HPLC-MS法测定人血浆中羧甲司坦浓度

目的 建立一种灵敏、高效、快速的高效液相色谱-质谱分析方法,测定人血浆中羧甲司坦的血药浓度.方法 100mL/L高氯酸沉淀血浆蛋白,上清液反相高效液相色谱分离,电喷雾离子阱质谱法检测血浆样品中的羧甲司坦,多级反应模式选择离子法定量.结果 方法检测限为0.01μg/mL,线性范围为0.2～200.0μg/mL,回收率为89.2%～105.6%.结论 该方法精密、灵敏、准确,可用于生物样品中羧甲司坦的测定.     

黄芪甲苷通过SIRT1/PGC-1α通路促进退变的髓核细胞增殖

目的探究黄芪甲苷对退变髓核细胞功能的影响及其作用机制。方法原代培养正常与退变髓核细胞并观察,免疫组化检测细胞中胶原蛋白Ⅱ(collagenⅡ)的表达;分别采用20、40、60、80μg/mL的黄芪甲苷处理细胞,通过CCK-8和MTT试剂盒检测细胞活力和增殖,流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blotting检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax和沉默信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活因子-1(PGC-1α)的表达及其乙酰化和磷酸化水平;比色法检测丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)、β-galactosidase和三磷酸腺苷(ATP)的含量。结果与正常髓核细胞相比,退变髓核组织中坏死细胞更多,且collagenⅡ表达降低;细胞经不同浓度黄芪甲苷处理后,40μg/mL黄芪甲苷不仅能显著提高退变髓核细胞活力,促进细胞增殖并抑制其凋亡,而且能上调细胞中SIRT1、PGC-1α的蛋白表达和PGC-1α磷酸化水平,下调PGC-1α乙酰化水平,增加SOD和ATP含量,降低MDA和β-galactosidase含量。结论黄芪甲苷可能通过激活SIRT1/PGC-1α信号通路促进髓核细胞的增殖和存活。     

HPLC-MS法测定兔血浆和组织中丹参素异丙酯的含量

目的 建立兔血浆及组织中β-(3,4-二羟基苯基)-α-羟基丙酸异丙酯(丹参素异丙酯)的高效液相色谱-电喷雾-离子阱质谱(LC-ESI-MSn)测定新方法.方法 采取液液萃取法处理血浆及组织样品,以4-羟基苯甲酸甲酯为内标,LC-ESI-MSn多级反应模式测定血浆及组织中丹参素异丙酯的含量.结果 丹参素异丙酯在血浆、心、肝、脾、肺、肾和脑中的检出限分别为:0.54、1.08、1.20、1.62、2.15、1.12、1.36ng/mL,线性范围分别为:0.20～400、0.10～200、0.01～100、0.02～400、0.20～800、0.01～100和0.05～100μg/mL,日内、日间精密度的相对标准偏差均小于10%,方法平均回收率在89.5%～107.4%范围内.结论 该分析方法灵敏度高、专属性好,为丹参素异丙酯的非临床和临床药代动力学研究提供一种方法学参考.     

黄芪甲苷改善高糖诱导的足细胞损伤和线粒体功能障碍并抑制Notch通路激活

目的 研究黄芪甲苷对高糖诱导足细胞损伤和线粒体功能障碍的保护作用及其分子机制。方法 构建高糖(30 mmol/L葡萄糖)诱导足细胞损伤模型,分别用低、中、高剂量黄芪甲苷与高糖共处理细胞;CCK-8检测细胞活性,TUNEL染色检测细胞凋亡,JC-1荧光探针检测线粒体膜电位,试剂盒检测ATP含量,Western blotting检测凋亡及足细胞损伤相关蛋白和Notch通路相关蛋白表达水平。结果 与control组相比,HG组细胞活性降低、细胞凋亡水平增加(P<0.05),抗凋亡蛋白(Bcl2)表达降低,凋亡蛋白(Bax、cleaved-caspase 9、cleaved-caspase 3)表达升高(P均<0.05);和HG组相比,HG+AS-IV组改善高糖诱导的细胞活性和细胞凋亡水平(P<0.05),抗凋亡蛋白(Bcl2)表达升高,凋亡蛋白(Bax、cleaved-caspase 9、cleaved-caspase 3)表达降低(P均<0.05);和control组比较,HG组细胞线粒体发生功能障碍,JC-1单体含量升高,ATP含量降低(P均<0.05);和...     

