融合基因Aβ-HBcAg的原核表达及表达蛋白的免疫反应性和免疫原性分析

目的　研究 β 淀粉样肽 (β amyloidpeptide,Aβ)与乙型肝炎核心抗原 (HBcAg)融合基因Aβ HBcAg的原核表达 ,检测融合蛋白的免疫反应性及免疫原性。方法　将重组质粒pBV2 2 0 /Aβ HBcAg转化大肠杆菌DH5α,温控表达 ,超声破碎细菌 ,通过SDS PAGE、考马斯亮蓝染色和ELISA等方法 ,观察Aβ HBcAg的表达及融合蛋白的免疫反应性 ;用融合蛋白免疫Balb/c小鼠 ,ELISA法检测血清中的抗 Aβ抗体和抗 HBc抗体滴度。结果　融合蛋白以包涵体的形式存在于沉淀中 ,表达量为菌体沉淀的 5 % ,融合蛋白既有Aβ的免疫反应性 ,又有HBcAg的免疫反应性。Balb/c小鼠经过 3次免疫后 ,血清中的抗体滴度很低 ,继续强化免疫 2次后 ,血清中抗 Aβ抗体滴度、抗 HBc抗体滴度分别上升为 1∶80 0和1∶32 0 0。结论　融合基因Aβ HBcAg可在大肠杆菌DH5α中表达 ,表达蛋白有一定的免疫反应性和免疫原性 ,但表达量较低 ,免疫反应性和免疫原性较弱。提示融合基因Aβ HBcAg的表达量和融合蛋白免疫原性的提高尚需进一步研究。     

单纯疱疹病毒2型gG-2"独特区"基因的原核表达及其血清学诊断价值

目的在大肠杆菌中表达HSV-2的gG-2"独特区"基因(gG-2T)并对其免疫学特性进行初步研究。方法克隆HSV-2的gG-2T,并在大肠杆菌中表达gG-2T融合蛋白。通过Western blot和间接ELISA鉴定融合蛋白的活性。结果通过原核系统表达的gG-2T融合蛋白可以与GST多克隆抗体结合并在46 ku附近出现特异性结合条带。并且能够与确诊的HSV-2患者血清反应,而不与HSV-1患者血清和正常人血清反应。结论获得了HSV-2 gG-2T融合蛋白,它可以与GST多克隆抗体特异性结合并且可以同HSV-2型患者血清特异性反应;获得的gG-2T蛋白为研究以gG-2蛋白作为靶区域的诊断试剂盒和疫苗研发打下实验基础。     

滴金法检测幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A抗体试剂盒的研制及应用

目的　建立一种快速、简易的检测血清中抗幽门螺杆菌 (Hp)细胞毒素相关蛋白A(CagA)抗体的胶体金免疫渗滤法 (DIGFA)。方法　采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒 ,标记葡萄球菌A蛋白 (SPA) ,将重组的CagA抗原固定于硝酸纤维素膜上 ,制成免疫渗滤试剂盒。血清中抗CagA抗体与试剂盒上金标记物及硝酸纤维素膜上的固相抗原结合后 ,形成肉眼可见的红色斑点。结果　用DIGFA与酶联免疫吸附试验 (ELISA)试剂盒对比检测了 32 6份血清标本中抗CagA抗体 ,本方法的特异性为 95 .8% ,敏感性为 97.3% ,两种方法符合率为 96 .6 %。结论　DIGFA检测血清中的抗CagA抗体特异性强、灵敏度高、简便快速 ,无需特殊仪器设备 ,有广泛应用价值     

葎草花粉致敏蛋白多克隆抗体的制备及其在筛选致敏蛋白组分的应用

目的制备、鉴定兔抗葎草花粉蛋白多克隆抗体,并初步应用于葎草花粉致敏蛋白组分的筛选。方法用葎草花粉变应原浸液免疫兔,获得高效价抗葎草花粉蛋白抗血清,应用琼脂免疫双扩散、ELISA法以及Western blotting鉴定产生的抗体。同时对葎草花粉过敏性哮喘患者血清进行Western blotting检测。结果兔抗血清效价经ELISA检测,效价>1∶10000,免疫双扩散结果表明抗血清只与葎草花粉变应原形成特异性IgG沉淀线,Western blotting检测兔抗血清IgG可以特异性识别葎草花粉8种蛋白组分,分子质量分别为100、88、76、69、65、55、49、38 ku,患者血清IgG可以识别5种蛋白组分,分子质量分别为100、76、55、493、8 ku。结论制备的兔抗血清具有较高效价和较好的特异性,应用该血清筛选出的葎草花粉致敏蛋白组分与患者血清筛选的组分相似,因此可进一步应用于初筛cDNA表达文库。     

