用SPA—ELISA法检测不育症的抗精子抗体

笔者以SPA代替第二抗体采用ELISA法检测不育夫妇和有生育能力夫妇的精液及血液中抗精子抗体共220例,其检测结果,不育组阳性检出率为30.5%,生育组阳性检出率为7.6%,二者比较有显著性差异(P<0.001)。不育组男性阳性检出率为32.5%,女性28.4%,男女比较无显著性差异(P>0.05)。该方法具有操作简便,特异性强,敏感性高,重复性好等优点,是目前诊断免疫不育症的一个较为理想的实验方法。     

骨髓移植患者和献血员巨细胞病毒特异性抗体的检测及其意义

用酶联免疫吸附法检测了5例骨髓移植病人,204名献血员巨细胞病毒特异性抗体IgM和IgA,结果5名接受骨髓移植的病人全部阴性,204名献血员中总抗体检出率29.91％,表明西安地区部分献血员中巨细胞病毒感染率较高,且为近期或活动性感染。这将对骨髓移植构成极大的危险。因此在骨髓移植中应筛选巨细胞病毒抗体阴性的献血员。     

用SPA(Staphylococcal Protein A)凝集抑制试验检测单纯疱疹病毒抗体(摘要)

<正> SPA是血浆凝固醇阳性金黄色萄葡球菌细胞壁的一种蛋白质成份,具有与人及多种哺乳动物血清IgG的Fc段结合的特性。国外从七十年代起应用SPA并结合放射、荧光、电镜等技术,建立了许多敏感、特异、快速和简便的试验方法。1979年张颖吾等首先将SPA介绍到国内,相继应用SPA协同凝集试验于脑膜炎双球菌、链球菌、大肠杆菌的抗原分型。关于SPA在病毒抗体检测上的应用,SPA凝集抑制试验查抗体在国外已有报导,在国内尚未见应用。     

靶向巨噬细胞膜蛋白Vsig4特异性纳米抗体的构建和筛选

目的构建V-set and immunoglobulin domain containing 4(Vsig4)特异性纳米抗体,以期作为巨噬细胞的分子探针。方法用Vsig4重组蛋白对羊驼进行免疫,分离血液中的淋巴细胞,利用噬菌体展示技术,构建噬菌体展示文库,经过连续3次生物淘筛获得与Vsig4蛋白结合的噬菌体,经测序和基因比对所得VHH序列,用ELISA法筛选出抗Vsig4的高亲和力纳米抗体,并用Vsig4稳定表达细胞系验证纳米抗体的结合能力。结果成功构建了插入率为70%、库容量为7.27×107的噬菌体表达文库,经过克隆筛选获得136个Vsig4阳性单克隆,经测序获得15个不同的VHH基因,将这些基因克隆至原核表达体系,表达和纯化后获得了高纯度的Vsig4纳米抗体,其中Nb119的亲和力最高,并且可以与Vsig4稳定表达细胞系结合。结论成功构建并筛选了特异性、高亲和力的Vsig4纳米抗体,以期用于检测巨噬细胞表面Vsig4的表达和构建特异性分子探针。     

PCR法检测乙型肝炎患者外周血单个核细胞中HBV DNA

采用ＰＣＲ法检测了７７例乙肝患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中ＨＢＶＤＮＡ，２７例阳性，总阳性率为３５．１％。慢性活动性肝炎（９／２１，４２．９％），肝炎后肝硬化（９／１９，４７．４％）及重型肝炎（８／１６，５０．０％）患者ＰＢＭＣＨＢＶＤＮＡ阳性率明显高于慢迁肝（１／１４，７．１％）和急肝（０／７）患者。结果提示ＰＢＭＣ中ＨＢＶＤＮＡ的存在在乙肝发病机理中具有一定意义。     

IgM抗体捕获ELISA法对流行性出血热患者尿液中特异性IgM抗体的检测

将IgM抗体捕获ELISA法应用于检测流行性出血热病人尿液中的特异性IgM抗体,总阳性率72.62%,7～9病日可达83.87%;第3病日即可出现阳性;并且具有较高的特异性和敏感性。尿中特异性IgM抗体检出的阳性率与病日(G=7.3858,P>0.05)及尿蛋白含量(G=4.4003,P>0.05)间均无明显关系;特异性IgM抗体的滴度与病日有关(F′=26.5331,P<0.01)与尿蛋白含量无明显关系(F=2.2074,P>0.05);不同病日尿液中特异性IgM抗体检出的阳性率与滴度呈正相关(r=0.9973,P<0.01)。     