高效液相色谱法测定舒肤胶囊中芍药苷的含量

目的采用HPLC法对处方中主要成分芍药苷进行含量测定。方法采用高效液相色谱法,以KromasilC18(250 mm×4.6 mm,5μm)为分析柱,流动相为乙腈-1.5 mL/L磷酸(12∶88),流速1 mL/min,检测波长230 nm,柱温为室温。结果芍药苷回归方程:Y=83 168X+72 569(r=0.999 5,n=6),芍药苷在0.06~0.18μg范围内线性关系良好;方法的平均回收率为100.21%,精密度RSD的值为1.31%。结论本方法操作简便、快速、准确、灵敏,适用于舒肤胶囊的质量控制。     

黄芪总皂苷对瘦素诱导的HSC增殖和TIMP-1上调的影响

目的观察黄芪总皂苷对瘦素诱导的肝星状细胞(HSC)增殖及组织抑制基质金属蛋白酶-1(TIMP-1)分泌的影响。方法培养HSC,分为溶媒组、溶媒瘦素组和黄芪总皂苷组。磺酰罗丹明B法检测HSC增殖,利用2,7-二氯二氢荧光素二乙酯作为探针检测HSC中的活性氧水平,酶联免疫吸附实验测定HSC培养液中TIMP-1含量。结果黄芪总皂苷50、100、200μg/mL与溶媒瘦素组相比,明显抑制瘦素诱导的HSC增殖(P<0.01),抑制率分别达29.1%、66.7%和86.1%,同时能够抑制瘦素诱导HSC的活性氧产生(P<0.05)以及TIMP-1的分泌(P<0.05)。结论黄芪总皂苷可能通过下调瘦素诱导的氧化应激水平,从而抑制HSC增殖以及TIMP-1的分泌。     

测定奥美拉唑的流动注射化学发光新方法

目的 建立测定奥美拉唑的流动注射化学发光新方法.方法 当将奥美拉唑注入到高锰酸钾与鲁米诺反应的合并流中时,可检测到强的化学发光信号,结合流动注射技术对实验条件进行优化.结果在优化的实验条件下,即混合管长度:150cm,反应介质的碱度:0.15mol/L NaOH,鲁米诺的浓度:7.0×10-5mol/L,高锰酸钾的浓度:2.0×10-5mol/L以及试剂流速:2.8mL/min,奥美拉唑浓度在2.0×10-8～1.0×10-5g/mL范围内与相对化学发光强度具有线性关系;对浓度为1.0×10-7g/mL和1.0×10-6g/mL奥美拉唑溶液进行11次平行测定的相对标准偏差分别为1.0%和2.6%;该方法的检出限为3×10-9g/mL.结论该方法简单、快速、灵敏,适用于药物制剂中奥美拉唑的含量测定.     

黄芪、三七不同剂量配伍对肾小球系膜细胞增殖的影响

目的 通过考察通脉口服液方中黄芪、三七不同剂量配伍对肾小球系膜细胞增殖的影响,筛选其最佳配伍剂量.方法 采用血清药理学方法,制备不同剂量配伍的通脉含药血清,体外检测其对肾小球系膜细胞(GMC)增殖的影响.结果 通脉口服液,黄芪、三七不同剂量配伍含药血清,无论在正常培养条件下还是在脂多糖(LPS)刺激条件下,均对GMC增殖有一定的抑制作用;各剂量配比组之间比较,通脉3∶1含药血清抑制作用优于通脉6∶1、1.5∶1含药血清.结论 原方黄芪、三七剂量按3∶1配比具有一定的合理性.     

