新生小鼠睾丸组织异体异位移植物中精子形态及功能的研究

目的采用卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)技术探讨新生小鼠睾丸组织异体异位移植到裸鼠体内后所生成精子的受精能力。方法将含有原始生精细胞的新生1-2 d小鼠睾丸组织异体异位移植到BALB/c-nu/nu免疫缺陷小鼠背部皮下。8周后取出移植物,通过常规染色和电镜技术对生精小管中生精细胞组成和形态进行观察;以薄层明胶水解法检测精子顶体蛋白酶活性;采用ISCI技术检测移植物中具有成熟形态精子的受精能力。结果移植物的HE染色发现,新生小鼠睾丸组织在裸鼠体内已启动并进行精子发生过程,生精小管中含有包括精子在内的所有类型生精细胞;移植物组织经处理后,可计数到具有镰刀头状的长尾精子约1×103个/mg移植物;透射电镜标本中观察到的精原细胞和精母细胞均具有正常超微结构;薄层明胶水解法检测可观察到顶体蛋白酶呈阳性反应的精子;ICSI结果显示,单纯ICSI处理组与ICSI+电激活组均有受精和卵裂现象发生。结论仅含有原始生精细胞的新生小鼠睾丸组织在异体异位移植到裸鼠体内后,可以产生形态正常并具有受精能力的精子。     

经血来源干细胞移植在小鼠卵巢早衰模型中的定位分布

目的探讨经血来源干细胞(menstrual-derived stem cells,MenSCs)移植在卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)小鼠模型中的分布及生长情况。方法通过腹腔注射顺铂构建POF小鼠模型,90只8周龄雌性C57/BL6小鼠随机分为3组,MenSCs移植组:利用携带绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)基因的慢病毒感染MenSCs进行标记,建模后经尾静脉注射GFP标记的MenSCs悬液(5.0×107个/mL)200μL;POF组:建模后小鼠尾静脉注射等量PBS;空白对照组:正常小鼠不予任何处理仅尾静脉注射等量PBS。观察移植后各组小鼠的一般情况,移植后第10天处死小鼠测定血清FSH和E2浓度、检测卵巢组织学变化、卵泡计数以及检测GFP荧光信号在卵巢内的分布和定位情况。结果建模后小鼠与空白对照组小鼠比较体质量减轻、食欲减退、活动减少,POF组小鼠FSH水平显著增高,E2水平显著降低,卵巢间质纤维化明显,各级卵泡数均显著减少。MenSCs移植组小鼠自移植后体质量逐渐增加,食欲增强,活动增多,移植后第10天FSH浓度显著低于POF组;E2浓度显著高于POF组;原始卵泡、生长卵泡及成熟卵泡数均显著高于POF组,卵巢间质纤维化程度较POF组减轻,但各项指标仍与空白对照组间存在差异。荧光显微镜下可见GFP-MenSCs定位于卵巢间质,未见于卵泡及颗粒细胞,肝脏、肾脏、肺组织未见GFP绿色荧光信号。结论 MenSCs移植可向POF小鼠卵巢归巢,定位于卵巢间质,对卵巢组织结构及内分泌功能起到修复作用。     

新生猪胰岛细胞培养移植实验

本文报道了经Ham F_(10)培养的新生猪胰岛细胞功能状况及其植入Sprdgue-Dawley鼠体内后移植物成活情况,并观察了甘草对移植物的影响.其方法是将已培养的新生猪胰岛细胞移植到4组大鼠的腹腔大网膜(第1、2组)肾包膜(第3组)及脑组织(第4组),第1组饮用甘草水、术后8周～11周切除移植物送病理检查,结果显示第1、2组移植物成活可达11周之久,且以饮用甘草水者更好。本实验的目的是寻找来源较广的异种胰腺组织供体。     

