2型糖尿病患者胰岛素分泌功能分析

目的　探讨 2型糖尿病患者胰岛素分泌功能及临床意义。方法　测定糖耐量减低组(IGT组 )与胰岛素分泌不足组 (A组 ) ,胰岛素抵抗组 (B组 )的血糖、胰岛素、C肽在OGTT中的变化和胰岛B细胞初期分泌功能指数。结果　IGT组与A组、B组在OGTT中各时相血糖有明显差异 (P <0 0 1 ) ,A组 >B组 >IGT组。A组各时相胰岛素水平较IGT组显著降低 (P <0 0 5 ) ,B组则较IGT组显著升高 (P <0 0 1 ) ,A、B两组餐后胰岛素峰值后移在 1 2 0min左右。胰岛B细胞初期分泌功能指数IGT组 >B组 >A组 (P均 <0 0 1 )。A组 0min、1 80min ,B组 3 0min、6 0min、1 2 0minC肽值与IGT组相同时相比较无明显差异 (P均 >0 0 5 ) ,A组明显低于B组 (P <0 0 1 )。结论　IGT时胰岛素分泌已有缺陷 ,使餐后血糖升高 ;2型糖尿病时胰岛B细胞损伤加重使血糖进一步升高。不论在IGT或 2型糖尿病胰岛素抵抗时胰岛素分泌仍然不足。胰岛B细胞初期分泌功能指数较C肽更能准确地反映胰岛素初期分泌功能状态。     

压力与牙周膜细胞对体外诱导脐血单核细胞分化为破骨样细胞的影响

目的 研究持续静压力和人牙周膜细胞对体外诱导脐血单核细胞分化为破骨样细胞的影响,初步探讨静压力和牙周膜细胞在正畸性骨改建中的作用机制.方法 密度梯度离心法分离脐血,收集单个核细胞.用组织块酶消化法培养获得牙周膜细胞.建立transwell共培养系统,下层接种脐血单个核细胞,上层接种牙周膜细胞.A组为单核细胞与牙周膜细胞共培养加力;B组为单核细胞培养加力,另设不加力对照组A'、B'组.采用倒置相差显微镜观察及TRAP染色,骨磨片染色等方法检测破骨样细胞的形成及功能.结果 A组下层细胞在加力后第2天出现细胞融合现象,3 d时可见明显的多核破骨样细胞,TRAP染色阳性,骨磨片染色可见典型的骨吸收陷窝.其他组仅有极少量多核细胞形成,未见骨吸收陷窝.结论 静压力作用下,牙周膜细胞可以刺激脐血单核细胞分化为破骨样细胞.     

CD25分子胞外段基因免疫应答中B淋巴细胞的变化及意义

目的 用鼠CD25分子胞外段基因疫苗免疫Balb/c小鼠,观察其诱导的体液免疫应答中B淋巴细胞的变化并探讨其意义.方法 用pcDNA3.1-CD25胞外段真核表达质粒分别在第0天、第10天和第20天肌肉注射免疫同系Balb/c小鼠,酶联免疫法(ELISA)检测抗CD25胞外段的抗体水平及亚型,FACS检测脾细胞中B淋巴细胞的比例变化及细胞因子IL-4、IL-10和IFN-γ的表达变化.结果 与对照组相比,CD25胞外段基因免疫组小鼠血清抗CD25抗体在免疫后逐渐升高,第30天达最高峰;抗CD25抗体主要以IgG1为主;免疫小鼠脾细胞中B细胞的比例变化不显著(P>0.05),但高分泌IL-4和IL-10(P<0.05),而低分泌IFN-γ(P<0.05).结论 CD25胞外段蛋白基因免疫中B细胞功能变化显著,这为后续深入研究体液免疫应答在T细胞疫苗中的作用提供了前期实验基础.     

