不同生长期晶状体蛋白对体外培养的大鼠视网膜神经节细胞存活的促进作用

目的观察不同生长期大鼠的晶状体蛋白对体外培养的大鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)是否具有不同的保护作用。方法分别提取出生后1 d、2周、6月、1年期的SD大鼠晶状体可溶性蛋白,加入培养的RGCs中,观察其对RGCs存活时间、突触生长状况及凋亡的影响。结果同期提取的晶状体蛋白各不同浓度作用于RGCs,促进其存活的作用有差异,最佳有效浓度为10-5g/L。不同生长期大鼠的晶状体蛋白可以延长RGCs存活时间,并随生长期增长而延长,但1 d组与2周组无显著性差异。加入晶状体蛋白后RGCs凋亡减少,随生长期增长而逐级减少。结论晶状体可溶性蛋白可显著促进离体培养的RGCs的存活和生长,晶状体蛋白的最佳有效质量浓度为10-5g/L。不同生长期晶状体蛋白的神经保护作用有所不同,随生长期延长,作用逐渐增强。     

克拉霉素对激素反应性通路中组蛋白去乙酰化酶2及糖皮质激素受体的影响

目的观察克拉霉素对激素反应性通路中组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)及糖皮质激素受体(GR)的影响,探讨克拉霉素对烟雾暴露哮喘小鼠可能的治疗作用。方法选择BALB/c小鼠作为研究对象,通过卵蛋白致敏激发建立哮喘模型组(OVA组)、烟雾暴露哮喘组(SEA组)以及哮喘接触烟雾暴露后通过克拉霉素治疗组(CAM组),同时设立对照组平行比较。采用组织病理学检测各组小鼠肺组织炎症情况,并通过PCR检测肺组织中HDAC2mRNA的表达情况和Western blot检测肺组织中HDAC2和GR蛋白的表达。结果组织病理学观察OVA组和SEA组均存在肺组织气道炎症,其中SEA组纤毛被严重破坏,而CAM组炎症细胞浸润减弱。与CAM组相比,SEA组小鼠支气管肺泡灌洗液中IL-4和IL-8水平均显著提高(104.36±14.39 vs.65.49±10.82、681.35±66.18 vs.321.49±90.37,P=0.031、0.017)。CAM组HDAC2mRNA表达显著高于SEA组(0.062±0.013 vs.0.031±0.015,P=0.032)。Western blot检测结果显示,与CAM组相比,SEA组HDAC2蛋白(0.23±0.017 vs.0.49±0.022,P=0.033)和GR蛋白(0.19±0.014 vs.0.64±0.023,P=0.011)表达均显著降低。结论克拉霉素能抑制烟雾暴露的哮喘小鼠气道炎症反应,作用机制可能通过与GR相结合,影响下游HDAC2基因表达有关。     

刀豆蛋白A条件化培养基对体外培养的兔角膜内皮细胞生长的影响

目的研究刀豆蛋白A(concanavalin A,ConA)条件化培养基对体外培养的兔角膜内皮细胞(rabbit corneal endothelial cells,RCECs)生长的影响。方法采用揭取后弹力层及内皮细胞联合组织块法进行RCECs的体外原代培养,分别用含有体积分数为5%、10%、15%、20%ConA的活化大鼠脾细胞条件上清液的RPMI1640培养基进行RCECs原代培养,并用含10%(体积分数)胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)的RPMI1640培养基作为对照。神经烯醇化酶免疫组织化学染色法进行细胞鉴定;噻唑蓝比色法观察各组RCECs生长的状况;SPSS11.0One-way ANOVA及LSD检验进行统计分析。结果成功进行了RCECs的体外培养,培养细胞内神经烯醇化酶阳性表达。ConA条件化培养基各组细胞增殖均高于对照组(P<0.001),且10%、15%ConA条件化培养基组的RCECs细胞数量明显高于其他各实验组(P<0.001)。结论ConA条件化培养基具有促进RCECs生长的作用,可作为培养辅佐剂。     

人晶状体上皮细胞原代培养方法的改进

目的 建立一种简单有效的人晶状体上皮细胞体外培养的方法.方法 用组织块培养法,采用连续花瓣状撕囊法获得人白内障患者的晶状体前囊膜,使用含有表皮生长因子的培养液进行培养,对培养的细胞进行形态学观察及鉴定;在倒置相差显微镜下观察其生长规律,应用免疫荧光组织化学法进行鉴定.结果 体外培养的原代人晶状体上皮细胞在组织块贴壁24 h后从组织块边缘长出,具有上皮细胞的形态特点.αA-晶状体蛋白抗体阳性率几乎100％,鉴定为晶状体上皮细胞.结论 采用连续花瓣状撕囊法获得的组织块较易在体外培养出入晶状体上皮细胞,可用于白内障后囊膜混浊发病机制的进一步研究.     

