滴金法检测幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A抗体试剂盒的研制及应用

目的　建立一种快速、简易的检测血清中抗幽门螺杆菌 (Hp)细胞毒素相关蛋白A(CagA)抗体的胶体金免疫渗滤法 (DIGFA)。方法　采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒 ,标记葡萄球菌A蛋白 (SPA) ,将重组的CagA抗原固定于硝酸纤维素膜上 ,制成免疫渗滤试剂盒。血清中抗CagA抗体与试剂盒上金标记物及硝酸纤维素膜上的固相抗原结合后 ,形成肉眼可见的红色斑点。结果　用DIGFA与酶联免疫吸附试验 (ELISA)试剂盒对比检测了 32 6份血清标本中抗CagA抗体 ,本方法的特异性为 95 .8% ,敏感性为 97.3% ,两种方法符合率为 96 .6 %。结论　DIGFA检测血清中的抗CagA抗体特异性强、灵敏度高、简便快速 ,无需特殊仪器设备 ,有广泛应用价值     

神经干细胞的分离培养与鉴定

目的　分离培养新生鼠神经干细胞并获得细胞克隆 ,同时建立良好的传代方法。方法　取新生大鼠大脑室管膜、脑室周围及海马细胞 ,经消化及机械吹打后接种于加有N2添加剂及生长因子的DMEM/F12 培养基 ,悬浮培养 ;用含血清而不含生长因子的培养基贴壁培养 ,促使分化 ;最后用免疫细胞化学方法进行染色鉴定。结果　分离培养的细胞多聚集生长 ,并形成细胞克隆 ,可以传代 ;细胞为圆形或椭圆形 ,经鉴定为nestin抗原阳性 ;分化后细胞分别表达神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞特异性抗原。结论　分离培养的细胞具有自我更新和多向分化能力 ,表达神经干细胞的特异性抗原nestin ,是神经系统的干细胞。     

哇巴因抗体制备的方法学研究

目的　探索合适的实验条件 ,制备高度特异性以及高效价的哇巴因抗体 ,促进国内对内源性哇巴因这种皮质类固醇激素的研究。方法　利用外源性哇巴因分别与牛血清白蛋白 (BSA)及卵清蛋白 (OVA)耦联 ,制备抗原免疫家兔 ,根据对兔免疫后动物体内抗体效价连续监测的结果来制定免疫方案 ,制备哇巴因抗血清 ,分别应用硫酸铵分段盐析法和DEAE D52 纤维素阴离子非保留色谱相配伍的方法纯化哇巴因抗体 ,并对该抗体进行特异性、亲和性及纯度测定。结果　所得抗体效价最高达 1∶(1× 1 0 6) ,亲和常数最高为 1 .59× 1 0 8,除了与地高辛存在 9.2 0 %～1 9.80 %的交叉结合反应外 ,与结构类似的其他几种物质 ,如强的松、安体舒通、西地兰、睾酮及地塞米松的交叉结合率均小于 5% ,SDS PAGE结果显示所得抗体为电泳纯。结论　应用本研究中所探索出的实验方法 ,获得了高特异性、高亲和性以及高效价的哇巴因抗体 ,可用于对内源性哇巴因的临床与实验研究。     

抗哇巴因鸡蛋黄抗体IgY的制备

目的制备出高特异性的抗哇巴因多克隆抗体,为进一步提高内源性哇巴因的检测的敏感性和特异性提供实验基础。方法采用不同剂量哇巴因-牛血清白蛋白耦联物(0.5 mg/kg;1.0 mg/kg)免疫母鸡,收集鸡蛋;采用聚乙二醇法分离、纯化鸡蛋黄中抗哇巴因抗体;用酶联免疫吸附法检测IgY(yolk immunoglobulin)的抗体效价。SDS-PAGE电泳分析IgY纯度。结果免疫后1周,鸡蛋黄中可检测出IgY;免疫后6周,鸡蛋黄中IgY的效价迅速升高,最高效价达到1∶10 240,持续至少4周。结果还显示,大剂量免疫母鸡获得高效价抗体持续时间较长。结论采用大剂量哇巴因-牛血清白蛋白耦联物免疫母鸡,可以获得较高效价的抗哇巴因IgY。该方法简单,高效价抗体持续时间长,是制备抗体较为有效的方法。     