新生猪胰岛细胞培养移植实验

本文报道了经Ham F_(10)培养的新生猪胰岛细胞功能状况及其植入Sprdgue-Dawley鼠体内后移植物成活情况,并观察了甘草对移植物的影响.其方法是将已培养的新生猪胰岛细胞移植到4组大鼠的腹腔大网膜(第1、2组)肾包膜(第3组)及脑组织(第4组),第1组饮用甘草水、术后8周～11周切除移植物送病理检查,结果显示第1、2组移植物成活可达11周之久,且以饮用甘草水者更好。本实验的目的是寻找来源较广的异种胰腺组织供体。     

ADSCs与HUVECs体外共培养促进HUVECs增殖及成血管化作用

目的为制备血管化胰岛,分离、培养脂肪来源干细胞(adipose derived stem cells,ADSCs),观察细胞共培养条件下,ADSCs对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVECs)增殖及成血管化功能的促进作用并探讨其机制。方法采用胶原酶消化法分别原代培养获得ADSCs与HUVECs,细胞形态学、免疫荧光或多向诱导分化鉴定,建立HUVECs与ADSCs接触式及间接共培养体系,设立HUVECs单独培养为对照组,比较两组成血管化功能、HUVECs增殖状况及上清液血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,b-FGF)浓度。结果通过原代培养成功获得ADSCs与HUVECs;第3代ADSCs呈均一的长梭形纤维细胞样形态,免疫荧光检测见CD44/CD49d(+)、CD31/CD34(-),并具有多向分化功能;第2代HUVECs免疫荧光检测示vWF/CD31(+)。于Matrigel内接触式共培养4h,ADSCs+HUVECs组血管密度高于HUVECs组;间接共培养时,HUVECs生长曲线于ADSCs+HUVECs组上移,在对数生长期的第3、4、5天,ADSCs+HUVECs组HUVECs计数为(4.52±0.31)×104、(7.18±0.45)×104、(8.23±0.36)×104,大于单独HUVECs组的(2.71±0.25)×104、(4.87±0.26)×104、(6.86±0.33)×104(P<0.01);ADSCs+HUVECs组HUVECs群体倍增时间为(1.36±0.23)d,短于单独HUVECs组的(1.62±0.31)d。四甲基噻唑蓝(methylthiazol tetraztlium,MTT)法测定HUVECs的A值培养第1、3、5、7天的ADSCs+HUVECs组高于单独HUVECs组(P<0.01)。培养第3、7、13天时ADSCs+HUVECs组上清液VEGF、b-FGF浓度均高于HUVECs组(P<0.01)。结论 ADSCs与HUVECs共培养时,ADSCs可能通过分泌或增加HUVECs分泌VEGF、b-FGF等细胞因子,进而促进HUVECs增殖及成血管化。     

胰岛细胞与神经细胞和胶质细胞的共同培养研究

目的　验证神经细胞和胶质细胞 (NG)对胰岛细胞的营养和生长促进作用。方法　采用SD大鼠NG与SD大鼠及新生猪胰岛样细胞团 (ICCs) ,进行同种属和异种属细胞间的共同培养。用倒置显微镜、透射和扫描电镜观察两种细胞的生长状况 ,MTT法测定细胞的活力 ,放免法和比色法测定胰岛素和淀粉酶的含量 ,免疫组化鉴定共同培养的细胞。结果　共同培养能显著延长同种属及异种属胰岛细胞的生存期 (>1月 ) ,增加ICCs的活力和胰岛素的分泌 (P <0 0 5 ) ,减少胰淀粉酶的分泌 (P <0 0 5 )。抑制成纤维细胞的过度增生。结论　共同培养能为胰岛细胞的生长提供一个优良的微环境。这为脑内胰岛移植提供了一个新依据 ;为胰岛细胞的体外保存提供了一个新方法。在移植前与NG共同培养以消除外分泌部细胞的影响 ,也是一个好策略。     

体外诱导脐血单核细胞分化为破骨样细胞的研究

目的建立人破骨样细胞体外培养的方法,探讨1α,25-(OH)2D3、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、前列腺素E2(PGE2)等骨吸收刺激因子对破骨细胞分化、增殖和功能的影响,为进一步研究正畸牙齿移动的生物力学机制奠定基础。方法将脐血单核细胞接种于预置盖玻片和骨片的24孔培养板中,实验组分别加入诱导因子1α,25-(OH)2D3、M-CSF、PGE2,对照组不加,每3 d换液一次,培养7 d。采用倒置相差显微镜、TRAP染色等方法观察破骨样细胞的形成情况。结果第3天实验组单核细胞出现融合趋势,第7天TRAP染色可见阳性的多核破骨样细胞,但尚未形成骨吸收陷窝,以1α,25-(OH)2D3组破骨样细胞形成数量最多。结论脐血单核细胞经1α,25-(OH)2D3、M-CSF、PGE2体外诱导培养后可分化为TRAP( )多核的破骨样细胞,且10-8mol/L的1α,25-(OH)2D3具有最强的生物学效应。     

