正常SD大鼠组织钠泵α亚单位的基因表达

目的　系统研究正常SD大鼠各组织内钠泵α亚单位三种异构体的分布情况。方法　采用分子生物学RT PCR及免疫组织化学技术 ,检测正常大鼠多种组织内钠泵α1、α2及α3亚单位mRNA及蛋白水平的表达。结果　左室心肌主要表达α1与α2亚单位 ,α3亚单位表达较弱 ;肝脏中在mRNA水平α1亚单位表达较强 ,α2与α3亚单位较弱 ,而在蛋白水平三者表达均较弱 ;肾脏中主要表达α1亚单位 ,α2与α3亚单位较弱 ;肾上腺中α1亚单位的表达略高于α2与α3亚单位 ;动脉平滑肌中α2亚单位的表达略高于α1与α3亚单位 ;垂体中三种亚单位的表达均较强 ;下丘脑中α2与α3亚单位表达较强 ,α1亚单位表达较弱。结论　本研究系统揭示了正常大鼠多种组织内钠泵α亚单位三种异构体在mRNA及蛋白水平的表达情况 ,为钠泵生理及病理作用的进一步研究提供了理论及实验依据     

哇巴因与地高辛对大鼠血压影响的对比研究

通过给予大鼠外源性哇巴因，观察其对血压的影响，并同地高辛进行对比研究，发现长期给予小剂量哇巴因可引起大鼠血压明显升高，而地高辛无此作用，间接证明了内源性类洋地黄物质即是哇巴因而非地高辛，同时说明哇巴因是导致血压升高的原因之一，而非其继发性的结果，并为哇巴因与高血压的研究提供了一种新的动物模型：哇巴因-高血压鼠。     

哇巴因、地高辛与高血压发病关系的研究

目的　观察哇巴因、地高辛对组织钠泵α亚单位基因表达的不同影响 ,探讨哇巴因与高血压发病的可能关系。方法　给予大鼠哇巴因 30 μg·kg-1·d-1,地高辛 4 0 μg·kg-1·d-1腹腔注射 7周。用免疫组化及原位杂交方法检测心脏、肾脏、肝脏、腹主动脉和肾上腺组织钠泵α亚单位蛋白水平及mRNA水平的表达。结果　哇巴因与地高辛对上述组织尤其是动脉及肾脏的钠泵α亚单位表达的影响不同 ,哇巴因增强动脉的α2 表达 ,地高辛则抑制其表达 ;哇巴因使肾脏α1表达增强 ,地高辛则使其减弱。结论　哇巴因导致组织钠泵α亚单位基因异常表达 ,这可能在高血压的发病中有重要意义     

内源性哇巴因的研究与展望

围绕着“一种新的激素———内源性哇巴因(endogenous ouabain,EO)”,从“生物学特性和生理学研究”、“病理生理学和临床意义研究”、“检测方法”及“应用研究”四个方向展开对内源性哇巴因历时17年的系列研究,结果显示:EO是一种新的肾上腺皮质激素;EO的异常分泌与高血压等疾病的发生发展密切相关;对高EO的病理生理学作用的干预,有可能成为新的诊断和治疗方法。     

哇巴因对大鼠心脏内皮素系统表达的影响

目的探索哇巴因对大鼠心脏内皮素系统表达的影响。方法雄性SD大鼠随机分为哇巴因组和生理盐水对照组,每周测量收缩压,分别于实验24、、6周放免法测定两组大鼠血浆及心脏组织中内皮素的含量,并用免疫组化法检测大鼠左心室内皮素A、B两种受体的表达。结果大鼠腹腔注射哇巴因4周后收缩压开始上升,6周后哇巴因组大鼠血压与对照组相比有显著性差异。大鼠腹腔注射哇巴因2周后,血浆及心脏组织内皮素水平升高,4周时左心室内皮素A型受体表达增强,而B型受体的表达在整个实验过程中均无显著变化。结论哇巴因可以引起血浆及心脏组织中内皮素质量浓度增加,左心室内皮素A型受体表达增强,这种效应可能是其升高血压及损害靶器官的机制之一。     

哇巴因与盐负荷对大鼠心血管超微结构的影响

目的研究哇巴因及盐负荷对大鼠心血管超微结构的影响。方法哇巴因腹腔注射(20μg/(kg.d))构建动物模型,同时给予1%高盐饮水及正常无盐饮水,并建立阴性对照,喂养8周后电镜观察心脏及升主动脉超微结构变化。结果单独注射哇巴因组(12只)及单独高盐饮食组(10只)均有部分大鼠(分别为10/12和7/10)血压升高,此组大鼠分别为“哇巴因敏感鼠”和“盐敏感鼠”,哇巴因注射加高盐饮水喂养组(10只)大鼠血压都升高。血压升高的大鼠其心脏及升主动脉超微结构明显变化,尤以联合干预者为著。结论哇巴因及盐负荷均可以引起高血压发展过程中的心血管重塑,两者具有协同作用。     