流行性出血热患者尿中病毒抗原的观察

本文报道了采用ELISA双夹心法、ELISA阻断试验、沉淀试验、SPA协同凝集试验、补体结合试验检测流行出血热(EHF)患者尿中流行性出血热病毒(EHFV)抗原;并用免疫电镜观察了尿中流行性出血热病毒形态;用尿中流行性出血热病毒抗原免疫家兔观察了其免疫源性。实验表明:①用ELISA双夹心法检测EHF患者尿抗原,早期检出率高、重复性好、特异性强,较上述其它检测尿抗原的方法好。②上述多种方法均证明EHF患者尿中确有EHFV抗原排出。③该EHFV抗原还具有一定的免疫源性。提示:ELISA双夹心法适用于EHF临床诊断及流行病学调查。     

两种酶结合物对棘球蚴三种抗原特异性及敏感性的检测比较

对９４例包虫病患者、４４例非包虫病患者及５０例健康人血清,用羊源林球蚴囊液、原头蚴及生发层抗原,分别进行了酶联金葡菌Ａ蛋白点免疫及酶标记单抗人ＩｇＧ点免疫试验,其结果显示：前者对三种抗原的敏感性分别为９４．７％、９５．７％和９６．８％;后者分别为９２．６％、９３．６％和９３．６％。前者的特异性分别为８１．９％、９２．６％和９２．６％;后者分别为８７．２％、９１．５％和９１．５％。酶联金葡菌Ａ蛋白点免疫除了林球蚴囊液抗原的特异性低于酶标羊抗人ＩｇＧ点免疫外,原头蚴抗原、生发展抗原的特异性和三种抗原的敏感性均比后者高。     

小鼠胚胎肠神经嵴干细胞的分离培养及鉴定

目的建立分离培养及鉴定小鼠肠神经嵴干细胞(gut neural crest stem cells,GNCSCs)的方法,为临床应用奠定基础。方法分离胚鼠肠管,消化后接种于添加N2、B27和碱性成纤维细胞生长因子的DMEM/F12培养基,贴壁培养;连续传代后用血清促进GNCSCs分化;最后用免疫细胞化学方法染色鉴定。结果分离培养的细胞聚集生长,形成的克隆球可以传代;克隆球p75染色阳性;分化后的细胞分别表达肠神经元、神经胶质细胞和平滑肌细胞特异性抗原。结论分离培养的克隆球具有自我更新和多向分化的能力,表达肠神经嵴干细胞的特异性抗原p75,是肠神经嵴干细胞。     

多发性骨髓瘤MMSA-1抗原的二级结构预测及多克隆抗体的制备

目的 运用生物信息学技术研究人多发性骨髓瘤MMSA-1(GenBank:AY952881)基因表达蛋白的二级结构和B细胞抗原表位,并制备多克隆抗体.方法 应用DNAStar Protean软件提供的模块分析和预测MMSA-1蛋白的二级结构和B细胞抗原表位.采用多通道同步固相全自动合成系统合成15肽,免疫健康新西兰成年家兔,制备相应的多克隆抗体.结果 MMSA-1蛋白含有较多的β折叠和转角结构.综合柔韧性、亲水性、抗原性、表面可能性、二级结构、偶联难易及实验难度等因素,选取了MMSA-1蛋白序列318～333位作为抗原表位,即SSSLLPQSPAPTEHL,15肽合成产物经HPLC纯化和质谱检测,纯度达到98.65%,序列正确.免疫兔子获得血清抗体采用层析柱纯化,ELISA检测效价:1∶6000.结论 本研究为基于人MMSA-1抗原表位手段的免疫治疗研究提供了理论依据.     

抗哇巴因多克隆抗体的制备及免疫周期和剂量的研究

制备抗哇巴因多克隆抗体 ,探讨最佳的免疫周期及免疫剂量。应用哇巴因 (ouabain) -牛血清白蛋白 (BSA)结合物为抗原免疫家兔 ,每周从兔耳缘静脉采血 ,监测哇巴因特异抗体的产生 ;以0 .2 5mg/次、1mg/次、1.75mg/次、2 mg/次四种不同免疫剂量进行最佳免疫剂量的研究。 5个月后颈动脉取血 ,进行抗体效价、亲和力及特异性的检测。结果显示免疫间隔为 6周、免疫剂量为 1.75mg/次时可以获得高效价、高亲和力和高特异性的哇巴因抗血清。     