酶联免疫吸附试验检测流行性出血热患者IgM抗体报告

本文介绍一种检测EHF特异性IgM抗体的ELISA间接法,在临床诊断应用中分别对耳血及静脉血清进行了平行检查,并与IFAT法进行了比较。结果表明:19例临床诊断为EHF患者耳血中ELISA—IgM阳性率为100％(19/19),IFAT—IgM阳性率为89.47％(17/19),且ELISA耳血IgM抗体滴度>IFAT耳血IgM抗体滴度者为68.47％(13/19)。实验发现,耳血ELISA—IgM抗体滴度明显高于静脉血清ELISA—IgM抗体滴度4倍者占73.68％(14/19)。作者认为,该方法特异性、敏感性较好,操作简便,只需要采用耳血就可以达到早期,快速诊断目的,值得推广使用。     

用酶标记SPA酶联免疫吸附试验(EliSA)及免疫酶染法检查疱疹病毒抗体的对比(摘要)

<正> 为了建立一种对病毒感染性疾病早期诊断的实验室方法,我们采用目前国内外认为标记简单、性质稳定、特异性高,简便易行的酶标记萄葡球前A蛋白(SPA)作为第二抗体,用于免疫酶染法及ElisA法,检测了53份宫颈癌、宫颈炎病人血清中的单纯疱疹病毒抗体。对比分析,认为免疫酶染法优于ElisA法: (1)酶染法简单易行、方法稳定、不需要特殊设备,在普通显微镜下即可观察结果,而ElisA法需要选择合适的载体,且易受多种因素影响,如抗原要较纯,浓度要较高,温度要恒定等。     

烧伤早期离体肺泡巨噬细胞CD14蛋白表达对细胞因子影响的实验研究

目的　探讨烧伤血清对离体大鼠肺泡巨噬细胞 (AM )CD14膜蛋白 (mCD14 )表达变化及其对AM分泌细胞因子的影响。方法　分离并收集大鼠AM ,以烧伤血清及LPS刺激 ,再分别以抗CD14抗体作用 ,用免疫组化法检测mCD14蛋白表达变化 ,ELISA检测培养液中TNF α和IL 6浓度。结果　烧伤血清和LPS刺激后 ,AM的CD14蛋白表达从 1h起就开始增加 ,2h达峰值 ,尔后逐渐减弱 ,持续 12h ,细胞因子分泌相应增加 ;抗CD14抗体阻断CD14作用后 ,CD14的蛋白表达显著降低 ,细胞因子分泌亦相应减少。结论　严重烧伤后可能随着LPS增加 ,通过激活内毒素信号传导通路 ,使AM分泌细胞因子增加 ,这种作用可以被抗CD14抗体所阻断 ,提示严重烧伤后可以通过调节CD14的作用而减少细胞因子的合成和分泌。     

自身抗体——肿瘤新的早期诊断标志物

肿瘤标志物是指肿瘤细胞本身存在的或分泌的、能反映肿瘤的存在和生长的特异性物质.血清肿瘤标志物已被广泛应用于肿瘤的检测,但是这些标志物的检测是基于肿瘤抗原,在肿瘤的筛选和诊断方面存在很多的不足.本文就目前基于肿瘤患者体内针对肿瘤抗原的自身抗体作为肿瘤诊断的标志物进行综述.这种检测方法是利用肿瘤抗原来检测肿瘤自身抗体,其特异性和敏感性优于传统的检测方法,并为肿瘤的筛选和诊断提供了新的手段.     