游离脂肪酸对大鼠胰岛细胞体外分泌功能的影响

目的探讨饱和脂肪酸软脂酸和单不饱和脂肪酸油酸对大鼠胰岛细胞体外分泌胰岛素功能的影响。方法体外分离大鼠胰岛细胞,分为:①浓度梯度组,将0.125、0.250、.5 mmol/L软脂酸(PA)和油酸(OA)分别与胰岛细胞共培养48 h;②时间梯度组,将0.25 mmol/L软脂酸、油酸及二者的混合物与胰岛细胞共培养24、487、2 h,进行葡萄糖刺激胰岛素释放试验,放射免疫法检测培养液中胰岛素浓度。结果①浓度梯度组,不同浓度PA和OA组葡萄糖刺激后胰岛素分泌水平均明显减少,浓度越高胰岛素分泌越少,高浓度时(0.5 mmol/L),高糖刺激下OA组胰岛素分泌高于PA组;②时间梯度组,PA、OA及混合组,葡萄糖刺激后胰岛素分泌水平均明显减少,随时间延长,胰岛素分泌逐渐减低;相同时间段,各组胰岛素分泌无差异(P>0.05)。结论PA和OA对大鼠胰岛细胞分泌功能均有一定的抑制作用,呈剂量依赖性,PA抑制程度呈时间依赖性;高浓度时PA抑制程度大于OA;OA对PA诱导的胰岛细胞分泌功能损伤无保护及协同效应。     

褪黑素对链脲佐菌素所致胰岛β细胞损伤的保护作用研究

用链脲佐菌素 (STZ)作用于离体胰岛β细胞 2 4 h,一氧化氮 (NO)、脂质过氧化产物丙二醛(MDA)生成增多 ,胰岛细胞膜流动性下降 ,微粘度增高 ,同时胰岛素分泌功能降低 ,细胞存活率下降。预先给高浓度褪黑素 (10 μmol/ L)处理 2 4 h者 ,可减少 NO、MDA的释放 ,提高超氧化物歧化酶的水平 ,使胰岛细胞的氧化损伤减轻 ,膜微粘度降低 ,膜流动性增加 ,细胞存活率显著提高。但低浓度褪黑素 (10 nmol/ L)无此作用。提示高浓度褪黑素对 STZ所致的胰岛 β细胞损伤有一定的保护作用。     

大鼠下丘脑培养中β-内啡肽神经元的免疫细胞化学研究

应用种经细胞培养、免疫细胞化学和图像分析技术，研究新生大鼠下丘脑β-内啡肽（β-END）神经元的形态及其体外发育规律。β-END神经元多为梭形双极，可见细胞间接触。培养1d,β-END神经元甚少，3～7d其生长迅速，细胞数量、胞体大小、染色强度和突起长度均达最高峰。培养14d，β-END神经元基本维持在7d时的水平。结果提示，下丘脑β-END神经元在体外培养的第1周内迅速发育趋于成熟，并可维持到第14天左右。     

成人脂肪源Flk1~+CD31~-CD34~-细胞体外定向诱导分化为胰岛样细胞

目的体外定向诱导成人脂肪源Flk1+CD31-CD34-细胞向胰岛样细胞分化。方法首先将成人脂肪源Flk1+CD31-CD34-细胞培养在含适当浓度的B27、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及表皮生长因子(EGF)的培养基中诱导,接着更换诱导培养基,用含适当浓度的β细胞调节素、尼克酰胺等高糖无血清培养基诱导细胞向胰岛样细胞分化。用RT-PCR法检测诱导前后nestin、ngn3、胰岛素启动子因子1(IPF-1)、胰岛素及胰高血糖素基因的表达;免疫荧光染色法检测诱导前后nestin、胰岛素及胰高血糖素的表达;放射免疫分析法检测诱导前后细胞分泌胰岛素情况。结果成人脂肪源Flk1+CD31-CD34-细胞经第一阶段的诱导后可分化成nestin阳性的祖细胞,继续诱导6 d后变圆的细胞逐渐增多,并最终聚集成团。免疫荧光实验证明经诱导后的细胞表达胰岛素、胰高血糖素、生长抑素等内分泌激素;放免分析结果表明,诱导的胰岛样细胞团可以分泌胰岛素。结论成人脂肪源Flk1+CD31-CD34-细胞具有胰腺干祖细胞的固有特征,极有可能作为种子细胞用糖尿病的细胞治疗。     