子宫颈癌患者HPV16 E6,E7血清抗体检测

通过基因工程技术制备HPV16 E6,E7抗原,用免疫酶联吸附法检测了44例子宫颈癌病人和20例健康献血员血清HPV16 E6,E7抗体。结果表明,健康人血清HPV16 E6和HPV16 E7抗体阳性者分别占35％(7/20)和20％(4/20)。病人血清中,HPV16 E6抗体阳性率68.18％(30/44),但其反应滴度均值与健康人无显著差异。HPV16 E7抗体阳性率为58.18％(25/44),其阳性率及反应滴度均明显高于健康人。这提示,HPV16 E6抗体可能并非HPV16的型特异性抗体,而HPV16 E7抗体则有可能成为子宫颈癌发生的预报信号。     

乙型肝炎患者血清IL-12、IL-18、TGF-β1、 TIMP-1检测的临床意义

目的探讨血清IL-12、IL-18水平在乙型肝炎发生发展中的意义及与肝纤维化的关系。方法采用双抗体夹心ELISA法检测血清IL-12、IL-18、TGF-β1、TIMP-1水平。结果患者血清IL-12、IL-18、TGF-β1及TIMP-1水平与对照组相比均有显著性差异(P<0.05)。随慢性肝炎中度→慢性肝炎重度→肝硬化临床类型的逐渐加重,血清IL-18、TGF-β1、TIMP-1水平呈增高趋势,差别具有统计学意义(P<0.05)。TGF-β1、TIMP-1与PCⅢ、LN、IVC相比,相关系数r分别为0.986、0.998、0.925和0.921、0.987、0.814。结论乙型肝炎患者血清IL-12、IL-18、TGT-B1及TIMP-1水平和对照组相比有显著变化,且与病情变化有关。TGF-β1、TIMP-1与PCⅢ、LN、IVC有良好的相关性。     

新型抗ErbB2、抗CD16三价双特异性抗体的构建及功能鉴定

目的构建一种新型三价抗ErbB2、抗CD16 BsAb。方法构建重组载体pET22b( )/BsAb;转化大肠杆菌BL21(DE3),获得重组蛋白的表达,通过包涵体复性纯化蛋白。应用悬浮培养系统扩增稳定表达抗人CD16 scFv-Fc融合蛋白的CHO细胞株(CG5细胞)和稳定表达抗人ErbB2 scFv-Fc融合蛋白的CHO细胞株(HG2细胞),通过rProtein A Sepharose Fast Flow亲和层析柱纯化融合蛋白,应用流式细胞术分析BsAb的结合能力。结果该BsAb可在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体形式高效表达,通过对重组蛋白的复性可获得高纯度的蛋白;复性后的BsAb具有与其亲本抗体相似性的结合靶抗原的能力。结论新型三价抗ErbB2、抗CD16 BsAb能与高表达ErbB2的乳腺癌细胞系SKBR3细胞高亲和力结合和表达CD16的人外周血单个核细胞低亲和力结合。     

哇巴因抗体制备的方法学研究

目的　探索合适的实验条件 ,制备高度特异性以及高效价的哇巴因抗体 ,促进国内对内源性哇巴因这种皮质类固醇激素的研究。方法　利用外源性哇巴因分别与牛血清白蛋白 (BSA)及卵清蛋白 (OVA)耦联 ,制备抗原免疫家兔 ,根据对兔免疫后动物体内抗体效价连续监测的结果来制定免疫方案 ,制备哇巴因抗血清 ,分别应用硫酸铵分段盐析法和DEAE D52 纤维素阴离子非保留色谱相配伍的方法纯化哇巴因抗体 ,并对该抗体进行特异性、亲和性及纯度测定。结果　所得抗体效价最高达 1∶(1× 1 0 6) ,亲和常数最高为 1 .59× 1 0 8,除了与地高辛存在 9.2 0 %～1 9.80 %的交叉结合反应外 ,与结构类似的其他几种物质 ,如强的松、安体舒通、西地兰、睾酮及地塞米松的交叉结合率均小于 5% ,SDS PAGE结果显示所得抗体为电泳纯。结论　应用本研究中所探索出的实验方法 ,获得了高特异性、高亲和性以及高效价的哇巴因抗体 ,可用于对内源性哇巴因的临床与实验研究。     

