自制磷酸钙骨水泥人工骨修复骨缺损的实验研究

目的　观察自制水泥型羟基磷灰石 (CPC)人工骨修复兔桡骨大段骨缺损的成骨效果。方法　将自制的CPC人工骨植入新西兰兔桡骨大段骨缺损模型中 ,术后 4、8、12、16周取材 ,采用HE染色和Masson三色染色分析评价骨缺损修复效果。结果　CPC植入后 4周有新生软骨形成及未成熟的骨组织 ,可见大量的软骨细胞、成骨细胞、胶原组织及较多的小血管。 8～ 16周新骨继续生成 ,人工骨逐渐改建为成熟的板层骨、骨小梁和髓腔结构。结论　自制CPC人工骨有良好的生物相容性和成骨效果 ,可能是一种较理想的骨移植替代材料     

生物型柠檬酸钙骨水泥的研制及抗压强度和生物相容性评价

目的选择新鲜牡蛎壳为原料,制备生物型柠檬酸钙骨水泥,探讨其抗压强度和生物相容性,为临床上应用该材料提供初步的实验基础。方法利用天然牡蛎壳,制备生物型柠檬酸钙骨水泥,检测该材料的抗压强度,扫描电镜观察其表面形态,测定其在模拟体液中的钙离子释放曲线和pH值变化,并通过细胞毒性试验检测其生物相容性。结果选择0.33mL/g液固比所生成的柠檬酸钙骨水泥抗压强度最大,此时材料的晶体结构均一有序。pH值测定提示柠檬酸钙骨水泥降解吸收过程中并不明显改变体液的pH值,随着材料的逐渐降解,溶液中Ca2+浓度逐渐增大。细胞毒性实验表明该材料生物相容性良好,无明显细胞毒性。结论生物型柠檬酸钙骨水泥材料抗压强度大,生物相容性良好,可形成局部弱碱性、高钙微环境。     

丝素蛋白-羟基磷灰石类骨质复合生物材料的生物相容性

目的评价丝素蛋白-羟基磷灰石类骨质复合生物材料的生物相容性。方法体外研究将成骨样细胞株MG-63细胞与不同材料进行复合培养,利用倒置显微镜、四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法进行生物相容性评价;体内研究将不同材料植入新西兰大白兔股骨髓腔,分别在4周、8周取出标本,HE、新三色染色后观察新骨生成情况。结果在体外、体内实验中丝素蛋白-羟基磷灰石类骨质复合生物材料组均显示出良好的生物相容性。结论丝素蛋白-羟基磷灰石复合生物材料具有良好的生物相容性,为新型骨替代材料的制备及应用提供新的思路。     

掺锶磷酸钙骨水泥的体外细胞生物学性能评价及其与掺锶量的相关性

目的 评价"SrHPO4/Ca4(PO4)2O/CaHPO4"系掺锶磷灰石骨水泥的生物相容性及其与掺锶量的关系.方法 通过急性全身毒性、热原性、溶血性、体外细胞毒性以及成骨细胞在材料表面的黏附、增殖与表达等实验,检测材料的性能及生物降解潜能.结果 "SrHPO4/Ca4(PO4)2O/CaHPO4"系掺锶磷灰石骨水泥的急性全身毒性、热原性、溶血性、体外细胞毒性均为合格.Sr-CPC的热原性、溶血性以及碱性磷酸酶值与掺锶量呈非线性关系.结论 含锶磷酸钙骨水泥体外细胞生物相容性良好,是安全的新型骨组织工程支架材料.     

成骨诱导后的脐血间充质干细胞与β-磷酸三钙复合植骨材料对兔颅骨缺损的修复作用

目的探讨成骨诱导后的人脐血间充质干细胞(UCB-MSCs)与β-磷酸三钙(TCP)构成的人工植骨材料修复兔颅骨缺损的作用。方法在无菌条件下用密度梯度离心和贴壁培养法分离培养人UCB-MSCs;取传3代细胞应用条件培养基进行成骨诱导2周后,绘制细胞生长曲线并检测碱性磷酸酶(AKP)、骨钙素(OCN)和钙离子的含量;成骨诱导后UCB-MSCs与β-TCP复合培养后形成人工植骨材料,用扫描电镜观察成骨诱导后的UCB-MSCs在β-TCP表面的生长状况;按人工植骨材料的形状制作兔颅骨全层缺损模型,术后4周行颅骨X线摄片,分析人工材料对骨缺损的修复作用。结果采用Percoll(1.073 g/mL)密度梯度离心和贴壁培养得到的UCB-MSCs大小较为均匀、梭形或星形的成纤维细胞样细胞。成骨诱导前后细胞的生长曲线测定无明显变化;UCB-MSCs内AKP、培养基中的OCN含量和细胞内钙离子的含量与对照组相比均明显增高(P<0.01);成骨诱导的细胞在β-TCP表面生长良好,在细胞周围有白色的钙盐沉积。人工植骨材料植入骨缺损4周后,发现复合材料与颅骨缺损中间大部分被高密度影所充填。结论成骨诱导后的UCB-MSCs呈现成骨细胞特性,在β-TCP表面生长状态良好;与β-TCP构成人工植骨材料具有促进骨缺损修复的作用。     