雷公藤内酯醇抑制牛晶状体上皮细胞增殖

目的探讨雷公藤内酯醇(Triptolide,Tri)对体外培养的牛晶状体上皮细胞(bovine Lens epithelial cell,BLECs)增殖的抑制作用。方法取第4代对数生长期的牛LECs,培养24 h后,加入重组人表皮生长因子(recombi-nant human epithelial growth factor,rhEGF)(终浓度50μg/L)和不同浓度的Tri(40、20、10μg/L),再分别作用6、12、24、48、72 h后,采用MTT法及流式细胞仪检测增殖细胞核抗原(PCNA)在LECs的阳性表达率和增殖抑制率,观察Tri对LECs增殖的抑制作用。结果不同浓度Tri均可抑制处于增殖状态的LECs,并呈剂量和时间依赖性;72 h增殖抑制率分别达到80.09%、61.29%及39.93%。PCNA表达率在6-72 h内随浓度增高和作用时间延长有明显的下调,呈明显的时间-效应关系和剂量-效应关系,且各浓度Tri组与同一时点增殖对照组相比均有非常显著性差异(P<0.01)。结论Tri对牛晶状体上皮细胞增殖有明显的抑制作用。     

Experimental study on cyclosporine A drug delivery system in prevention of posterior capsule opacification after intraocular lens implantation in rabbits

Objective To study the effect of cyclosporine A drug delivery system (CsA-DDS) on the prevention of posterior capsule opacification (PCO) after experimental intraocular lens implantation in rabbit eyes. Methods Twenty healthy New Zealand white rabbits, whose left eyes and right eyes were used respectively as experiment eyes and controls, were subjected to extracapsular lens extraction and artificial lens implantation. During the operation, CsA-DDS with poly (lactideco-glycolide) as carriers or empty DDS was implanted in the capsular bag for the experimental eyes and controls respectively. After the operation, anterior chamber reaction, intraocular pressure (IOP) and CsA concentration were monitored and twelve weeks after the operation, the eyes were extracted for histopathological and morphological examinations. Results There were no differences between the two groups in conjunctival congestion,IOP change and anterior chamber reaction. PCO was less severe in the experimental eyes than in the controls. Light microscopy revealed that posterior capsular membrane in the experimental eyes was slick, with no obvious proliferation,whereas in the controls, there were lens epithelial cell proliferation and cortex regeneration of different degrees.Morphological examination with electron microscope showed that in the experimental eyes, lens epithelial cells did not function actively and apoptosis occurred, whereas in the controls, epithelial cells presented active function. No marked ultrastructural changes were found in either group. Conclusion Cs-DDS can inhibit PCO after intraocular lens implantation in rabbit eyes and does not have toxic effects on the surrounding ocular tissues. Therefore, it has a good potential for clinical use in prevention of PCO.     

大鼠脉络丛上皮细胞的原代培养与鉴定

目的建立一种简便、实用的大鼠脉络丛上皮细胞的原代培养方法,以便进一步对其进行体外实验研究。方法无菌条件下取1～9d的Sprague-Dawley大鼠脉络丛组织,经机械分离后将细胞种植于含100mL/L胎牛血清的DMEM培养基中进行培养,定期进行形态学观察并摄片。在培养第9天左右,采用电子显微镜及Hematoxylin&Eosin(HE)染色进行形态学观察,免疫细胞化学染色法鉴定并计算脉络丛上皮细胞的纯度。结果培养的脉络丛上皮细胞呈梭形或多角形,电子显微镜下有微绒毛,细胞纯度在95%以上。结论利用机械分散法分离新生大鼠脉络丛上皮细胞,进行原代培养可获得高纯度的脉络丛上皮细胞,该方法简便实用。     

体外非接触共培养诱导骨髓间充质干细胞向肺泡上皮细胞的分化

目的 建立体外非接触共培养模型,诱导小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向肺泡上皮细胞的分化.方法 分三组,每组6例.对照组:小鼠MSCs单独培养组;实验组A:正常肺组织单细胞悬液+MSCs;实验组B:损伤肺组织单细胞悬液+MSCs.共同培养8d,激光共聚焦和RT-PCR检测共培养体系下室中的SP-C和AQP5的表达情况.结果 对照组和实验组A都只检测到AQP5;而实验组B可同时检测到AQP5和SP-C.实验组B的AQP5 mRNA的表达量较对照组明显增多(P<0.01),而与实验组A比较,其AQP5 mRNA的表达量也有统计学差异(P<0.01).但是,实验组A与对照组比较则无明显统计学差异(P>0.05).结论 本实验室成功建立了体外非接触诱导小鼠MSCs分化为肺泡上皮细胞的实验模型.     

