通用腺伴随病毒载体的构建及表达报告基因GFP的实验研究

目的构建基因治疗通用型腺伴随病毒(AAV)载体并检测其转染外源基因作用。方法使用限制性内切酶切除pSSV9int质粒中的AAV病毒Rep和Cap基因元件后,插入了重组腺病毒专用穿梭质粒-pACCMVpLpA的含有CMV启动子、多克隆位点(MCS)和多聚腺苷酸信号(PolyA)的表达盒,构建了重组AAV通用载体质粒pSSHG-CMV。在该质粒MCS插入绿色荧光蛋白(GFP)基因后,使用pSSHG-CMV-GFP、GFP140和pAAV/Ad三种质粒共转染293包装细胞,制备GFP重组AAV。应用斑点杂交实验检测重组病毒滴度,并将该病毒感染新生大鼠NIH3T3细胞,荧光显微镜观察GFP表达。结果重组AAV的滴度在浓缩前可达2×1011cfu/mL,浓缩后可达2×1013cfu/mL,表明成功地构建了重组AAV载体。插入外源基因GFP后,在包装病毒和辅助质粒的联合作用下,能产生具有感染性的重组AAV。感染了重组GFP-AAV的大鼠NIH3T3细胞表达了明显的GFP荧光。结论构建的重组AAV通用载体pSSHG-CMV可转染外源基因,这为进一步的基因治疗奠定了基础。     

水飞蓟宾对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用及其机制

目的研究水飞蓟宾(Silibinin,SB)在体外对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用及其相关机制。方法采用MTT法观察不同浓度SB对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用;倒置显微镜下观察细胞形态变化;RT-PCR检测凋亡抑制因子Survivin的mRNA表达变化。结果MTT检测发现:随着SB浓度增加和作用时间延长,对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用增强,且各组间比较均有显著性差异(P<0.01),并呈时间-剂量依赖关系;倒置显微镜发现应用SB干预后,5637细胞体积缩小,变形,胞浆浓缩,核固缩深染;人膀胱癌细胞株5637中Survivin的mRNA表达随着SB浓度增加和时间延长相应下降。结论SB可抑制人膀胱癌细胞株5637的增殖;并下调凋亡抑制因子Survivin的mRNA表达。     

传统村镇旅游规划与开发模式探讨——以黟县西递古村落为例

传统村镇旅游发展存在着旅游过程生活化与村镇设施功能实用性、景区面积有限性与旅游者人数增长、传统村镇景区面积局限性与旅游者人数增长等之间的矛盾。结合西递古村落实际，认为传统村镇旅游地在发展过程中应坚持“修旧如旧”的原则，对少部分村落内居民进行迁居，同时坚持景区分区、建筑分类、游览分线、服务建区等规划与开发构想，考虑资源本体特征和游客需求等要素，合理开发。     

我国转体斜拉桥发展综述

桥梁在跨越交通繁忙的既有线路时,采用转体法施工具有显著的优越性。斜拉桥由于结构上的优点及其美观的造型,在城市中常作为跨既有线路桥梁的首选桥型。为了解我国转体斜拉桥的发展状态与趋势,对我国已建、在建的转体斜拉桥进行调研,阐述了我国转体斜拉桥的发展历程。在此基础上,对转体斜拉桥主梁、主塔结构形式及特点、斜拉索构造与布置形式、转体方式进行对比分析,归纳出我国转体斜拉桥的发展特点。同时对转体施工中的转动钢球铰、转动系统以及转体稳定性控制等关键技术进行总结,为今后我国转体斜拉桥的设计与施工提供参考。     

机场应急救援系统软件架构设计

传统的机场应急救援开展方式暴露出很多缺陷，如何利用计算机信息化技术提高机场应急救援工作的效率，减少突发事件对机场正常运营的影响，降低救援成本具有重要的实际意义。基于J2EE体系结构。提出了集成Struts和Hibernate框架的机场应急救援系统架构模型，并对系统功能模块划分和具体的业务流程进行了分析。     

公路交通与经济发展适应性客观模糊评价

笔者根据适应与经济发展的一般含义，探讨了公路与经济发展相适应性内涵，拟定了其评价指标，建立了量化模型，说明了量化过程，提出了客观模糊评价方法，设定了评价指标的评语集、评语值域和模糊隶属度函数，然后对我国1991～1999年公路交通与经济发展的适应性进行了评价，得出了不适应性结论。     

城市机动车拥有量发展战略研究

以路网广义容量计算理论为前提,通过对规划年路网容量的计算,从供需平衡的角度和对未来路网机动车运行状况的估计,确定规划年机动车限制保有量的预测值,从而为城市机动车发展战略提供重要的决策依据.最后根据文中提出的计算模型对重庆市主城区未来机动车发展状况进行实例分析.     

武隆县道路交通安全调查分析

重庆市武隆县位处我西部重丘地带,道路交通情况复杂,重、特大事故发生率高,交通安全形势较为严重.其交通事故的发生与当地交通执法、道路设计和管理缺陷、环境条件等有密切关系.     

Moiré条纹密度对条纹图噪声及相位混频的影响

分析了Moiré条纹密度对条纹图噪声及相位混频的影响,提出了一种调整Moiré条纹密度的方法以有效减少条纹图噪声与包裹相位图噪声,并消除条纹过密产生的相位混频。试验测量表明,该方法能够获得可靠的测量结果,具有较好的测量精度。     

二灰碎石水泥冷再生在旧沥青路面维修养护中的应用

二灰碎石水泥冷再生技术能起到节约资源、降低工程造价的作用;实体工程对原沥青路面进行病害调研及结构评估后确定采用二灰碎石水泥冷再生基层的维修方案。通过室内试验确定出水泥剂量为3.8%、最佳含水量为8.9%的二灰碎石水泥冷再生混合料能够满足作为下基层的规范设计要求;冷再生基层施工结束后进行静态弯沉、7d无侧限抗压强度和压实度检测,结果均满足要求。