椒蒿挥发油对小鼠自身免疫性睾丸炎的影响

目的研究椒蒿挥发油对小鼠自身免疫性睾丸炎睾丸组织结构及血清抑制素B和卵泡刺激素含量的影响。方法健康成年雄性BALB/c小鼠150只,随机分为生理盐水组、模型组及椒蒿低、中、高剂量组(即椒蒿挥发油的体积分数为0.938%、1.875%、3.375%),采用单侧睾丸注射冰醋酸的方法造模。各组都在造模前3d开始灌胃,手术并单侧睾丸注射冰醋酸后继续灌胃,连续灌胃24d后,分别于术后3周、6周、9周取材检测,光镜观察非手术侧睾丸生精小管内的变化,ELISA法检测血清抑制素B和卵泡刺激素的变化情况。结果术后3、6、9周,模型组及椒蒿低、中剂量组血清抑制素B含量均低于生理盐水组,差异有统计学意义(P<0.05),卵泡刺激素含量均高于生理盐水组,差异有统计学意义(P<0.05),术后9周,椒蒿高剂量组血清抑制素B和卵泡刺激素含量与生理盐水组比较,差异无统计学意义(P>0.05),术后9周,椒蒿高剂量组光镜下睾丸组织结构基本正常。结论椒蒿挥发油对小鼠自身免疫性睾丸炎的发生有一定的拮抗作用,同时也跟剂量有关,高剂量组的拮抗效果最好,术后灌胃9周,睾丸组织结构基本恢复正常。     

不同冷冻方法对兔颈总动脉形态结构及活性的影响

目的玻璃化法和慢速冷冻法深低温保存兔颈总动脉,比较两种保存方法对血管活性及形态结构的影响。方法无菌条件下切取兔颈总动脉,采用玻璃化法和慢速冷冻法在-196℃液氮中深低温保存2周,37℃水浴复温。新鲜血管作为对照,分别观察血管的大体、组织学、超微结构;同时对冷冻复温的血管采用组织块法培养并鉴定细胞,通过细胞计数描述细胞生长曲线,观察培养后血管的活性、细胞的再生及增殖能力。结果玻璃化组和慢速冷冻组动脉出现部分内皮细胞脱落,平滑肌细胞和成纤维细胞轻度肿胀、变性,前者损伤程度轻于后者。体外培养两组动脉的细胞分别于第6、7天自组织块内长出,细胞形态结构、生物学特性与新鲜组相似。生长曲线显示玻璃化组细胞的生长增殖状态优于慢速冷冻组,两组均差于新鲜动脉。将培养后的细胞分别进行免疫组织化学染色,经鉴定为平滑肌细胞。结论玻璃化法能较好地保持血管的形态结构和组织活性,保存效果优于慢速冷冻法。     

吡格列酮对PCOS卵巢颗粒细胞分泌雌激素的影响

目的观察吡格列酮对多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢颗粒细胞雌激素分泌功能和其上P450芳香化酶(P450arom)、胰岛素受体底物-1(IRS-1)和胰岛素受体底物-2(IRS-2)表达的影响。方法对27例行体外受精-胚胎移植PCOS患者的颗粒细胞进行体外原代培养并分组,A组分别加入不同浓度(0、10、102、103、104nmol/L)吡格列酮、B组为不同浓度吡格列酮与卵泡刺激素(FSH,50ng/L)及C组为不同浓度吡格列酮与胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ,50ng/L)。用放射免疫法检测培养上清液中雌二醇(E2)浓度,Real-time PCR法检测颗粒细胞上P450arom、IRS-1、IRS-2mRNA的表达变化。结果在A、B、C组中,人PCOS卵巢颗粒细胞培养48h的E2产生量差异有统计学意义(P<0.05),吡格列酮各浓度组间P450arom mRNA表达量差异有统计学意义(P<0.05),随着吡格列酮浓度的增加,E2水平和P450arom mRNA表达也随之下降;人PCOS卵巢颗粒细胞在相同浓度吡格列酮时,C组E2水平和P450arom mRNA表达明显高于B组(P<0.01)及A组(P<0.01),B组E2产生量和P450arom mRNA表达高于A组,差异有统计学意义(P<0.05);人PCOS卵巢颗粒细胞经不同浓度吡格列酮刺激48h,各浓度组间IRS-1、IRS-2mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05),随着吡格列酮浓度的增加,IRS-1mRNA表达随之下降,IRS-2mRNA表达随之上升。结论吡格列酮可能直接或间接通过对P450arom的抑制,减少E2的生成,改善颗粒细胞上IRS-1和IRS-2表达的失衡,抑制PCOS卵巢的局部胰岛素抵抗状态;吡格列酮可抑制FSH和IGF-Ⅰ刺激卵巢颗粒细胞分泌雌激素的功能。     