地高辛对心衰患者红细胞~(86)Rb摄取及细胞内钠、钾离子浓度的影响

本研究以人完整红细胞作为心肌细胞的外周模型,用放射性同位素技术,动态观察了地高辛的短期治疗对心力衰竭患者红细胞~(86)Rb摄取情况(即钠泵活性)及细胞内钠、钾离子浓度的影响。结果表明,在地高辛的短期治疗中红细胞钠泵的变化规律可能为:地高中直接抑制钠泵活性,使~(86)Rb摄取值降低及细胞内钾离子浓度降低,后者又刺激钠泵,使其数量增加、活性增强,导致~(86)Rb摄取值波动。本文还对这些变化的有关药理学及治疗学意义进行了讨论。     

哇巴因对大鼠肾皮质Na+-K+-ATP酶活性及多巴胺D1受体mRNA表达的影响

目的 观察哇巴因对大鼠肾皮质Na+-K+-ATP酶活性及多巴胺D1受体mRNA表达的影响.方法 28只SD大鼠随机分为2组,即哇巴因组[27.8μg/(kg·d)哇巴因腹腔注射]和对照组(生理盐水1mL/d腹腔注射),每周测量鼠尾动脉血压,共5周.于第3、5周后分2批处死动物,应用分光光度法测定各组大鼠肾皮质Na+-K+-ATP酶活性,同时采用实时定量PCR(real-time PCR)观察肾皮质中多巴胺D1受体mRNA表达的变化.结果 大鼠腹腔注射哇巴因3周后,两组血压无显著性差异,但哇巴因组大鼠肾皮质Na+-K+-ATP酶活性高于对照组(P<0.01),多巴胺D1受体mRNA表达低于对照组(P<0.01).5周后,哇巴因组大鼠血压与对照组相比有显著性差异(P<0.01),哇巴因组大鼠肾皮质Na+-K+-ATP酶活性进一步增高(P<0.01),多巴胺D1受体mRNA表达进一步减低(P<0.01).结论 长期小剂量外周注射哇巴因可使SD大鼠血压持续升高,这一作用与肾近曲小管Na+-K+-ATP酶活性增加引起水钠潴留有关,多巴胺D1受体可能参与了这一过程.     

哇巴因多克隆抗体对两肾一夹肾血管性高血压大鼠血流动力学的影响

为探讨哇巴因多克隆抗体的降压作用及哇巴因与高血压发病的关系 ,给“两肾一夹 +盐 ( 2 k1 c+盐 )”、“两肾一夹 ( 2 k1 c)”肾血管性高血压大鼠随机静注哇巴因多克隆抗体、硝普钠、正常兔免疫球蛋白 ( Ig G)及生理盐水 ,颈动脉插管观察注射后 3h内血压动态变化。结果表明 :哇巴因多克隆抗体对“两肾一夹 +盐”肾血管型高血压大鼠具有明显的降压作用 ,而对“两肾一夹”高血压模型降压作用不明显。正常兔免疫球蛋白对各种高血压模型均无降压作用。提示内源性哇巴因 ( EO)升高可能是高血压的发病因素之一 ;高盐引起血压升高的机制之一可能是通过刺激 EO的分泌增加。     

慢性盐缺乏、盐负荷对血清内源性哇巴因水平的影响

目的观察慢性盐缺乏和盐负荷对内源性哇巴因(EO)分泌的影响,探讨在慢性盐缺乏或盐负荷状态下EO对SD大鼠钠代谢和血压的调节作用。方法以含0.02%(低盐)、0.5%(普食)及8%(高盐)的普通加碘盐饲料喂养SD大鼠8周,原子吸收分光光度法检测尿液中钠离子、钾离子浓度,酶联免疫吸附法(ELISA)检测EO水平。结果高盐组SD大鼠血压较同期普食组和低盐组显著性升高(P<0.01)。高盐组24 h尿钠排泄量较普食组和低盐组显著增加(P<0.01)。高盐组24 h尿钾排泄量显著低于对照组和低盐组(P<0.01)。高盐组与普食组比较血清EO水平无统计学差异,低盐组于第4周开始血清EO水平高于普食组和高盐组,有统计学差异(P<0.01)。结论慢性盐缺乏时SD大鼠EO水平升高,提示其为慢性盐缺乏状态下维持血压的调节因子;而慢性盐负荷时血压明显升高,但未发现EO显著升高。     

正常SD大鼠血清及组织内源性哇巴因的含量及其意义

探讨正常 SD大鼠血清及组织内源性哇巴因 ( EO)的含量 ,为 EO生理及病理作用的进一步研究提供理论及实验依据。方法　制备高度特异性的哇巴因抗体 ,应用酶联免疫吸附试验 ( ELISA)的方法 ,对正常 SD大鼠血清及组织标本测定其 EO含量。结果　血清、肝脏、肾脏、肾上腺、垂体及下丘脑内 EO含量分别为 ( 1 .1 2± 0 .1 7) μg/ L、( 1 .79± 0 .44) μg/ kg组织、( 1 .0 8±0 .63)μg/ kg组织、( 1 .73± 0 .81 )μg/ kg组织、( 2 7.54± 6.91 )μg/ kg组织、( 1 .83± 0 .54)μg/ kg组织、( 1 0 .1 0± 3.0 8) μg/ kg组织。肾上腺内 EO含量明显高于其它组织及血清 EO含量。结论　确定了正常 SD大鼠血清及多种组织内源性哇巴因的含量 ,提示肾上腺有可能是 EO的主要来源     