2009年西安地区手足口病病原血清型分析及肠道病毒71型基因特征

目的 了解西安地区2009年手足口病的肠道病毒血清型;评价IgM抗体检测在肠道病毒71(EV71)感染早期诊断中的意义;分析西安地区EV71 VP1基因特征.方法 分别在西安市城区医院和郊县医院采集的标本共185份,RT-PCR法检测标本中的病毒核酸;采集EV71核酸阳性的急性期病例血液标本,ELISA法检测血清中IgM抗体;细胞培养分离EV71,扩增其VP1区.测序并与EV71各血清型代表株序列比对,进行进化分析.结果 在185份标本中,156份检出肠道病毒核酸(84.32%),其中72.4%为EV71,17.3%为柯萨奇A16(CA16);63份EV71核酸阳性的急性期病例血清标本中,45份EV71 IgM抗体阳性(71.43%);分离到的12株EV71均为C4亚型.结论 2009年西安地区手足口病病原以EV71为主,且主要是C4亚型;ELISA方法可用于EV71感染的早期诊断.     

免疫酶联吸附试验检测流行性出血热抗体的初步报道

本文着重介绍ELISA检测出血热患者血清IgG抗体方法,并与IFAT进行比较,两方法阳性符合率及阴性符合率是令人满意的,特别是EHF患者发热初期ELISA抗体阳性检出率明显高于IFAT法。实验发现,临床重危型患者发热期ELISA抗体滴度多数高于IFAT抗体滴度2～4倍,而恢复期则正好相反。故该方法适用于EHF临床诊断及流行病学调查。因ELISA系借助酶标检测仪判读结果。数据准确,无检测仪器者可以目测此色,判断结果,故便于基层人员推广使用。     

滑油污染度对车用柴油机台架磨合过程影响研究

利用油液检测技术中光谱分析、颗粒度分析和铁谱分析方法，研究了滑油污染度对CA6110Z-07Y型柴油机磨合过程的影响，光谱分析和颗粒粒度分析结果表明：1号机和3号机磨损性元素Fe，Cu，Al和Pb的含量在25～30min有一个明显下降量，说明柴油机润滑油完全经过滑油滤器的循环周期约为25min．由于3台机使用的是国产CD40润滑油，所有磨损性元素Fe，Cu，Al和Pb的含量在45min的磨合过程中均呈上升趋势，表明45min后仍未达到良好的磨合结果．同时，铁谱分析也证实了光谱分析和颗粒计数的结果．     

ITS与病体系统诊治

由于交通系统是一个复杂的巨系统,本文遵照钱学森院士原始的综合集成方法对城市交通系统进行研究, 结合集对分析、可拓学等新理论,提出病体交通系统及其诊治系统模型,并提出若干解决方法,最后介绍了一个具体的应用实例。     

HUMAN PAPILLOMAVIRUS TYPE 16 L1 PROTEIN CAN BE EXPRESSED IN LIVE ATTENUATED SHIGELLA FLEXNERI 5A STRAIN SH42

Cervicalcanceristhesecondmostcommon canceramongwomenworldwide,anditaccountfor thehighestmortalityindevelopingcountries.There areabout600000newcasesdiagnosedanditcauses aboutaquartermillionwomendeathperyear[1]. Highrisktypehumanpapillomavirusinfection (suc…     

用动物模型定位、克隆复杂性疾病的易感基因:以类风湿关节炎动物模型为范例

基于复杂性疾病的临床异质性,或称表型异质性;遗传异质性,或称位点异质性;多基因的微效作用;异位显性(epistasis);拟表型(phenocopy);环境因素的作用等特点,鉴定复杂性疾病的易感基因是一种艰巨有时难以完成的任务。近交系动物遗传背景清晰,动物实验可控制环境因素的干扰,以及转基因动物在研究基因功能中独特的作用,应用动物模型为筛选鉴定人类复杂性疾病的易感基因提供了不可替代的工具。以大鼠类风湿关节炎模型为例,定位克隆易感基因步骤包括:①选择亲代近交系,建立关节炎模型;②分离育种,连锁分析、确定数量性状位点(QTLs);③建立Congenic系、窄化QTL区域;④位置克隆基因;⑤易感基因的功能验证。我们应用这一策略从朴日斯烷(Pristane)诱导的关节炎大鼠模型中已筛选出十余个控制关节炎发生发展的非MHC基因位点,在此基础上克隆的Pia4基因被鉴定为是中性粒细胞胞浆因子1(Ncf1)。说明该研究策略是完全可行的,并且可能发现新的功能基因或已知基因的新功能。     