14周至足月胎儿角膜上皮干细胞的分布及超微结构观察

目的观察胚胎期角膜上皮干细胞的迁移规律及其超微结构,为利用胎儿角膜上皮干细胞提供理论依据。方法观察14至38周胎儿角膜上皮HE及抗人64ku角蛋白单克隆抗体(mAE5)染色反应,并观察胎儿角膜上皮干细胞的超微结构。结果14周角膜上皮由一层基底细胞被覆一至两层鳞状细胞构成,且仅有表层鳞状细胞mAE5弱阳性反应。17至29周缘部上皮有3~5层,中央部有2~3层,整层基底细胞mAE5反应阴性,其上鳞状细胞呈强阳性。33至38周角膜上皮已近成熟,仅剩缘部基底上皮细胞mAE5反应阴性。超微结构显示mAE5阴性反应的基底层细胞核异染色质多,胞质中细胞器较少,且细胞间连接也较少。结论胎儿角膜上皮干细胞呈现由全层向基底层,再向缘部逐渐迁移的分布规律,且超微结构较幼稚。     

硝酸亚铈对培养的正常细胞的毒性作用及对肿瘤细胞的抑瘤效应

目的 探讨硝酸亚铈体外毒性、抑瘤率及其对细胞周期的影响.方法 采用MTT法检测硝酸亚铈对正常细胞系FL、L929体外毒性,对肿瘤细胞系Hela、SGC-7901、B16、Lewis、K562、H_(22)的体外抑瘤效应.采用流式细胞仪检测硝酸亚铈对SGC-7901的细胞周期影响.结果 硝酸亚铈在0.64 mmol/L以下时对FL、L929无任何毒副作用;硝酸亚铈在0.64 mmol/L以上时对以上6种肿瘤细胞均有明显的抑制增殖作用,在0.08 mmol/L时对HeLa、SGC-7901、B16及K562肿瘤细胞表现出显著的抑制增殖作用,在0.01、0.04 mmol/L时,对H_(22)亦有显著抑制作用;0.08 mmol/L硝酸亚铈作用48 h,能显著延长SGC-7901细胞株的G0/G1期,缩短S期;1.28 mmol/L硝酸亚铈作用48 h,除了能够显著延长SGC-7901细胞株的G0/G1期,显著缩短S期以外,还能延长G2/M期.结论 硝酸亚铈对正常细胞具有低毒性和高度选择性,在体外通过影响细胞周期来抑制多种肿瘤细胞的生长和增殖.     

缓激肽对体外培养的牛眼小梁细胞前列腺素E_2信号转导的影响

目的了解在体外培养的牛眼小梁细胞(trabecular meshwork cells,TMCs)中缓激肽(bradykinin,Bk)对前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)信号的影响,探讨两种信号系统在TMCs中相互作用的方式。方法Bk、PGE2单用及联用刺激TMCs,用放射免疫的方法检测细胞内环磷酸腺苷(cAMP)的生成量。结果Bk能够增强PGE2对TMCs的刺激作用;PGE2和Bk联合使用比单用PGE2能更大程度地升高TMCs内cAMP的浓度(P<0.05)。结论Bk可能是通过G蛋白藕联受体(G protein-coupled receptor,GPCR)显著增强PGE2的信号,导致细胞内cAMP的生成显著增多。     

小鼠胚胎肠神经嵴干细胞的分离培养及鉴定

目的建立分离培养及鉴定小鼠肠神经嵴干细胞(gut neural crest stem cells,GNCSCs)的方法,为临床应用奠定基础。方法分离胚鼠肠管,消化后接种于添加N2、B27和碱性成纤维细胞生长因子的DMEM/F12培养基,贴壁培养;连续传代后用血清促进GNCSCs分化;最后用免疫细胞化学方法染色鉴定。结果分离培养的细胞聚集生长,形成的克隆球可以传代;克隆球p75染色阳性;分化后的细胞分别表达肠神经元、神经胶质细胞和平滑肌细胞特异性抗原。结论分离培养的克隆球具有自我更新和多向分化的能力,表达肠神经嵴干细胞的特异性抗原p75,是肠神经嵴干细胞。