HLA-I类基因多态性与白血病易感性的关联性研究

目的探讨白血病易感性与HLA-I类基因多态性之间的关联性,寻找白血病的易感基因。方法采用序列特异性寡核苷酸探针杂交技术(PCR-SSO)对65例白血病患者和48例正常对照组健康者进行HLA-A、B基因分型。结果在等位基因HLA-A、B中,白血病患者的HLA-A01、B38基因的基因频率高于正常对照组(P<0.05),而HLA-A11基因的基因频率明显下降(P<0.05)。结论基因A01、B38对白血病有遗传易感作用,而基因A11对白血病有遗传拮抗作用。     

4313份血样细菌培养结果分析

目的收集血培养阳性标本的实验室参数和临床参数,结合临床随访和抗感染治疗转归,分析真正致病菌的构成和实验室特征。方法前瞻性研究2013年3月到2015年3月我院4 313份临床送检血培养标本中分离出的483株病原菌,对每份阳性培养结果进行实验室及临床感染参数的收集,并跟踪进行临床随访,了解临床责任医生的经验判断及针对性抗生素治疗的临床转归。综合分析后确定真正的致病菌与污染菌。结果 483株阳性分离菌中,最终判定为致病菌的331株(68.5%),污染菌97株(20.1%),不确定致病与否的55株(11.4%),其中,致病菌中大肠埃希菌所占比例最高,为41.2%,污染菌中凝固酶阴性葡萄球菌比例最高,为75.3%;仅从需氧瓶或厌氧瓶中检出的病原菌为253株(占52.4%),其中大肠埃希菌在厌氧瓶中检出率(23.9%)高于需氧瓶(13.8%)(P<0.05);判定为污染的97株阳性分离菌中,仅从1瓶中分离的90株(92.8%),两瓶以上分离的7株(7.2%)(χ2=142,P<0.05),24h内报阳的34株(35.1%),48h内报阳的77株(79.4%),48h内报阳污染菌的比例高于24h(χ2=38.935,P=0.000),差异有统计学意义。结论血培养中污染菌的确立不能简单依靠实验室或临床参数,要同时结合临床医生经验及临床治疗反应综合判断;对于实验室判断污染与否的指标,报阳瓶数和报阳时间依然是2个具有重要价值的因素;重视厌氧瓶的送检更有利于大肠埃希菌的检出。     

碘化二甲基木防己碱对蟾蜍腹直肌N_2受体的动力学研究

本文研究了碘化二甲基木防己碱(DTI)对N_2受体的拮抗作用,并以箭毒为对照。在DTI的作用下,ACh对蟾蜍腹直肌的累加剂量—效应％曲线平行右移,测得其pA_2为5.73,K_B为2.90X 10~(-6)M;而箭毒分别为5.89和2.84X 10~(-6)M。以log(~(X-1)对DTI浓度的负对数(-log~[B])作图,其回归线斜率为-0.92;箭毒的回归线斜率为-0.95,均同竞争性拮抗剂的理论斜率-1相接近。结果表明,DTI对N_2受体的拮抗性质为竞争性拮抗、其对N_2受体的亲和力与箭毒相当。     

胆囊结石胆汁需氧菌厌氧菌及L型菌的培养鉴定

对５９例结石性胆囊炎患者胆汁同时进行需氧菌、厌氧菌和Ｌ型细菌的培养，分离鉴定和药敏试验。结果∶５７例培养阳性，共检出细菌１１１株，其中需氧菌２６株、厌氧菌３７株、Ｌ型细菌４８株；且以两种以上细菌的混合感染为主。总检出率９４．９％。表明胆囊结石患者同时做需氧菌、厌氧菌和Ｌ型细菌的培养能显著提高病原菌的检出率。药敏试验表明它们各自的抗菌谱不同，３种细菌同时培养对临床准确、合理选择抗菌药物有重要意义。     