低钠饮食性缺钠对大鼠咸味觉敏感性的影响

目的采用条件性厌味(conditioned taste aversion,CTA)——双瓶选择方法检测低钠饮食性缺钠对咸味觉感受功能的影响。方法正常饮食大鼠及低钠饮食大鼠均分为条件组和非条件组,每组10只。建立实验大鼠对0.1mol/L NaCl溶液CTA后,给予系列浓度的NaCl和蒸馏水30min的双瓶选择测试,计算各溶液的味觉喜好值。根据条件组大鼠喜好值显著低于非条件组喜好值的最低味觉溶液浓度,确定咸味觉检测阈值。结果正常大鼠咸味觉检测阈值为0.003～0.005mol/L NaCl,而低钠饮食14d后该阈值降至0.001～0.003mol/L。结论慢性脱钠可下调咸味觉检测阈值,使大鼠对咸味刺激更加敏感。     

山莨菪碱对大鼠急性坏死性胰腺炎肾损伤的保护作用

目的　探讨大鼠急性坏死性胰腺炎 (ANP)肾损伤的机制及山莨菪碱的治疗作用。方法　采用 35 g·L-1(3.5 %)牛磺胆酸钠溶液逆行注射胰胆管建立鼠的ANP模型。观察炎性介质白细胞介素IL 1β、IL 6、肿瘤坏死因子 (TNFα)、内毒素、淀粉酶、磷酯酶A2 (PLA2 )的变化和山莨菪碱的作用。结果　ANP可以诱导炎性介质的明显升高 ,并与肾损伤的严重程度正相关。而山莨菪碱可抑制ANP的炎性介质过度表达 ,减轻肾损伤的程度。结论　炎性介质参与了ANP对肾的损伤 ,山莨菪碱对ANP肾损伤有治疗作用。     

c-fos基因表达与应激性胃黏膜损伤的相关性

目的探讨c-fos基因表达在心理应激性胃黏膜损伤发生机制中的作用。方法利用光电刺激仪,建立心理应激动物模型。大鼠随机分为3组,对照组(C)、规则光组(R)和不规则光组(I)。计数胃黏膜损伤指数(UI),观察胃黏膜组织学变化;采用比色法测定胃黏膜和血液中丙二醛(MDA)的水平;免疫组化法观察胃黏膜中c-fos基因的表达情况。结果①R组和I组的UI值明显高于对照组(P<0.05),且随着应激时间的延长而逐渐升高;②胃黏膜中c-fos表达水平随应激时间的延长而升高,R组与I组明显高于对照组;③c-fos表达水平与黏膜MDA含量呈正相关(r=0.693,P<0.05)。结论心理应激性胃黏膜损伤程度随应激时间的延长和严重程度的增加而加重;心理应激下胃黏膜c-fos表达可能与氧自由基大量生成有关。     

心脏传导阻滞SCN5A基因L1001Q突变体构建和功能研究

目的对作者发现的一个中国3代人心脏传导阻滞家系SCN5A基因新突变L1001Q,构建突变表达载体,利用分子生物学方法和全细胞膜片钳技术观察L1001Q突变的功能。方法一步定点诱变法构建pEGFP-L1001Q-SCN5A突变体;激光共聚焦和Western blotting技术检测突变蛋白定位和表达;全细胞膜片钳技术观察突变体钠电流。结果野生型和L1001Q突变均表达在细胞膜上,且表达量无明显变化。二者最大激活电流分别为(148.34±0.77)pA/pF和(132.59±0.96)pA/pF(P>0.05),L1001Q突变半失活电压V1/2为(-73.25±0.87)mV,较野生型正向转移约3.5mV[V1/2为(-76.71±0.73)mV,P<0.05],L1001Q突变失活后恢复时间常数较野生型稍减小,差异无统计学意义(WT tau=16.8ms,L1001Qtau=14.1ms,P>0.05)。结论 L1001Q突变未影响钠通道蛋白的表达和转运,主要通过改变钠通道门控特性引起钠通道功能减弱进而导致心脏传导阻滞。     

雷诺嗪对兔心房肌细胞快钠电流的影响及使用依赖性阻滞作用

目的 研究雷诺嗪对兔心房肌细胞快钠电流的影响及其是否存在使用依赖性阻滞作用.方法 应用全细胞膜片嵌记录方法,了解雷诺嗪对兔单个心房肌细胞快钠电流的作用,及在不同刺激频率(1Hz、3.3Hz、5Hz)时对快钠电流的影响.结果 30μmmol/L雷诺嗪对兔心房肌细胞快钠电流有明显的抑制作用,其IC_(50)为(25.6±1.8)μmmol/L,并且随着刺激频率的增加其作用加强,存在使用依赖性.结论 雷诺嗪对兔心房肌细胞快钠电流有一定的抑制作用,其存在使用依赖性阻滞作用.