仿生骨植入钛网管固定修复兔骨缺损

目的探讨MHA-bBMP仿生骨作为替代骨对有限接触式钛网管固定下兔股骨干缺损模型的修复作用。方法48只新西兰大白兔随机分组,实验组:MHA-bBMP仿生骨+钛网管;对照组:自体髂骨移植+钛网管。于股骨干中段截除10 mm,建立兔股骨干缺损模型,将MHA-bBMP仿生骨/自体髂骨植入骨缺损处加有限接触式钛网管固定修复骨缺损。观察兔一般情况,检测血碱性磷酸酶,进行X线片、病理组织、电镜等观察。结果钛网管组织相容性好,固定稳定有效,两组均修复了骨缺损。两组血碱性磷酸酶、X线片表现、病理组织、电镜检查的数据经统计分析无显著性差异。结论有限接触式钛网管对植入物和骨缺损断端起到可靠的固定作用;MHA-bBMP仿生骨与自体髂骨植入相比较,诱导成骨活性相当。     

犬冠状动脉内植入国产铂-铱(Pt-Ir)合金支架的实验研究

目的　评估国产铂 -铱 (Pt- Ir)合金支架的有关物理性能和生物相容性 ,为临床应用提供初步的实验依据。方法　将国产铂 -铱 (Pt- Ir)合金支架植入犬冠状动脉左旋支中段 ,分别在 1周、1月、6月进行病理学观察。结果　支架成功植入 1 6只犬左旋支中段 ,1只犬在植入支架 2 1 h后因形成急性血栓而死亡。支架植入后 1周、1月及 6月造影证实管腔通畅。组织病理学显示支架植入后 1周新生内膜开始覆盖支架 ,组织炎症反应轻微 ;1月时新生内膜完全包绕支架 ,组织炎症反应趋于消失 ;6月时新生内膜不再增厚 ,无炎症反应。结论　国产铂 -铱 (Pt- Ir)合金支架具有以下特点 :1使用简单、方便 ;柔韧性好、支撑力强。 2生物相容性好 ;动脉长期开通率高。 3X光可见性好。符合现有国际支架的标准     

角膜基质脱细胞处理与相容性实验研究

目的寻找有效适宜的脱细胞方法对猪角膜进行处理,制备角膜生物支架材料。方法利用胰酶和胶原酶消化结合液氮冻融的方法对猪角膜基质进行处理,60Co消毒,冻干保存。经组织学观察、细胞培养附和与动物移植检验其生物特性。结果获得的脱细胞角膜基质,显微结构观察显示板层结构完整,胶原纤维间组织结构疏松,未见细胞残留,整个基质成网状结构,在上皮面保存有完整连续的基底膜。细胞培养附和实验观察到种子细胞可以在基质上良好生长。动物移植实验未见明显的炎症反应与排斥。结论经该法脱细胞处理后得到的角膜基质无细胞毒性,组织相容性好,可以成为适宜的组织工程支架材料。     

利用患者骨髓瘤细胞建立NOD/SCID小鼠多发性骨髓瘤模型

目的探讨利用多发性骨髓瘤患者骨髓瘤细胞经植入兔骨建立NOD/SCID小鼠多发性骨髓瘤模型的可行性。方法分离取出新西兰白兔股骨与胫骨,清除肌肉、骨膜及软骨组织,沿中间轻柔截断;准备4~6周体质量约25~30g的NOD/SCID小鼠,腹腔注射麻醉,将兔骨植入小鼠后背部,4周后检测兔骨植入成活情况。将分选的多发性骨髓瘤患者CD38+/CD45-的浆细胞5×106经过免疫荧光标记后,由远侧端缓缓注入植入兔骨内。每周观察成瘤情况,采用living-Imaging方法检测小鼠体内浆细胞的生长情况,病理检测肿块性质。结果兔骨植入后4周成活,将分选的多发性骨髓瘤患者骨髓瘤细胞注入兔骨后,2周可见NOD/SCID小鼠荷瘤,8周后肿瘤体积大小约100mm3。living-Imaging方法检测结果显示,在注射后2周可见兔骨局部有浆细胞浓聚,随着注射时间的延长,至注射后8周局部浆细胞浓聚现象更加明显(2.4×104 vs.1.5×105,P<0.05)。肿块病理活检可见大量浆细胞浸润,植入兔骨结构破坏,破骨细胞增多。结论 NOD/SCID小鼠兔骨植入可有效支持多发性骨髓瘤患者浆细胞局部注射,并建立NOD/SCID小鼠骨髓瘤模型,为骨髓瘤相关体内实验及临床药物筛选提供实验模型。     