白藜芦醇对大鼠急性脊髓损伤保护作用的量效关系研究

目的探讨白藜芦醇(Res)对大鼠急性脊髓损伤保护作用的剂量效应关系。方法采用Allens脊髓打击损伤模型,将60只SD大鼠随机分为6组,每组10只。A组:假手术组;B组:脊髓打击伤组;C组:50mg/kg Res治疗组;D组:100mg/kg Res治疗组;E组:200mg/kg Res治疗组;F组:300mg/kg Res治疗组。术后24、48、72h运用BBB法分别进行运动功能评分;72h处死动物取材,HE染色、Nissl染色观察脊髓组织病理学变化。结果 BBB评分提示24、48、72h三个时间点C、D、E、F组较B组大鼠后肢运动功能均有不同程度的改善;72h时间点,C、D、E、F组较B组运动功能评分差异有统计学意义(P<0.05);Res组较B组的病理组织结构均有不同程度的改善;E组及F组运动功能评分及病理组织结构优于C组及D组,E组与F组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Res对大鼠脊髓损伤有较好的保护作用,并呈一定的剂量效应关系;200mg/kg是Res干预SCI的最佳剂量。     

幽门螺杆菌ahpC基因的克隆与原核表达

目的 构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)ahpC基因的原核表达系统,表达并纯化Ahp蛋白.方法 用PCR方法从中国分离株MEL-Hp27的染色体DNA中扩增出ahpC基因片段,将目的基因插入表达载体pET-30a中,构建重组质粒pET30a-ahpC.重组质粒经DNA测序鉴定后转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达.采用镍离子亲和层析纯化蛋白,并用SDS-PAGE鉴定.结果 PCR扩增的ahpC基因长度为594bp,经酶切和测序分析,插入到载体的基因与GenBank公布的序列相似性达99%;SDS-PAGE显示,经IPTG诱导出分子质量为23ku的目的蛋白,且产量较高.结论 成功构建了ahpC表达载体pET30a-ahpC,并在大肠杆菌中高效表达.     

人乳头瘤病毒16型(湖北株)E7蛋白在NIH/3T3细胞中的表达和定位

目的　将带有人乳头瘤病毒 1 6型 (湖北株 )E7基因的真核表达载体 pL(E7 HB)SN导入NIH/3T3细胞进行瞬时表达。方法　重组质粒转染 3T3细胞通过DNA 磷酸钙共沉淀法 ;E7基因表达的检测采用RT PCR和间接免疫荧光实验。结果　E7基因导入真核细胞后能有效转录并表达E7蛋白 ,通过免疫荧光染色可看到E7蛋白主要定位在胞浆中 ,细胞核中也有 ,但量较少。结论　这可能和湖北株HPV1 6E7基因发生突变有关。     

产孢海洋真菌等离子体诱变活性突变株筛选改进

以具有抗肿瘤抗菌活性的产孢子海洋真菌Aspergillus unguis DLEP2008001为出发菌株,对其采用介质阻挡放电等离子体技术进行了诱变处理.在采用肿瘤细胞替代模型——DNA损伤修复基因缺陷型的大肠杆菌E coli AB3027进行突变株活性筛选的过程中,比较了三种筛选方案,最终确定了一种使用96孔板液体摇床发酵的筛选方法,该方法与通常的液体深层发酵有较好的对应性,且方便易行.通过该方法,灵敏快捷的筛选出了基于DNA损伤机制的高活性突变株,同时也显示介质阻挡放电等离子体技术对提高该菌株生物活性具有显著效果.     

一氧化氮对培养的大鼠垂体黄体生成素和卵巢雌二醇释放的影响

目的　探讨一氧化氮对垂体前叶黄体生成素 (LH)及卵巢雌二醇 (E2 )释放的调节作用。方法　在大鼠垂体组织培养液及卵巢组织培养液中分别加入不同浓度的一氧化氮生成抑制剂N 硝基 L 精氨酸 (NNLA)或N 硝基 L精氨酸甲酯 (NAME)和一氧化氮供体硝普钠 (SNP) ,孵育 6 0min ,收集培养液 ,用放射免疫法测定其中LH、E2 含量。结果　NNLA增加垂体组织培养液中的LH含量 ,NAME可增加卵巢组织培养液中的E2 的含量 ,而SNP则使LH及E2 含量减少 ,这些作用具有剂量依赖性。当NNLA或NAME的浓度为 5× 10 -3 mol·L-1时 ,LH及E2 含量分别增加至基础水平的 5 .5倍及 2 .0倍 ,而当SNP浓度为 5× 10 -3 mol·L-1时 ,LH及E2 含量则分别减至基础水平的 5 0 %及 36 %。结论　一氧化氮抑制垂体前叶LH及卵巢E2 的释放 ,可能在垂体及卵巢的功能调节中起重要作用。     