子宫内膜超声形态与性激素的关系

目的探讨子宫内膜超声形态与性激素的关系。方法30例有正常排卵功能的育龄妇女,于尿中黄体生成素(LH)阳性日经阴道超声确定子宫内膜超声形态类型。按Gonen等子宫内膜超声形态的分型标准分为A、B、C三组。于月经周期第3天、尿LH阳性日和排卵后第6～7天放免法测定血清促卵泡激素(FSH)、黄体生成素(LH)、催乳素(PRL)、雌二醇(E2)、孕酮(P)、睾酮(T)水平。结果卵泡早期及围排卵期的血清E2浓度:A组>B组>C组,A、C组间有统计学差异(P<0.05);围排卵期LH和黄体中期血清P浓度为:A组>B组>C组,A、B组与C组间均有显著性差异(P<0.05)。结论围排卵期子宫内膜呈现不同的超声形态与雌激素的增殖效应、内膜分泌转化有关。     

不同血型不同时期库存血红细胞免疫功能的初步观察

通过对 6 0份血样行库存模拟试验 ,于第 1、3、7、14、2 1日分别测定红细胞免疫功能。结果显示 :库存当日红细胞 C3 b受体 (RBC- C3 b R)活性最高 ,从第 3日起随存放时间延长而逐渐降低 ,红细胞免疫复合物花环 (RBC- ICR)无明显变化。 B型血 RBC- C3 b RR在库存第 7日后降低 ,而其它血型 3日后降低 ,RBC- ICR除 O型在第 14日有一过性降低外 ,其它血型无变化。提示在输血治疗中 ,应考虑库存血红细胞免疫功能的降低对机体的影响。     

大鼠不同分离纯化方法对胰岛细胞丢失的影响

目的探讨提高大鼠胰岛细胞产量和纯度的最佳分离纯化方法。方法40只大鼠分为4组,每组10只。A组:Hanks液灌注 胶原酶V消化 Ficoll400梯度纯化;B组:组织剪碎研磨 筛网过滤;C组:胶原酶V灌注 Ficoll400梯度纯化;D组:胶原酶V灌注 筛网过滤。对用四种不同方法分离纯化的结果进行比较。结果完全随机设计的方差分析显示,A、B、C、D组收获量及纯度比较均有显著性差异(P<0.05);组间多重比较显示,A组收获量均高于B、D组(P<0.05),与C组比较差异无统计学意义(P>0.05);A组纯度与其他组比较均无显著性差异(P>0.05)。结论用胶原酶V或Hanks液灌注,Ficoll400梯度纯化法所收获胰岛细胞的产量和纯度较高,而且价格低廉,是一种较理想的胰岛细胞分离纯化方法。     

IMPROVEMENT OF HUMAN ISLET FUNCTION BY ADENOVIRUS MEDIATED HO-1 GENE TRANSFER

Objective To investigate in vitro heme oxygenase-1 gene (HO-1) delivery to human pancreatic islets by adenovirus vectors. Methods Recombinant adenovirus containing HO-1 or enhanced green fluorescent protein gene(EGFP) was generated by using the AdEasy System. The purified human pancreatic islets were infected with recombinant adenovirus vectors at various multiplicity of infection (MOI). Transduction was confirmed by fluorescence photographs and Western blot. Glucose-stimulated insulin secretion was detected by using Human insulin radioimmunoassay kits and was used to assess the function of human islets infected by recombinant adenovirus.Results Viral titers of Ad-hHO-1 and Ad-EGFP were 1.96×109 and 1.99×109 pfu/mL, respectively. Human pancreatic islets were efficiently infected by recombinant adenovirus vectors in vitro. Transfection of human islets at an MOI of 20 did not inhibit islet function. Recombinant adenovirus mediated HO-1gene transfer significantly improved the islet function of insulin release when simulated by high level glucose. Conclusion Recombinant adenovirus is efficient to deliver exogenous gene into human pancreatic islets in vitro. HO-1 gene transfection can improve human islet function.     