不同浓度牛和人血清培养软骨细胞中糖醛酸的测定

本实验用测定培养液中葡萄糖醛酸的方法,作为培养软骨细胞生长情况的指标,以观察软骨细胞的代谢情况,了解不同种类和不同含量血清对培养软骨细胞的影响.我们用传代兔软骨细胞于不同含量小牛血清和人血清的培养液中培养,定期镜下观察并收集培养液,测定其葡萄糖醛酸含量.结果表明5%至15%牛血清或人血清培养一代兔软骨细胞均可生长;测定培养液內葡萄糖醛酸量作为反映软骨细胞生长的检测指标是可行的。     

THE CLINICAL SIGNIFICANCE OF MONITORING CARBOHYDRATE ANTIGEN CA50 IN COLORECTAL CARCINOMA

AntigenssuchasQ-fetoproteinandcarcinoembryonicantigenhavebeenusedasmarkersforthediagnosisandpostoperativeevaluationofpatientswithmalignanttumors.Lindholmetaldetectedamalignanttumorcelllinebyusinghybridomatechniquein1983,themonoclonalantibodiessecretedbythecelllineweredefinedasC50.TheantigenrecognizedbyC50monoclonalantibodywasnamedCA50.Itwasraisedagainstacolorectaladenocarcinomacellline.CA50antigenexistsonthecellsurfaceintheformoflipidorlipoproteincomplex,belongingtothemarkerofsphingoglycoli…     

乙型肝炎病毒x抗原在HBV宫内感染中的作用机制

目的研究高复制水平HBV血清感染人绒毛膜滋养细胞株JEG-3后细胞内乙型肝炎病毒x抗原(HBxAg)及其下游蛋白在细胞内的表达情况,探讨HBxAg在HBV宫内感染中的作用。方法对人早孕绒毛膜滋养细胞株JEG-3进行传代培养,将高复制水平乙型肝炎病毒血清(HBV-DNA定量为107～108拷贝/mL)与传代培养的JEG-3细胞共同孵育48～72h;逆转录-聚合酶链式反应检测细胞内HBx-mRNA水平;Western blot检测细胞内HBxAg的表达;免疫组化检测细胞内HBxAg表达以及细胞内磷脂酰肌醇激酶3(PI3K)的表达;流式细胞仪检测细胞内pAKT的表达。结果 HBV感染JEG-3细胞后,在细胞中检测到HBx-mRNA,并检测到HBxAg的表达,同时发现细胞内PI3K及pAKT的表达水平明显增加,经统计学分析,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HBxAg/PI3K/pAKT抗细胞凋亡途径是高复制水平HBV宫内感染的可能机制。     

THE LA ANTIGEN INHIBITS THE ACTIVATION OF THE INTERFERON－INDUCIBLE PROTEIN KINASE PKR BY SEQUESTERING AND UNWINDING DOUBLE－ST

ＴＨＥＬＡＡＮＴＩＧＥＮＩＮＨＩＢＩＴＳＴＨＥＡＣＴＩＶＡＴＩＯＮＯＦＴＨＥＩＮＴＥＲＦＥＲＯＮ－ＩＮＤＵＣＩＢＬＥＰＲＯＴＥＩＮＫＩＮＡＳＥＰＫＲＢＹＳＥＱＵＥＳＴＥＲＩＮＧＡＮＤＵＮＷＩＮＤＩＮＧＤＯＵＢＬＥ－ＳＴＲＡＮＤＥＤＲＮＡＸｉａｏＱｉｕ...     

乙肝特异性转移因子对羊机体免疫的影响

作者采用乙肝表面抗原(HBsAg)免疫山羊,制备乙肝特异性转移因子(HBV—TF),并将其用于同种山羊,以~3H—TdR掺入试验及放免法检测实验动物的细胞免疫和体液免疫,并检测了实验动物的外周血象。实验证明:HBV—TF具有传递细胞免疫的功能,使实验动物针对HBsAg皮试阳转,抗原特异性淋巴细胞转化增强。HBV—TF能去除HBsAg对PHA刺激淋巴细胞转化的抑制作用,有提高动物外周血白细胞的作用。HBV—TF对动物体液免疫无重要影响。     