复杂地基上高土石坝坝体稳定可靠度分析

以可靠度理论为基础，对复杂地基上兴建的高土石坝的坝体稳定性及坝体－地基稳定性进行了分析研究。使用Ｊａｃｏｂｉ正交变换法将要关的随机变量转变为相互独立的随机变量，采用Ｍｏｎｔｅ－Ｃａｒｌｏ方法计算可靠度以冶水库堆石坝为例，使用定值方法和可靠度方法对土石坝稳定性进行了分析计算。结果表明，在相同的条件下，定值法计算得到的稳定临界滑面不唯一，且各临界滑面的失效概率不一致。定值法中使用的安全系数与其滑面稳定     

A Statistical Parameter Analysis and SVM Based Fault Diagnosis Strategy for Dynamically Tuned Gyroscopes

Gyro's fault diagnosis plays a critical role in inertia navigation systems for higher reliability and precision. A new fault diagnosis strategy based on the statistical parameter analysis (SPA) and support vector machine (SVM) classification model was proposed for dynamically tuned gyroscopes (DTG). The SPA, a kind of time domain analysis approach, was introduced to compute a set of statistical parameters of vibration signal as the state features of DTG, with which the SVM model, a novel learning machine based on statistical learning theory (SLT), was applied and constructed to train and identify the working state of DTG. The experimental results verify that the proposed diagnostic strategy can simply and effectively extract the state features of DTG, and it outperforms the radial-basis function (RBF) neural network based diagnostic method and can more reliably and accurately diagnose the working state of DTG.     

硅藻土改性沥青胶浆性能研究

通过常规试验和美国SHRP的动态剪切流变试验、弯曲梁蠕变试验,研究硅藻土改性沥青胶浆的技术性能和流变特性,并将常规试验和SHRP试验结果进行对比分析,结果表明:硅藻土可以大大改善沥青胶浆的高温稳定性和抗老化性能,常规试验不能很好地评价硅藻土改性沥青胶浆的技术性能.     

基于OrCAD的可控硅开关功放的仿真研究

介绍了一种特殊的大功率可控硅开关功率放大器,分析了其电路在不同工作频率下的3种工作状态,并就自然换流状态建立了其等效电路模型,基于OrCAD环境下设计了低阻高效的循环模拟开关,并利用它仿真了自然换流状态下的等效电路模型,这种仿真方法能计算出功率放大器在任意点的电流电压值.且仿真数据能较真实地反映系统在任何时刻的工作状况.     

RADIOFREQUENCY ABLATION USING HYPERTONIC SALINE SOLUTION INSTILLATION: AN EX VIVO STUDY

Objective To determine whether radiofrequency ablation using hypertonic saline solution instillation can increase the extent of thermally mediated coagulation in ex vivo pig liver tissue. Methods Fifty-six radiofrequency ablation lesions were produced in fresh ex vivo pig's liver. According to different saline solutions, the lesions were divided into six groups: 25% acetic acid, 18% NaCl, 10% NaCl, 5% NaCl, 0.9% NaCl, and distilled water. After radiofrequency ablation, the lesions size and morphology were measured and compared.Results Using different instillation, the volume of coagulation necrosis was different: 25% acetic acid >18% NaCl >10% NaCl >5% NaCl >0.9% NaCl>distilled water. Conclusion Radiofrequency ablation using hypertonic saline solution instillation can increase the volume of radiofrequency ablation induced necrosis.     

Cox比例风险模型在原发性肝癌患者凝血功能分析中的应用

目的应用Cox比例风险模型探讨原发性肝癌的临床分期和患者生存期与凝血功能的相关性,为临床治疗和预后提供可靠的评价指标。方法对228例原发性肝癌患者、52例普通肝病患者和52例健康对照者进行了血浆凝血功能检测,并观察肝癌分期与凝血功能的关系;进行随访并收集相关的预后资料。采用Cox比例风险模型分析凝血指标和原发性肝癌晚期患者生存期及血栓性疾病的关系。结果原发性肝癌患者凝血指标变化不仅与健康对照组的差异显著,而且随着肝癌分期程度的加重,凝血功能障碍加剧(P<0.05);D-聚体(D-dimer)、纤维蛋白原降解产物(FDP)、纤维蛋白原(FIB)和血小板(PLT)水平与晚期肝癌患者的远期生存呈负相关。结论凝血功能指标的检测能从多方面及时、准确地反映肝癌患者肝脏的损害程度及危险程度,动态地观察凝血功能指标有利于对肝癌患者的病情进行更好的监测和治疗。