不同冷保存时间对大鼠移植小肠形态学改变及对移植术后受体存活的影响

目的研究不同冷保存时间对大鼠移植肠所致的形态学改变,以及对移植术后受体存活的影响。方法SD大鼠随机分成对照组(假手术组,L组,n=6)、冷缺血3h组(L3组,n=6)、冷缺血6h组(L6组,n=6)、冷缺血12h组(L12组,n=6)、冷缺血18h组(L18组,n=6)。建立大鼠原位节段性小肠移植模型。各组热缺血时间均为2-3min,除对照组外其余各组按相应时间在乳酸林格液中进行冷保存(4℃),再灌注后1h取材。HE染色及电镜下观察小肠组织的损伤,并记录各组大鼠生存时间。结果HE染色下各组小肠均有不同程度的损伤,如出现不同程度的绒毛缩短、绒毛脱落;黏膜层变薄,肌层水肿增厚;基质层断裂等,这些损伤随保存时间延长而加重。电镜下表现为:小肠微绒毛排列不整齐,随着冷缺血时间延长,微绒毛出现脱落;线粒体、肌细胞逐渐出现水肿;血管内皮CAP窗孔增大;小肠上皮基质层断裂;此外,在L12组出现凋亡小体,L18组凋亡小体明显增多。术后生存分析显示:随冷保存时间增长,移植术后大鼠存活率下降(P<0.05)。结论供肠在乳酸林格液中保存,冷保存时间在6h以内最适于小肠移植;保存超过18h则不适于作小肠移植供体。     

丹参酮ⅡA对人结肠癌HT29细胞TGF-β1、Bcl-2表达和细胞生长的影响

目的观察丹参酮ⅡA对人结肠癌细胞HT29生长及其对转化生长因子β1(TGF-β1)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)基因表达的影响,为结肠癌治疗提供理论基础。方法分别采用不同浓度的丹参酮ⅡA处理人结肠癌HT29细胞,MTT法检测细胞生长情况;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测不同处理组所收集细胞TGF-β1和Bcl-2 mRNA表达;小鼠腋下接种HT29细胞制备小鼠结肠癌移植瘤模型,随机分为对照组和丹参酮ⅡA处理组,每周测量肿瘤体积1次,4周后摘取肿瘤称重并保存肿瘤;Western blot检测提取自HT29细胞和肿瘤组织内TGF-β1、Bcl-2蛋白表达。结果随着丹参酮ⅡA浓度升高,HT29生长抑制率增加;丹参酮ⅡA浓度增加对TGF-β1和Bcl-2 mRNA及蛋白表达产生抑制作用;丹参酮ⅡA对小鼠结肠癌移植瘤的体积抑制率为28.63%;Western blot结果表明,与对照组比较,丹参酮ⅡA组肿瘤体积内TGF-β1、Bcl-2蛋白水平降低。结论丹参酮ⅡA对结肠癌细胞HT29及其裸鼠模型移植瘤的生长具有明显的抑制作用,其机制可能与丹参酮ⅡA下调TGF-β1和Bcl-2表达有关。     