填埋场快速稳定的功能菌筛选及复合菌系构建

为加速填埋场的稳定化进程,采用传统的微生物学方法,从环境中经反复筛选及多次传代培养得到性能稳定的功能菌.根据功能菌的功能,组合成不同的功能菌群,通过研究各组功能菌群产酶的能力和对填埋场稳定化指标的影响,构建了加速填埋场稳定化进程的复合菌系.结果表明:在性能稳定的功能菌中,含9株纤维素降解菌,8株渗滤液化学需氧量COD(chemical oxygen demand)降解菌,7株絮凝剂产生菌;由所有菌株共同组成的功能菌群Ⅶ#的产酶能力最强,引入填埋场可有效加速填埋垃圾的生物降解,促进填埋场稳定化,使填埋垃圾有机质生物降解率、胡敏酸的百分含量和沉降率较未添加功能菌群对照组分别高26.23%、9.18%和10.01%.     

肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶的基因分型

目的研究西安交通大学医学院第一附属医院临床分离的肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的基因型分布特点。方法收集从临床住院患者中分离的肺炎克雷伯菌83株,ESBLs表型确认试验采用双纸片协同法,ESBLs耐药基因CTX-M、TEM和SHV的检测采用PCR法。结果 83株肺炎克雷伯菌中表型确证实验有76株ESBLs阳性,占91.6%;PCR法检测到携带有耐药基因的菌株41株,CTX-M、SHV和TEM 3种耐药基因的构成比分别为78.1%(32/41)、43.9%(18/41)和34.2%(14/41);在41株产酶菌株中,携带1种基因型的占39.0%(16/41),携带2种基因型的占34.2%(14/41),携带3种基因型的占14.6%(6/41),携带4种基因型的占9.8%(4/41),携带5种基因型的占2.4%(1/41)。结论该院肺炎克雷伯菌ESBLs的基因型主要以CTX-M型和SHV型为主,其基因型分布复杂。     

黄芪根腐病菌分离鉴定及细胞壁降解酶活性比较

为了明确甘肃渭源黄芪根腐病致病菌的类型及致病力分化情况.采集具有典型黄芪根腐病状的植株并分离得到6株病原真菌,分别编号为GF1、GF2、GF3、GF4、GF5、GF6.通过形态特征和DNA-ITS及EF-1α两组基因序列分析对6株病原真菌进行鉴定,并比较了其生长速率、产孢量和致病力.对6株病原真菌的4种纤维素酶(Cx、βG)和2种果胶酶(PG、PMG、PGTE、PMTE)的酶活力进行了测定.6株黄芪根腐病原菌均为茄腐镰刀菌(Fusarium solani);菌株GF3的致病力最强,接种7 d后的病斑直径为1.43 cm,且菌株GF3的生长速率最快,培养9 d后的菌落直径为8.5 cm,培养10 d后的产孢量最大,为7.5×10~8个/皿;6株病原菌产果胶酶的活性均高于纤维素酶的活性,其中菌株GF3产生的的酶活力均高于其他菌株,产2种纤维素酶(Cx、βG)的酶活力也均高于其他菌株.甘肃渭源黄芪根腐病致病菌的主要类型为茄腐镰刀菌(Fusarium solani),其中菌株GF3的致病力最强,且其产的2种果胶酶(PG、PMG)和纤维素酶(Cx、βG)的酶活力高于其他菌株.     

肉毒中毒——一起五例报告

肉毒梭状芽胞杆菌(Clostidium Botnliaum)为固紫阳性有芽胞的,严格厌氧生长的腐败寄生菌。被泥土严重污染的食物带有此菌,也存在于家畜的粪便中,故在自然界分布什广,几乎无处不在。依菌株的抗原性不同而分为A、B、C、D、E、F六种血清型:使人中毒者主要为A、B、     