纳米磷酸盐/聚磷酸钙纤维/聚乳酸骨与软骨组织工程支架复合材料研究

采用溶媒浇铸、粒子滤取技术与气体发泡相结合的方法制备出纳米磷酸盐/CPP/PLLA骨与软骨组织工程支架复合材料;测试了该支架复合材料的物理、力学及降解性能,并用扫描电子显微镜对其微观结构进行了观察.实验结果表明:纳米磷酸盐/CPP/PLLA骨与软骨组织工程支架复合材料具有三维、连通、微孔网状结构,并具有较高的空隙率和较好的压缩模量,还具有良好的降解性能和生物相容性,是比较理想的骨和软骨组织工程支架材料.     

EFFECTS OF TOTAL SAPONINS OF PANAX NOTOGINSENG AND LIGUSTRAZINE ON THE PROLIFERATION OF CEREBRAL MICROVASCULAR ENDOTHELIAL CELLS OF RATS

Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ (ＥＣｓ)ｆｕｎｃｔｉｏｎａｓｔｈｅｂａｒｒｉｅｒｏｆｔｈｅｂｒａｉｎａｎｄｒｅｌａｔｅｔｏｔｈｅｓｅｃｒｅｔｉｏｎｏｆｓｏｍｅｅｎｄｏ ｃｒｉｎｅｓ.Ｔｈｅｉｒｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎｉｓｃｌｏｓｅｌｙｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｃｅｒｅｂｒａｌｖａｓｃｕｌａｒｄｉｓｅａｓｅｓ[1] .ＤａｍａｇｅｔｏＥＣｓｉｓｔｈｅｆｉｒｓｔｓｉｇｎａｎｄａｂａ ｓｉｃｆａｃｔｏｒｏｆｃｅｒｅｂｒａｌｉｓｃｈｅｍｉａ .Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ ,…     

EFFECTS OF DESENSITIZATION AND REBOUND TO ADENOSINE ON ACTION POTENTIAL AND CONTRACTILITY IN ATRIAL CELLS IN GUINEA-PIGS

Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ (Ａｄｏ)ｉｓａｎｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓｐｕｒｉｎｅｎｕ ｃｌｅｏｓｉｄｅｔｈａｔｒｅｇｕｌａｔｅｓｍａｎｙｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｐａｔｈｏ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｐｒｏｃｅｓｓｅｓｉｎｂｏｄｙ .Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｎｃａｒｄ ｉｏｖａｓｃｕｌａｒｓｙｓｔｅｍａｒｅｅｓｐｅｃｉａｌｌｙｏｂｖｉｏｕｓ .Ｐｅｏｐｌｅｆｏｕｎｄｔｈａｔａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ (ＡＣｈ)ａｎｄａｄｅｎｏｓｉｎｅｈａｄｔｈｅｎｅｇａｔｉｖｅｉｎｏｔｒｏｐｉｃ ,ｎｅｇａｔｉｖｅｃｈｒｏｎｏｔｒ…     

Biocompatibility evaluation of polyethylene terephthalate artificial ligament coating hydroxyapatite by fibroblasts cells in vitro

Hydroxyapatite (HA) based materials have been widely used in the field of ligament tissue engineering in the past decades. It has been previously reported that HA can increase the penetration of marrow-derived mesenchymal stem cells (MSCs) and MSCs cells into scaffolds due to increased cell differentiation in biological media. Additionally, it was found that there are much difference between MSCs and anterior cruciate ligament (ACL) cells. For that reason, we mainly evaluate the biocompatibility of polyethylene terephthalate (PET) silk scaffold with fibroblasts cells in vitro. We cultured mouse fibroblasts cells on the substrate of PET fiber and PET-HA scaffold, respectively, and then observed the morphology by using scanning electron microscopy. Our data indicate that PET-HA scaffold has good biocompatibility with fibroblasts cells and can potentially be useful in enhancing the fibroblasts cell differentiation and proliferation.     

The role of interleukin-8 produced by tumor induced fibroblasts in the development of cutaneous melanoma

Objective To determine the role of interleukin-8 (IL-8) produced by tumor induced fibroblasts in the development of cutaneous melanoma. Methods B16 melanoma cells induced L929 fibroblasts phenotype was transdifferentiated to myofibroblasts (MF) by co-culture in vitro. MF was monitored by morphology and immunophenotype for a-SMA. The level of IL-8 was detected by ELISA. The effect on B16 cell proliferation rate was estimated using MIT method in vitro. Melanoma implanting model was constructed in C57 mice. Results L929 MF phenotype could be modulated by B16 melanoma cells-derived transforming growth factor-β1 (TGF-β1) and elevated the levels of IL-8. L929 MF did not influence the B16 melanoma cells viability in vitro, but shortened the time of tumor formation and increased the incidence rates of tumors in C57 implanting model mice. Conclusion Fibroblasts can be activated by tumor cells and produce IL-8, which acts as an inflammatory cytokine promoting the development of cutaneous melanoma.     