骨碎补总黄酮对去卵巢大鼠下颌骨结构、血清E_2及OPG/RANKL的影响

目的探讨骨碎补总黄酮对去卵巢大鼠下颌骨结构及血清雌二醇(E_2)水平、血清骨保护素/细胞核因子κB受体活化因子配基(OPG/RANKL)平衡的影响。方法将40只3月龄雌性SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、去卵巢模型组(OVX)、骨碎补总黄酮高剂量组(GB-H)、骨碎补总黄酮低剂量组(GB-L)和戊酸雌二醇组(EV)。采用摘除大鼠双侧卵巢的方法构建下颌骨骨质疏松模型,给药12周后处死大鼠。截取大鼠下颌磨牙段进行组织切片观察和形态计量学测量,放射免疫法检测血清E_2水平,ELISA法检测血清OPG、RANKL水平。结果与Sham组相比,OVX组大鼠下颌骨呈疏松样改变,E_2水平显著降低(P<0.001),OPG和OPG/RANKL比值显著降低(P<0.001,P<0.001)。与OVX组相比,EV组大鼠下颌骨结构获得良好修复,血清E_2回升(P<0.001),OPG/RANKL比值显著增加(P<0.001)。与OVX组相比,GB-H、GB-L组下颌骨骨小梁面积百分率均增加(P<0.001,P=0.029)及血清OPG/RANKL比值(P<0.001,P=0.007)均增高,GB-H组下颌骨骨小梁厚度及血清OPG水平增加(P=0.019,P<0.001),骨小梁间距减小(P=0.001),但均对血清E_2水平无影响(P=0.432,P=0.459)。结论骨碎补总黄酮能抑制去卵巢大鼠的下颌骨结构破坏,从而减缓下颌骨骨量丢失,但不能提高血清E_2水平,其途径可能是通过调节OPG/RANKL平衡实现的。     

PPAR-γ2基因Pro12Ala多态性不能预测罗格列酮改善PCOS患者的卵巢生殖功能

目的探讨多囊卵巢综合征(PCOS)患者过氧化物酶增殖物激活受体-γ2(PPAR-γ2)基因Pro12Ala多态性与罗格列酮疗效的关系。方法选择本院生殖内分泌门诊150例PCOS患者,检测血清性激素水平、葡萄糖耐量试验(OGTT)、胰岛素释放试验(IRT)。135名月经周期规律的正常女性为对照组。PCOS组分为胰岛素抵抗(IR)组和非IR(NIR)组,IR组46例口服罗格列酮4mg,1次/d,共12周,3月后复测上述化验。采用多聚酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法检测两组受试者PPAR-γ2基因Pro12Ala多态性。结果①PCOS组和对照组脯氨酸/丙氨酸(P/A)型频率分别为6.7%和5.9%(P>0.05),丙氨酸(Ala)等位基因频率分别为3.3%和3.0%(P>0.05);②PCOS组睾酮(T)水平与空腹胰岛素呈正相关(r=0.69,P<0.01);T与PPAR-γ2 Pro12Ala变异频率呈负相关(r=-0.91,P<0.05),PCOS-P/A组T水平小于脯氨酸/脯氨酸(P/P)组(2.24±1.14,2.58±0.83nmol/L,P<0.05);③罗格列酮组(46例)均是P/P型基因,用药后,27例排卵(58.70%),12人妊娠(26.10%),胰岛素敏感指数(ISI)升高(0.02±0.01,0.03±0.01,P<0.05),T浓度下降(3.56±0.45,2.21±0.63,P<0.05)。结论①PPAR-γ2基因Pro12Ala突变的PCOS妇女雄激素水平低下,提示Ala等位基因是一个保护基因;②罗格列酮改善PCOS患者卵巢功能的临床疗效异质性与PPAR-γ2Pro12Ala多态性可能无直接关系。     