淫羊藿提取物的雌激素样作用研究

目的 评价淫羊藿提取物的雌激素样作用.方法 采用小鼠子宫增重实验、雌激素受体阳性细胞系(MCF-7)细胞增殖及拮抗实验,评价淫羊藿及淫羊藿苷的雌激素样作用及其可能机制.结果 与阴性对照组比较,淫羊藿及淫羊藿苷能使子宫系数由0.097±0.008明显增加至0.156±0.018及0.152±0.016,且用药前、后动物体重由(18.9±1.3)g分别增至(19.8±1.3)g及(20.03±1.3)g,增幅明显高于阴性对照组(P<0.05);淫羊藿苷可使血清雌激素E2由(132.22±11.45)ng/L增高至(147.73±12.43)ng/L,FSH水平由(50.15±3.36)μg/L降低至(44.47±2.46)μg/L(P<0.05),但淫羊藿组雌激素E2水平无明显改变;在24、48、72 h,淫羊藿及淫羊藿苷对MCF-7细胞的增殖均有明显的促进作用(P<0.05),分别由0.238±0.043、0.387±0.051、0.563±0.083增至0.362±0.045、0.521±0.046、0.648±0.043及0.324±0.043、0.465±0.034、0.622±0.079;72 h加入ICI后,细胞增殖明显受到抑制,细胞增值率分别降至99.461%、94.434%.结论 淫羊藿及淫羊藿苷具有雌激素样作用,且其促细胞增殖作用可能是通过雌激素受体(ER)介导产生的.     

葡萄球菌的耐药性分析

目的研究医院内葡萄球菌属细菌的耐药状况,为临床合理、有效地使用抗生素提供依据。方法用K-B法对采集的咽拭子标本中分离到的葡萄球菌进行药敏试验,采用双重PCR方法检测葡萄球菌的FemA及MecA基因。FemA和MecA基因均为阳性者为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)菌株,仅MecA基因阳性者为耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(methicillin-resistant coagulase-negative Staphylococci,MRCNS)。结果从采集的361份标本中,分离出葡萄球菌220株,其中金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)110株。住院患者、医护人员葡萄球菌标本中凝固酶阴性葡萄球菌(coagulase-negative Staphylococci,CNS)分别占84/151(55.63%)、13/25(52.00%),均高于正常人群的13/44(29.55%)(P<0.05);住院患者中的耐甲氧西林葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus,MRS)对除万古霉素外的常用抗生素均有明显的耐药性。住院患者分离的67株SA中检测到MRSA菌株31株(46.27%);84株CNS中检测到MRCNS菌株26株(30.95%)。结论住院患者标本中的葡萄球菌对常用抗生素均有明显的耐药性,且CNS的比例显著高于正常人群;其中MRS几乎对所有抗生素都表现为耐药,表明MRS已成为医院内感染的重要致病菌。用双重PCR方法检测MRSA,比药敏试验简单,且快速、准确、敏感、特异性强,具有很好的临床应用价值。     

Fas相关磷酸酯酶-1在卵巢癌中的表达及意义

目的　探讨Fas相关磷酸酯酶 1(FAP 1)在卵巢癌发病中的作用。方法　采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白 过氧化物酶染色法 (SP法 )检测 5 2例卵巢癌及 15例卵巢良性肿瘤组织标本中FAP 1蛋白的表达水平 ,设正常卵巢组织为对照组 (10例 )。结果　FAP 1蛋白在正常卵巢中未见表达 ,良性肿瘤中的表达率为 2 6 % ,而在交界性肿瘤与恶性肿瘤中的阳性表达率分别为 6 9%和 77% ,与前两者相比差异有显著性 (P <0 .0 1) ,而后两组间无显著性差异 (P >0 .0 5 )。FAP 1的表达与卵巢癌的临床分期、病理分级相关 (FIGOⅢ～Ⅳ期高于Ⅰ～Ⅱ期 ,病理分级Ⅱ～Ⅲ级高于Ⅰ级 ,P <0 .0 5 ) ,而与组织学类型和转移性无明显相关性。结论　FAP 1在卵巢癌组织中有广泛表达 ,且在临床分期晚和病理分级高的组织中表达增高 ,可能对于卵巢癌的发病机制及恶变程度具有重要意义     