重组人突变型471TNF-α及野生型TNF-α的表达及活性初步鉴定

目的　采用原核表达系统 ,表达人突变型 471TNF α蛋白 ,并检测其生物学活性。方法　采用PCR技术扩增突变型 471TNF α及野生型TNF αcDNA片段 ,克隆入中间载体pUCm T中 ,并测序证实。以限制性内切酶切下目的片段 ,克隆入pBV2 2 0中 ,转入大肠杆菌DH5α ,温度诱导表达野生型及突变型 471TNF α蛋白。初步纯化蛋白后 ,采用MTT法评估两者对L92 9细胞的杀伤作用。结果　①获得了测序正确的野生型TNF α及突变型 471TNF α的cDNA克隆 ;②构建了正常人野生型TNF α及突变型 471TNF α重组表达质粒 ;③经温度诱导 ,TNF α及突变型 471TNF α蛋白均获得了表达 ;④初步的生物学活性研究表明 ,突变型 471TNF α蛋白的杀伤作用显著高于野生型。结论　突变型 471TNF α的生物学活性优于野生型TNF α ,为进一步开展TNF α的基础及临床研究奠定了基础     

A simple screening method for analysis of cell adhesive strength cultured on zein microspheres

Cell adhesion plays an important role in the microcarrier culture. Therefore, it is necessary to find a simple method to evaluate the cell adhesive strength. By the glycerol method, we prepared zein microcarriers. Both microcarrier surface morphology and cells on the microcarriers could be observed clearly when the microcarriers and the cells were stained by acridine orange (AO). Pre-treatment of soaking and sterilizing processes was necessary for cell culture, but it did not alter the morphology of zein microcarriers. Three kinds of cells were cultured on zein microcarriers for 24 h. Vero cells showed the strongest adhesion, while L929 cells were easily detached from the microcarriers after a simple beating operation. The proliferation curve of Vero cells cultured on the microcarriers displayed no difference with that on Cytodex 1.     

水泥型羟基磷灰石人工骨的制备及性能分析

目的　制备水泥型羟基磷灰石人工骨 ,并进行性能分析。方法　高温法制备出磷酸四钙 ,然后在模拟体内环境下将其与无水磷酸氢钙发生水化固化反应 ,合成水泥型羟基磷灰石人工骨 ,采用X线衍射、吸水率、孔隙率测量及力学测试进行性能分析 ,并采用扫描电镜观察细胞因子在复合骨块内的分布情况。结果　该人工骨主要成分为低结晶度的羟基磷灰石 ;微观结构呈针状或花瓣状晶体构成 ,微孔直径为 4～ 10 μm ,孔隙相互交通 ;平均密度为 1.92 2 g·cm- 3;平均吸水率为 15 .5 0 3% ;孔隙率为 2 9.777% ;耐压强度为 4 2 .7MPa。结论　本研究所制人工骨具有三维空间结构 ,力学性能符合人体非负重骨植骨要求。     

硝酸亚铈对培养的正常细胞的毒性作用及对肿瘤细胞的抑瘤效应

目的 探讨硝酸亚铈体外毒性、抑瘤率及其对细胞周期的影响.方法 采用MTT法检测硝酸亚铈对正常细胞系FL、L929体外毒性,对肿瘤细胞系Hela、SGC-7901、B16、Lewis、K562、H_(22)的体外抑瘤效应.采用流式细胞仪检测硝酸亚铈对SGC-7901的细胞周期影响.结果 硝酸亚铈在0.64 mmol/L以下时对FL、L929无任何毒副作用;硝酸亚铈在0.64 mmol/L以上时对以上6种肿瘤细胞均有明显的抑制增殖作用,在0.08 mmol/L时对HeLa、SGC-7901、B16及K562肿瘤细胞表现出显著的抑制增殖作用,在0.01、0.04 mmol/L时,对H_(22)亦有显著抑制作用;0.08 mmol/L硝酸亚铈作用48 h,能显著延长SGC-7901细胞株的G0/G1期,缩短S期;1.28 mmol/L硝酸亚铈作用48 h,除了能够显著延长SGC-7901细胞株的G0/G1期,显著缩短S期以外,还能延长G2/M期.结论 硝酸亚铈对正常细胞具有低毒性和高度选择性,在体外通过影响细胞周期来抑制多种肿瘤细胞的生长和增殖.