引阳素胶囊中淫羊藿苷的含量测定

目的建立引阳素胶囊中淫羊藿苷的高效液相色谱(HPLC)含量测定方法。方法采用HPLC法。色谱柱Li-chrospher C18(4.6 mm×250 mm,5μm),C18保护柱;流动相为乙腈-20 g/L冰醋酸水溶液(30∶70);检测波长270 nm;流速1.0 mL/min;柱温为室温;进样量10μL。样品加50%(体积分数)乙醇超声提取,浸提液过0.45μm滤膜后测定。结果淫羊藿苷线性范围为10.0-60.0 mg/L,回归方程为C=2.042×10-5A+0.554,r=0.9993,平均回收率为99.8%,RSD为0.65%。结论本法用于引阳素胶囊中淫羊藿苷的含量测定时简便快捷、准确。     

黄芪预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机制

目的 探讨黄芪对大鼠缺血再灌注心肌的保护作用及其机制.方法 采用结扎左冠状动脉的方法制备心肌缺血再灌注损伤动物模型.SD大鼠30只随机分为3组:对照组、缺血再灌注组(I/R)和黄芪预处理组(H+I/R).光镜和透射电镜下观察心肌病理变化,检测血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,以及心肌组织Na~+K~+-ATP酶(Na~+K~+-ATPase)、Ca~(2+)-ATP酶(Ca~(2+)-ATPase)活性.结果 ①黄芪预处理组光镜和透射电镜下心肌细胞变性坏死程度及心肌细胞超微结构形态改变较缺血再灌注组显著减轻;②黄芪预处理组大鼠血清中CK、LDH活性和MDA含量显著降低(P<0.05),SOD、Na+ K+-ATPase、Ca~(2+)-ATPase活性显著提高(P<0.05).结论 黄芪对大鼠冠状动脉结扎后再灌注心肌损伤具有明显的保护作用,其机制可能与改善心肌缺血再灌注冠状微循环与抗氧自由基生成、减轻钙超载等多种机制有关.     

流动注射化学发光法测定何首乌中二苯乙烯苷的含量

目的　建立二苯乙烯苷的流动注射发光分析法。方法　二苯乙烯苷对鲁米诺 过氧化氢发光体系在pH =12的溶液中具有一定的抑制作用 ,且此抑制作用在一定范围内与二苯乙烯苷浓度间呈线性关系 ,借此建立了二苯乙烯苷的流动注射发光分析法。结果　此方法检出限为 6 .0× 10 -5g·L-1,线性范围为 1.0× 10 -4～ 1.6× 10 -2 g·L-1。对 1.1× 10 -4g·L-1二苯乙烯苷平行测定 11次 ,其相对标准偏差为 1.4 6 %。结论　本法简便、快速、准确 ,可作为何首乌中二苯乙烯苷含量的测定方法     

HPLC法测定健宝胶囊中淫羊藿苷含量

目的　建立健宝胶囊中淫羊藿苷的含量测定方法。方法　采用高效液相色谱法 ,色谱柱为C18(15 0mm×4.6mm) ,流动相为乙腈 0 .0 75mol·L-1磷酸溶液 (2 5∶75 ) ,流速 1.0mL·min-1,检测波长为 2 70nm。结果　淫羊藿苷进样量在 0 .0 6～ 0 .30 μm范围内 ,线性关系良好 (r=0 .9991) ,方法回收率为 98.5 0 %(n =5 ,RSD =1.2 0 %)。结论　本方法准确、简便、快速 ,适合于该药的质量分析检验。     

HPLC-ELSD法测定桔梗中3种桔梗皂苷的含量

目的 建立测定桔梗药材中桔梗皂苷D、D3、E含量的方法.方法 采用高效液相色谱-蒸发光激光闪射检测器(HPLC-ELSD)法,Hypersil C18柱(5 μm,4.6 mm×150 mm),以乙腈-水为流动相梯度洗脱,流速1.0 mL/min,ELSD漂移管温度113℃,载气(N2)流速3.0 L/min.结果 桔梗皂苷D、D3、E的线性范围分别为13.78～275.6μg/mL(r=0.999 5)、8.40～168.0μg/mL(r=0.999 7)、12.02～240.4μg/mL(r=0.999 6),平均回收率(n=5)为98.3%、99.4%和101.3%.结论 本法操作简便,结果准确可靠,可用于桔梗皂苷D、D3、E含量的测定.     

