床治疗慢性肝病的有效方剂。既往通过实验研究发现清热祛湿方有较好的防治肝纤维化作用。为了进一步了解该方防治肝纤维化的作用机制 ,我们采用四氯化碳法建立肝纤维化大鼠模型 ,观察该方对大鼠肝组织中转化生长因子 β1(transforminggrowthfactorbetal,TGF β1)蛋白表达的影响。1　材料与方法1.1　材料　动物 :雄性Sprague Dawley大鼠 4 8只 ,清洁级 ,体重 (2 4 0± 30 ) g ,由西安交通大学医学院实验动物中心提供 ,陕医动证字 :0 8 0 0 5号。药品与试剂 :清热祛湿方 (由飞天蜈蚣七 30g、汉防己 15 g组成 ) …