PROTECTIVE ROLE OF SOPHOCARPINE IN COXSACKIEVIRUS B3 INFECTION IN CULTURED RAT CARDIOMYOCYTES

Objective To observe the anti-CVB3 ( Coxsackievirus B3 ) effect of sophocarpine (SC) extracted from Sophora flavescens , a traditional Chinese herb in vitro. Methods Cardiomyocytes from the neonatal rat were cultured to establish the viral myocarditis model. The cells were divided into four groups: infected group ( infected by CVB3 ), SC treated group ( added SC 100 μg/mL after viral infection ), SC control group ( added SC 100μg/mL only), and normal control group. The cytopathic effect (CPE) and the beating frequency of the myocardial cells were observed and the LDH levels in the supernatant were measured at day 2, 3, and 5. The cultured myocytes were added different concentrations of SC ( 12.5 - 400 μg/mL ) after infection with CVB3, the CPE was observed and the concentrations of LDH were measured and compared at day 2, 3, and 5. Results In the SC treated group ( 100 μg/mL) , the cytopathic effect was lighter and the LDH level was lower than the infected group. SC in a concentration of 12.5 - 300 μg/mL could relieve the CPE and lower the LDH level, while in a higher concentration (400 μg/m) , it exacerbated the CPE caused by the virus, and the LDH levels were higher than the infected cells.Conclusion SC in certain concentration could protect the cultured rat cardiomyocytes from CVB3 infection.     

SP和Con A对培养的大鼠皮肤肥大细胞组胺释放的影响

用酶消化法获得大鼠皮肤肥大细胞，培养于含10％胎牛血清的DMEM培养液。培养1d后，在培养液中加入不同浓度的SP、SP＋Ca2+或ConA，继续培养不同时间。用微孔滤膜迅速分离细胞和培养液，荧光法测定培养液中的组胺含量，计算组胺释放率。结果显示，SP和ConA均能以时间和剂量依赖性方式刺激体外培养的大鼠皮肤肥大细胞释放组胺，并且SP的这种作用明显地受Ca2+浓度的影响。     

MR IMAGING OF THE PANCREAS

Objective To evaluate the ability of showing the pancreatic diseases on various MRI sequences. Methods Eighty-four subjects included 50 normal individuals and 34 patients(22 patients investigated for pancreatic neoplasia and 12 pancreatitis) were presented. The MR protocol included conventional SE T1WI, FSE T2WI, Pre-and post-contrast T1-weighted fat-suppressed and GRE imaging. Results The best diagnostic information was provided by T1-weighted fatsuppressed imaging before and after gadolinium enhancement on 27 of 34 cases with abnormal pan creas, followed by immediately postcontrast GRE images. Precontrast GRE imaging better showed the features of a cute pancreatitis. FSE T2WI obviously exhibited islet cell tumor and metastases of liver from pancreatic adenocarcino ma. Conclusion The standard MR protocol included T1-weighted fat-suppressed image and dynamic GRE imaging.     

Vinorelbine and cisplatin combined with endostatin as the first-line therapy for metastatic pancreatic cancer

Objective Systemic chemotherapy for metastatic pancreatic cancer is still a difficult problem in clinical practice. The standard chemotherapy of pancreatic cancer has been gemcitabine, but the response rate is low. Therefore, it is in urgent need to explore an effective clinical therapy for this cancer. This paper, a case report, is aimed at discussing the effectiveness of vinorelbine and cisplatin combined with endostatin as the first-line therapy for metastatic pancreatic cancer. Methods A 52-year-old female patient was diagnosed with pancreas cancer with liver metastasis at the time of the first visit to our hospital. Systemic chemotherapy with vinorelbine and cisplatin combined with endostatin was conducted. Results Liver metastases almost disappeared after the first cycle of chemotherapy. The primary tumor decreased by one third in size after four cycles and disappeared after the sixth cycle according to the CT scan evaluation. Conclusion Vinorelbine and cisplatin combined with endostatin can be a promising regimen for metastatic pancreatic cancer.