基于CRISPR对大肠埃希菌O157∶H7的检测

目的基于成簇的规律间隔短回文重复序列(CRISPR),建立对大肠埃希菌O157∶H7的新型检测方法。方法应用PCR扩增实验室保存的443株肠道细菌(310株非O157∶H7大肠埃希菌、35株大肠埃希菌O157∶H7、89株志贺菌和9株沙门菌)的CRISPR1和CRISPR2,并将PCR产物测序;提取CRISPR database数据库中(标准法)100株肠道细菌(47株非O157∶H7大肠埃希菌、5株大肠埃希菌O157∶H7、9株志贺菌和39株沙门菌)的CRISPR1和CRISPR2序列。使用CRISPR Finder在线软件分析PCR产物测序序列和CRISPR database数据库的CRISPR序列。Clustal X软件进行间隔序列比对。比较标准法和PCR扩增CRISPR两种方法检测大肠埃希菌O157∶H7的一致性。结果共分析543株肠道细菌,其中75.6%的非O157∶H7大肠埃希菌、75.5%志贺菌、91.7%沙门菌和95%O157∶H7大肠埃希菌含有CRISPR1,其间隔序列数目为3~26、2~9、2~32、3。57.1%的非O157∶H7大肠埃希菌、77.6%志贺菌、85.4%沙门菌和100%O157∶H7大肠埃希菌含有CRISPR2,其间隔序列数目为1~20、1~6、2~27、1或4个。95%的O157∶H7大肠埃希菌的CRISPR1和90%CRISPR2分别含有3条独特间隔序列(S1-1,S1-2,S1-3)和1条独特间隔序列(S2-1)。间隔序列比对结果显示,S1-1+S1-2+S1-3和S2-1检测O157∶H7大肠埃希菌的特异性分别是100%和99.6%。标准法检测和PCR扩增CRISPR1和CRISPR2检测大肠埃希菌O157∶H7的一致性分别达99.6%和99.3%。基于CRISPR检测大肠埃希菌O157∶H7在模拟样品中的应用,结果显示在原样品大肠埃希菌O157∶H7浓度约2.3CFU/mL时,经12h增菌后即能检测出来。大肠埃希菌O157∶H7聚类分析显示,40株O157∶H7大肠埃希菌可分为3类。结论基于CRISPR的大肠埃希菌O157∶H7的检测方法,可以作为监测大肠埃希菌O157∶H7感染和高毒株大肠埃希菌O157∶H7有价值的流行病学工具。     

一氧化氮对盐胁迫下玉米种子萌发及幼苗生长的影响

以150 mmol/LNaCl模拟盐渍化土壤中盐分胁迫状况,研究了外源一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)对盐分胁迫下玉米种子萌发及幼苗生长的影响.结果表明:不同浓度的SNP均能明显提高盐分胁迫下玉米种子的发芽率和发芽指数;当玉米幼苗三片真叶完全展平时,SNP处理可明显提高盐分胁迫下玉米幼苗的根长、株高、茎粗和整株干重,叶片中叶绿素总量也不同程度的增加.表明外源NO可缓解盐分胁迫对玉米种子萌发及幼苗生长的抑制作用,其中以50 μM/L的SNP对盐分胁迫的缓解效果最佳.     

硒、维生素E等抑制低密度脂蛋白氧化修饰作用的比较研究

目的　通过对维生素E、维生素C、β 胡罗卜素、丙丁酚及微量元素硒这五种抗氧化剂对抗Cu2 +氧化修饰低密度脂蛋白 (LDL)的作用进行对比 ,筛选出抗动脉粥样硬化作用较强的抗氧化剂。方法　采用Cu2 +氧化修饰LDL ,以丙丁酚为阳性对照 ,比较各种抗氧化剂干扰硫代巴比妥酸物质 (TBARS)生成的量和琼脂糖凝胶电泳迁移率 (REM )的大小。结果　一定浓度的这五种抗氧化剂在 8h内对LDL的氧化修饰均具有抑制作用 ,维生素E和硒的抗LDL氧化率(65.5% ,63.4% )显著高于丙丁酚 51 .1 % (P <0 .0 5) ,而维生素C和 β 胡萝卜素的抗LDL氧化率 (30 .7% ,2 6.3% )显著低于丙丁酚 (P <0 .0 5)。比较其抗氧化强度 ,依次为维生素E >硒 >丙丁酚 >维生素C >β 胡萝卜素 ;维生素E与硒联合应用的抗氧化率为 57.6% ,明显高于单独应用时的 37.3%和 2 3.7%。结论　维生素E和硒是抑制LDL氧化修饰的优选抗氧化剂 ,二者联合使用有叠加效应 ,能更有效地防治动脉粥样硬化。