大黄素和黄芪多糖对实验性肝损伤大鼠肝脏超微结构的影响

目的 探讨大黄素和黄芪多糖单用及联合应用对肝损伤大鼠肝脏超微结构的影响及意义.方法 采用四氯化碳(CCl4)等复合因素诱导大鼠肝损伤模型.选取清洁雄性SD大鼠90只,随机分为6组:正常对照组(10只)、模型组(20只)、大黄素组(15只)、黄芪多糖组(15只)、大黄素和黄芪多糖联合给药组(15只)、秋水仙碱组(15只).除正常对照组和单纯造模组外其他各组同时给对应的药物干预,即大黄素40mg/(kg·d)、黄芪多糖200mg/(kg·d)、大黄素40mg/(kg·d)+黄芪多糖200mg/(kg·d)、秋水仙碱0.1mg/(kg·d),共12周.采集标本后测定肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量,电镜观察各组大鼠肝脏的超微结构.结果 大黄素、黄芪多糖单用或联合应用均可以减轻CCl4对大鼠肝脏组织的损伤程度,尤其是联合用药可以明显减少肝组织Hyp含量;保护肝脏的超微结构改变,表现为肝细胞结构接近正常,包膜规整,细胞质内见少量脂滴,线粒体嵴排列规整,内质网增生且明显扩张,肝窦隙可见呈梭形或杆状的肝星状细胞(HSC),肝窦内充斥少量纤细胶原纤维束,Kupffer细胞脂滴不多.结论 大黄素和黄芪多糖对CCl4致大鼠肝脏的超微结构损伤具有一定的预防保护作用.     

大黄素、黄芪多糖在体外对乙型肝炎病毒的抑制作用

目的体外观察大黄素、黄芪多糖单用与联合应用抗HBV的作用。方法以HepG2.2.15细胞为研究模型,选用干扰素α、拉米夫定为阳性对照药物,观察培养液中加入不同浓度大黄素、黄芪多糖及两药联合应用抗HBV作用的效果。采用Taqman荧光定量PCR检测细胞上清HBV DNA,ELISA检测培养上清液HBsAg、HBeAg水平的变化。采用MTT法观察它们对细胞生长的影响。结果大黄素的3个剂量组(12.5、25.05、0.0 mg/L)和所观察的时间点(3、69、d)对HBV DNA、HBsAg、HBeAg表现出剂量与时间依赖的抑制作用(P<0.05)。大黄素对HBV DNA抑制的半数抑制浓度为21 mg/L,对HepG2.2.15细胞半数细胞毒性浓度为40.66 mg/L,治疗指数为1.94。同时发现黄芪多糖各剂量组对HBV无明显的抑制作用(P>0.05)。大黄素、黄芪多糖联合应用在疗效方面无明显的交互作用(P>0.05)。结论大黄素在体外对HBV具有一定的抑制作用,黄芪多糖无明显抑制HBV的作用,两药联用无明显协同抗HBV的作用。     

黄芪水提物对多抗甲素抗肿瘤作用的影响

本文观察了黄芪水提物对多抗甲素口服液抗肿瘤作用的影响,发现黄芪能增强多抗甲素的抗肿瘤作用,表现为黄芪多抗甲素胃饲组小鼠脾T细胞对ConA的反应性增强,瘤细胞活力下降。S_(180)荷瘤鼠生存期延长,死亡百分率下降。基于多抗甲素的肽聚糖本质,多抗甲素能激活单核—巨噬细胞和黄芪可诱生Υ-干扰素,本文提出:Υ-干扰素对α-肿瘤坏死因子合成和杀伤作用的正向调节可能是黄芪水提物增强多抗甲素抗肿瘤作用的重要机理。     

