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111.
构建及鉴定携带角蛋白启动子和人乳头瘤病毒16E6/E7基因的重组腺病毒 总被引:2,自引:0,他引:2
目的利用AdEasy系统构建携带人角蛋白启动子的人乳头瘤病毒-16(HPV-16)E6/E7基因重组腺病毒,并通过RT-PCR方法检测E6/E7基因的表达。方法应用PCR方法从含有HPV-16全基因序列的质粒上扩增E6/E7基因,构建pCDNA3.1(-)-K14-E6/E7-polA载体,扩增、酶切获得K14-E6/E7-polA片段插入腺病毒穿梭载体质粒pAdTrack上,构建重组穿梭载体pAdTrack-K14-E6/E7-polA,线性化后与骨架载体AdEasy-1在细菌BJ5183内同源重组得到腺病毒质粒pAd-K14-E6/E7-polA,经人胚肾293细胞包装后得到重组腺病毒pAd-K14-E6/E7-polA。氢化铯(CsCl)梯度离心纯化病毒,提取病毒再感染后的293细胞总RNA,通过RT-PCR方法检测E6/E7基因的表达。结果通过同源重组的方法构建了腺病毒pAd-K14-E6/E7-polA载体,经酶切和测序鉴定该质粒构建成功。293细胞包装3d后观察到绿色荧光蛋白(GFP)表达,CsCl梯度离心纯化最终获得7.2×1010pfu/mL滴度的重组病毒;用该滴度病毒重新感染293细胞3d后,提取细胞总RNA,RT-PCR检测E6/E7有表达。结论利用新型腺病毒载体AdEasy系统可在短期内制备同时表达GFP和E6/E7的重组腺病毒pAd-K14-E6/E7-polA。这将为进一步研究HPV-16E6/E7基因功能及利用基因治疗女性宫颈癌奠定了基础。 相似文献
112.
本文深入研究了基于VaR的投资决策问题,给出了VaR约束下的投资组合优化模型。该模型在Markowitz均值一方差模型的基础上,加入了VaR约束,保证了与我国金融机构现有投资选择方法在技术上的一致性。我们还给出了一种几何求解方法,巧妙地解决了传统Laganerge乘子法无法处理上述模型的问题。 相似文献
113.
利用在碳素纤维增强碳基材的C/C复合材料中浸渗铜合金,并制作C/C复合材料滑板,其强度及韧性优异,虽然属于碳系滑板,但能够用螺栓与金属滑板同样直接安装到弓头托架上。另外,C/C复合材料滑板相比金属系滑板及传统碳系滑板价格较高,故有待降低其使用成本。本文介绍了重新评价碳素纤维含量以削减制造成本,并对滑板使用中的极限厚度的目标值进行研究的结果。 相似文献
114.
当前,随着科学技术水平的不断提高,各个国家都更加重视汽车驾驶的安全,汽车驾驶模拟器与现代化汽车驾驶教学结合起来,利用现代化的教学技术手段来提高教学的实际效果和质量。文章认为在汽车驾驶教学过程中使用汽车模拟器对于教学工作质量的提高具有重要的现实意义,能够有效提高学员对于基础理论知识的理解以及实践技能地提高。对于智能汽车驾驶模拟器在汽车驾驶教学中的应用意义,希望为有关专业人士带来一定的参考与借鉴。 相似文献
115.
<正>在检测车载电网型电源电路时,类似"面对电路故障,首查电源正极线与搭铁"、"查找电路故障,就如顺藤摸瓜,要紧抓电流流经的电路这个藤"这样经典的维修宝典,难免显得有些牵强和不足。车载电网控制单元将电源的使用对象和电流 相似文献
116.
62201部队在上级业务部门的有力领导下,认真贯彻落实总部《军队汽车维修技术兵职业技能鉴定工作实施办法》,坚持“以鉴促建”、“以评促学”,加强组织领导,实施科学管理,共计鉴定中级汽车维修技工90余名、初级汽车维修技工270余名,充分调动了汽车维修技术兵爱军精武的积极性,有力促进了汽车维修技术兵队伍建设,进一步提升了车辆装备技术保障水平。 相似文献
117.
针对杭黄铁路富阳至建德段线路富春江南北两岸城市密布且地质、地形条件复杂等特点,为选择线路走向,对可能的方案进行了研究,通过技术经济比较、与城市规划协调性分析、工程实施难易程度和风险对比分析以及土地资源利用和环境保护、运营安全和旅客舒适度分析等方法进行论证,提出了合理的线路方案。 相似文献
118.
119.
临近铁路既有线施工深基坑及管桩等冲击性桩基对既有线威胁巨大,欲了解其对既有线的影响程度则需要借助各种监测来实现。 相似文献