来曲唑与克罗米酚在诱导多囊卵巢综合征患者排卵中的作用

目的探讨来曲唑(LE)与克罗米酚(CC)在诱导多囊卵巢综合征(PCOS)患者排卵中的作用。方法选择在我院就诊的PCOS排卵障碍患者46例(58个周期),随机分为LE组和CC组,分别用LE、CC进行促排卵治疗,比较两组发育及成熟卵泡数、排卵数、平均卵泡直径、子宫内膜厚度及形态、排卵率、黄体化卵泡未破裂(LUF)的发生率及妊娠率。结果CC组发育和成熟卵泡数、注射绒毛膜促性腺激素(hCG)日及排卵后1周血清雌二醇浓度、LUF发生率较LE组显著升高(P<0.05),而注射hCG日子宫内膜厚度、子宫内膜三线征阳性率(A型%)显著低于LE组(P<0.05);两组血清孕酮浓度、排卵率及妊娠率无显著性差异。结论LE适合PCOS患者的诱导排卵治疗,有望作为PCOS患者的一线促排卵药物。     

角膜基质脱细胞处理与相容性实验研究

目的寻找有效适宜的脱细胞方法对猪角膜进行处理,制备角膜生物支架材料。方法利用胰酶和胶原酶消化结合液氮冻融的方法对猪角膜基质进行处理,60Co消毒,冻干保存。经组织学观察、细胞培养附和与动物移植检验其生物特性。结果获得的脱细胞角膜基质,显微结构观察显示板层结构完整,胶原纤维间组织结构疏松,未见细胞残留,整个基质成网状结构,在上皮面保存有完整连续的基底膜。细胞培养附和实验观察到种子细胞可以在基质上良好生长。动物移植实验未见明显的炎症反应与排斥。结论经该法脱细胞处理后得到的角膜基质无细胞毒性,组织相容性好,可以成为适宜的组织工程支架材料。     

单纯多滤泡卵巢妇女的糖代谢水平的变化

目的研究单纯多滤泡卵巢(MOF)妇女的糖代谢水平,探讨其与胰岛素抵抗及体重的关系。方法46例MOF妇女及30例正常对照女性,口服75g葡萄糖,行糖耐量试验(OGTT)及同步胰岛素释放试验(IRT),用稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA IR)测评胰岛素抵抗。结果①MOF糖耐量低减的发生率为10.87%,明显高于对照组3.33%(P<0.05)。胰岛素抵抗的发生率为30.43%,对照组为10.00%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。②两组的性激素水平,即FSH、LH、PRL、E2、T和P的差异无统计学意义(P>0.05)。③糖耐量低减妇女BMI与胰岛素抵抗呈正相关(r=0.567,P<0.05)。结论单纯多滤泡卵巢妇女存在一定程度的糖代谢异常;肥胖和胰岛素抵抗是导致糖耐量异常的主要原因。MOF肥胖妇女应行OGTT监测糖代谢状况。     

EDFS40对深低温保存兔颈总动脉结构和舒缩功能的影响

目的 评价玻璃化溶液EDFS40对深低温保存兔颈总动脉形态结构和舒缩功能的影响.方法 无菌条件下取兔颈总动脉,分别以EDFS40和1.5 mol/L二甲亚砜为低温保护剂,经玻璃化法和慢速冷冻法深低温保存14 d.复温后和新鲜动脉进行大体和显微形态的观察,器官浴槽内进行非内皮依赖性舒缩功能的测定.结果 EDFS40组动脉的大体、组织学及超微结构与新鲜动脉相似,对氯化钾的收缩力和慢速冷冻组动脉无明显差别(P>0.05),对去甲肾上腺素和硝普钠的收缩或舒张张力优于后者(P<0.05),但均低于新鲜动脉(P<0.05).结论 EDFS40能较好保持兔颈总动脉的形态结构及功能,可用于血管的玻璃化保存.     