超声引导~(32)P胶体注射治疗甲状腺腺瘤

目的　探讨超声引导32 P胶体注射治疗甲状腺腺瘤的应用价值。方法　 6 8例患者中 3 8例为实性腺瘤 ,3 0例为腺瘤囊性变 ,分别给予每cm31 .0～ 1 .5mL注射液 (32 P胶体含量为 3 7～74MBq)及 1 8.5～ 3 7MBq·mL- 1 瘤内注射治疗。治疗前后行血常规、甲功、超声等检测。 3 2例病人行 6～ 3 6个月不等期随访。结果　实性腺瘤组总治愈率 71 .0 5 % (2 7/ 3 8) ,腺瘤囊性变组总治愈率 86 .6 7% (2 6 / 3 0 )。血象、甲状腺轴激素治疗前后无显著改变 ,两组病例均未见明显的副反应。结论　超声引导32 P胶体注射治疗甲状腺腺瘤疗效确切 ,且简便、安全 ,可替代部分中小甲状腺瘤的外科治疗。     

茴香枳术汤对粘连性肠梗阻大鼠血浆D-乳酸的影响

目的观察茴香枳术汤对粘连性肠梗阻大鼠血浆D-乳酸的影响,了解其在粘连性肠梗阻的作用机制。方法制备大鼠粘连性肠梗阻模型,随机分为正常组、模型组、大承气汤组及茴香枳术汤低(1.13 g/mL)、中(2.25 g/mL)、高(3.38 g/mL)剂量组。给予药物治疗后第3、5、7天,共3个时间点,每时间点6只;股动脉取血,Brandt法测定血浆D-乳酸含量。结果与正常组比较,模型组血浆D-乳酸含量显著增加(P<0.05);与模型组比较,大承气汤组及茴香枳术汤低剂量组、中剂量组和高剂量组血浆D-乳酸含量显著下降(P<0.01)。结论茴香枳术汤有很好的治疗粘连性肠梗阻的作用。其主要作用与恢复肠屏障功能有关。     

HPLC-荧光法测定土大黄苷平衡溶解度和油水分配系数

目的建立测定土大黄苷平衡溶解度和油水分配系数的高效液相色谱(HPLC)-荧光法。方法采用SHIMPACK VP-ODS色谱柱;以甲醇-水(40∶60)为流动相,流速为0.8mL/min;进样量为10μL;激发波长为320nm,发射波长为410nm,测定土大黄苷在37℃水和不同pH值介质中的平衡溶解度以及在正辛醇-水、正辛醇-缓冲溶液体系中的油水分配系数。结果在37℃条件下,土大黄苷在水中的平衡溶解度为109.54mg/L;在pH为8.0时溶解度最大,为126.12mg/L;土大黄苷在正辛醇-水中的油水分配系数logP值为0.53;在pH为6.0的缓冲溶液中油水分配系数最大,logP为0.76。结论本研究建立了HPLC-荧光检测法,成功应用于测定土大黄苷平衡溶解度和油水分配系数,为土大黄苷剂型的开发及药代动力学研究提供了理论依据。     

伏安法测定PM2.5中的硝酸根离子

利用多孔铜修饰电极检测PM 2.5中硝酸根离子的含量.探讨了硝酸根离子在多孔铜修饰电极上的电化学性质.研究了硝酸根离子的响应电流与浓度的关系.结果表明:硝酸根离子还原峰电流与其浓度在6.67×10-6 ～2.00×10-4 mol/L范围内呈良好的线性关系,相关系数r=0.998,方法检出限为2.00×10-6 mol/L.将该方法用于PM2.5中硝酸根离子含量的检测,测定结果与用分光光度法测定相近,说明该电化学测定方法可以用于PM2.5中硝酸根离子含量的检测结果是可靠的,具有一定的实用价值.