益肾胶囊对慢性肾小球肾炎患者sEPCR及CD62P的影响

目的 观察益肾胶囊对慢性肾小球肾炎(慢性肾炎,chronic glomerulonephritis, CGN)患者血浆可溶性内皮细胞蛋白C受体(soluble endothelium protein C receptor, sEPCR)、P-选择素(P-selectin, CD62P)及血清免疫球蛋白(Ig)、补体3水平的影响.方法 分别采用酶联免疫双抗体夹心法、流式细胞仪及免疫比浊法检测了40例健康查体者和78例患者治疗前后血浆sEPCR、CD62P及血清免疫球蛋白(Ig)、补体3水平的改变.结果 治疗前慢性肾炎患者血浆sEPCR、CD62P及血清IgA水平均明显升高(P<0.01),血清IgG、IgM及补体C3水平明显降低(P<0.01),经过3个月的治疗,治疗组患者血浆sEPCR、CD62P及血清IgA水平明显下降(P<0.05或P<0.01),IgG、IgM及补体C3明显升高(P<0.05或P<0.01).结论 益肾胶囊治疗CGN患者的作用机制之一可能与降低血浆sEPCR、CD62P水平及调节血清IgA、IgG、IgM和补体C3水平有关.     

流行性出血热的实验室感染

<正> 流行性出血热(以下简称出血热)可引起实验室感染。1960年苏联首次发生113例实验室感染出血热爆发,以后在南朝鲜、芬兰及国内均有一些报导。以上均为进行出血热研究的实验室工作人员,由于接触疫鼠—黑线姬鼠、棕背(鼠平)或红背(鼠平)而发生。此类事例已为从事出血热研究人员所熟知,但对其传播机理尚不甚明了,有待进一步研究。另一类实验室感染为普通实验室由于接触实验动物大白鼠而发病。1975年和1978年在日本仙台首次发病,病人     

Analysis of chiral non-steroidal anti-inflammatory drugs flurbiprofen, ketoprofen and etodolac binding with HSA

The protein binding of non-steroidal anti-inflammatory drugs flurbiprofen, ketoprofen and etodolac with human serum albumin （HSA） was investigated using indirect chiral high performance liquid chromatography （HPLC） and ultrafiltration techniques. S-（-）-1-（1-naphthyl）- ethylamine （S-NEA） was utilized as chiral derivatization reagent and pre-column derivatization RP-HPLC method was established for the separation and assay of the three pairs of enantiomer. The method had good linear relationship over the investigated concentration range without interference. The average extraction efficiency was higher than 85% in different systems, and the intra-day and inter-day precisions were less than 15%. In serum albumin, the protein binding of etodolac enantiomers showed significant stereoselectivity that the affinity of S-enantiomer was stronger than R-enantiomer, and the stereoselectivity ratio reached 6.06; Flurbiprofen had only weak stereoselectivity in HSA, and ketoprofen had no stereoselectivity at all. Scatchard curves showed that all the three chiral drugs had two types of binding sites in HSA.     

Expression and Application of the Recombinant Non-Structural Proteins of FMDV

Foot-and-mouth disease virus (FMDV) is acausative agent of highly infectious and economi-cally important disease in cloven-hoofed animals.In Asian and South American countries, commer-cial vaccines of FMDV are widely used for control-ling the disease, but animals in North America andEurope are not inoculated with FMD vaccines.Identifying animals that have been infected withFMDV is important because infected cattle andsheep can become carriers of the virus[1,2]Althoughonly African buff…     

丙型肝炎病毒C区截短型基因原核表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达

目的建立稳定表达丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白的原核表达系统,获得高产量的纯化核心蛋白。方法应用多聚酶链反应(PCR),以HCV-H株全长cDNA序列为模板,扩增获得C区羧基端部分缺失的基因片段,克隆入原核表达载体pBVIL1,构建原核表达载体pBVIL1-Ct,转化HB101宿主菌,通过温度诱导表达截短型C蛋白。结果扩增得到目的基因长度为462bp,构建pBVIL1-Ct表达载体,在HB101宿主菌中通过温度诱导获得稳定表达,表达蛋白占菌体总蛋白含量的24%。Western-Blot及ELISA检测证实表达产物可与HCV患者阳性血清发生特异性结合反应。结论羧基端部分缺失的HCV C区基因片段可在大肠杆菌中稳定表达并具有良好的反应原性。