神经肽Y、瘦素在超促排卵周期的变化

目的　探讨超促排卵周期中神经肽Y、瘦素水平的变化及其对卵泡发育的影响。方法　对 31例因输卵管因素不孕行体外受精 胚胎移植的患者采用相同超促排卵方案 ,用放射免疫法测定自然月经周期第 3～ 5天 (基础值 )、行垂体降调节后月经来潮第 3～ 5天 (启动日 )及取卵日血清卵泡刺激素 (FSH)、黄体生成素 (LH)、雌二醇(E2 )、孕酮 (P)、瘦素和血浆神经肽Y水平 ,并测定卵泡液中瘦素与神经肽Y水平。结果　在超促排卵周期中 :①瘦素水平上升 ,取卵日血清和卵泡液中瘦素水平极显著高于基础值 (P <0 .0 1) ,也显著高于启动日 (P <0 .0 5 ) ;②血浆神经肽Y水平下降 ,启动日显著低于基础值 (P <0 .0 5 ) ;取卵日血浆与卵泡液神经肽Y水平极显著低于基础值 (P <0 .0 1) ,同时也显著低于启动日 (P <0 .0 5 ) ;③卵泡液神经肽Y水平与卵泡数呈负相关 (r =- 0 .4 2 7,P =0 .0 17)。结论　超促排卵周期中 ,超生理水平的雌激素可能与瘦素水平升高有关 ;在卵巢水平瘦素与神经肽Y可能有相互协调的作用 ;持续使用外源性GnRH a可能对神经肽Y的产生有抑制作用     

促超排卵周期中瘦素水平的变化

目的　探讨促超排卵周期外周血瘦素 (Leptin)水平的变化、穿卵时卵泡液Leptin水平与同步外周血Leptin水平之间的关系。 方法　采用酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测 1 8例不孕患者、2 1个促超排卵周期不同阶段外周血、卵泡液Leptin水平及对照组排卵前外周血Leptin水平。结果　促超排卵周期中应用GnRH a卵巢功能被最大抑制时外周血Leptin水平最低 ,穿卵前显著升高 (P <0 .0 0 1 ) ;促超排卵患者穿卵前外周血Leptin水平高于正常对照组排卵前Leptin水平(P <0 .0 5 ) ;卵泡液Leptin水平与同步外周血Leptin水平呈正相关 (r=0 .947,P <0 .0 5 )。结论①卵巢功能与Leptin之间相互影响 ;②外周血与卵泡液Leptin水平呈正相关     

肝移植术后巨细胞病毒感染的诊断和治疗

目的 分析肝移植术后受体巨细胞病毒(CMV)感染的诊断和治疗.方法 回顾性分析我科2000年11月至2007年12月期间进行的肝移植病例,依据易感因素、临床症状、外周血中CMV-PP65和(或)CMV-IgM及胸片明确诊断,以更昔洛韦抗病毒治疗.结果 共收集资料111例(剔除相关资料不完整者).发现CMV感染5例,CMV感染发生率为4.5%;其中2例发生CMV肺炎,CMV肺炎发生率为1.8%(占CMV感染的40%),2例均好转.活动性CMV感染3例,2例治愈,1例好转.结论 CMV-PP65检测能够对CMV感染患者做出早期诊断并且指导治疗.更昔洛韦能够有效治疗CMV感染.     

应用荧光偏振免疫法监测肾移植患者全血环孢素A浓度的临床评价

应用荧光偏振免疫法（ＦＰＩＡ）对２７４例肾移植术后患者行２３１２人次全血环孢素Ａ（ＣｓＡ）浓度测定。结果表明∶①ＣｓＡ在三联免疫抑制疗法中的理想治疗窗浓度范围是∶术后第１、２、３和４～１２个月全血ＣｓＡ浓度分别为３００～４３０、２８０～３５０、１８０～２８０和１１０～２５０μｇ／Ｌ；②ＦＰＩＡ法具有快速、准确、操作简便，适于批量测定等优点。讨论了肝肾中毒、排斥反应、高危人群及合并用药与全血ＣｓＡ浓度的关系。     

FULLY AUTOMATIC FRAMEWORK FOR SEGMENTATION OF BRAIN MRI IMAGE

Automaticbraintissuesegmentationfrommag neticresonanceimages(MRI)isofgreatimportance forresearchandclinicalstudyofmuchneurological pathology.Duringthepastdecade,theMRIhashad agreatimpactonthediagnosticimagingofmosthu manorgansystem.Thesegmentationofbrai…