不孕妇女宫颈粘液及血清中抗精子抗体的检测及其临床意义

为探讨宫颈粘液（ＣＭ）与血清中抗精子抗体（ＡｓＡｂ）的关系，评价检测ＣＭ中ＡｓＡｂ的临床意义，检测了１９例不明原因不孕患者及１４例对照组妇女ＣＭ及血清中的ＡｓＡｂ。结果：不孕组ＣＭ中ＡｓＡｂ阳性率（２１．０５％）明显高于对照组（７．１４％），Ｐ＜０．０５。血清中两组间无显著差异，ＣＭ与血清中ＡｓＡｂ的检出率无明显相关性，提示对于不明原因不孕妇女，尤其是宫颈性不孕，检测ＣＭ中的ＡｓＡｂ比检测血清中的抗体更有临床意义。     

ABC—ELISA法检测自身免疫性甲状腺病患者TRAb的研究

本文叙述了在自身免疫性甲状腺病TRAb检测中引入一种新方法-ABC-ELISA法的研究过程。并将该法与常规ELISA法的检测灵敏度作了比较,用FRTL-5细胞测定TSAb的方法鉴定了该法的可靠法。未治甲亢用ABC—ELISA法测TRAb的阳性率91%,用常规ELISA法测TRAb阳性率70%,用FRTL-5细胞检测了未治甲亢中26例的TSAb所得结果与ABC法相同。据此,作者认为ABC—ELISA是一种敏感性高、重复性好、简便、适用于临床的方法。     

表皮生长因子受体Ⅲ型变异体（EGFRvⅢ）多克隆抗体的制备及特异性

为了制备针对EGFRvⅢ的特异性多克隆抗体,在实验中利用耦联了血蓝蛋白的EGFRvⅢ特异性的PEP3合成短肽进行动物免疫,制备抗血清;构建了pET30a／E33XI原核表达载体,表达和纯化了融合蛋白His-E33（EGFRvⅢ的部分胞外区）;以此融合蛋白作为抗原制备了抗体纯化柱,通过柱上纯化的方法从抗血清中提取针对EGFRvⅢ的特异性抗体．利用U87、U251、HeLa和HEK-293细胞进行免疫组化实验来检验抗体的特异性．     

蛋白芯片技术对8种自身抗体的检测及其评价

目的　研究蛋白芯片技术对自身抗体检测的敏感性及特异性,探讨其对自身免疫性疾病的鉴别诊断价值,并对其方法学进行评估。方法　用胶体金标法、间接免疫荧光法及蛋白芯片法检测抗 ds- DNA;用免疫印迹法、蛋白芯片法检测抗Sm 、抗u1RNP 、抗SSA、抗SSB 、抗Rib- P、抗 Jo -1及抗 Scl- 70 7 种自身抗体,对检测结果进行统计学分析。结果　抗dsDNA抗体检测,蛋白芯片法优于胶体金标法 (P<0.01);皮肌炎和多发性肌炎(DM/PM)组 Jo -1 抗体(P<0.01)、混合性结缔组织病(MCTD)组u1RNP抗体(P<0.01)、硬皮病(PSS)组 Scl- 70 抗体(P<0.05),蛋白芯片法与免疫印迹法检测结果存在显著性差异;在 DM/PM组、PSS组、MCTD组,蛋白芯片法与免疫印迹法对自身免疫性疾病的鉴别诊断有显著性差别(P<0.05)。4种方法的总体敏感性依次为蛋白芯片法、免疫印迹法、间接免疫荧光法、胶体金标法。结论　蛋白芯片法检测项目多、简便快速、敏感性好、特异性强、分析客观,值得推广使用。     

用间接荧光抗体法检测白细胞间介素2受体

本实验用间接荧光抗体法检测了30名正常人淋巴细胞膜上白细胞间介素2受体(IL-2R)的表达情况,并对影响因素进行了探讨。结果发现随PHA 刺激量增大,IL-2R 表达量也增加;用同一PHA 刺激量时,IL-2R 表达与细胞浓度有关,在细胞浓度为1×10~9细胞/L 时,受体表达最为充分。1×10~9细胞/L 的淋巴细胞悬液经100mg/L PHA 刺激培养24、48和72小时后,IL-2R 表达阳性率分别为52.92±9.11%,72.80±8.12%和87.26±6.09%。本法操作较为简便,适用于临床免疫学检查。     

乙肝清热解毒片治疗慢性乙型肝炎的临床疗效

中医学认为慢性乙型肝炎的主要病机为湿热瘀毒蕴结体内 ,导致机体气血运行不畅 ,因而治疗原则多以清利湿热、凉血解毒、疏肝理气及活血化瘀为主 ,兼用扶正固本之法。乙肝清热解毒片由临床验方开发而成 ,方义上充分体现了“标本同治、攻补兼施”[1 ] 的治则。近年来 ,我们用该药治疗慢性乙型肝炎取得了较好的临床疗效 ,现报告如下 :1　资料和方法1.1　一般资料　 10 4例患者均来自我科 2 0 0 0年至 2 0 0 1年门诊。病例纳入标准依据 1995年北京全国病毒性肝炎和寄生虫学术会议制定的慢性乙型肝炎诊断标准[2 ] ,且符合以下要求 :①年龄 18～ 7…     

Graves病自身免疫单链抗体库的构建及抗甲状腺单抗的筛选

目的　Graves病属于甲状腺自身免疫性疾病 (AITD) ,其患者血中存在多种抗甲状腺自身抗体 ,其中包括TGAb、TPOAb以及TRAb。单链抗体 (ScFv)是以连接肽将重链可变区基因 (VH)和轻链可变区基因 (VL)连接起来形成的单链小分子抗体。为了获得人源性抗甲状腺抗体 ,分析其基因结构 ,进一步研究AITD的发病机理 ,我们构建了人源性噬菌体ScFv库。方法　采取Graves病人静脉血 ,用淋巴细胞分层液按常规分离单个核细胞。提取淋巴细胞总RNA逆转录合成cDNA。分别扩增出全套的免疫球蛋白VL 链和VH 链基因 ,利用重叠PCR方法 ,构建ScFv基因。重组到 p3SCMH嗜菌粒中 ,电穿孔转化XL1 Blue大肠杆菌。经适当培养后 ,加入约 10 12 空斑形成单位 (PFU)的辅助噬菌体VCSM13,构建噬菌体抗体库。测定库容 ,鉴定重组率。以固相化的抗原对噬菌体ScFv库进行了 4轮“吸附 洗脱 扩增”的筛选 ,富集特异性噬菌体抗体。用ELISA竞争抑制实验检测富集的噬菌体抗体。结果　以单链cDNA为模板 ,用PCR方法分别扩增VL 链和VH 链的DNA。PCR产物经 15g·L-1琼脂糖电泳检测 ,分别在 380bp和 4 2 0bp左右见到扩增带。将VL 和VH 进行重叠PCR制备ScFv ,琼脂糖电泳显示PCR产物在 80 0bp左右有扩增带。将ScFv基因纯化 ,用SacⅠ+SpeⅠ双酶消化后 ,重组到 p3     

过氧化物酶抗体诊断自身免疫甲状腺疾病临床价值的探讨

目的 通过比较自身免疫甲状腺疾病(ATD)患者血清中过氧化物酶抗体(TPO-Ab)和甲状腺微粒体抗体(TMAb)水平,探讨测定TPO-Ab的临床价值。方法 采用放射免疫法同步测定200例ATD、50例非ATD、30例健康对照血清中甲状腺过氧化物酶抗体和甲状腺微粒体抗体的浓度。结果 ①ATD患者血清中TPO-Ab浓度显著升高(P＜0.01)。②桥本甲状腺炎患者甲功的变化与体内TPO-Ab浓度有关,可在一定程度上提示ATD的预后。③TPO-Ab浓度的变化与TMAb变化一致(r=0.83,P＜0.01),但用TPO-Ab作为诊断桥本甲状腺炎的指标较TMAb更具敏感性和特异性(P＜0.01)。结论 测定TPOAb是诊断自身免疫甲状腺疾病敏感、特异的指标。