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41.
构建及鉴定携带角蛋白启动子和人乳头瘤病毒16E6/E7基因的重组腺病毒 总被引:2,自引:0,他引:2
目的利用AdEasy系统构建携带人角蛋白启动子的人乳头瘤病毒-16(HPV-16)E6/E7基因重组腺病毒,并通过RT-PCR方法检测E6/E7基因的表达。方法应用PCR方法从含有HPV-16全基因序列的质粒上扩增E6/E7基因,构建pCDNA3.1(-)-K14-E6/E7-polA载体,扩增、酶切获得K14-E6/E7-polA片段插入腺病毒穿梭载体质粒pAdTrack上,构建重组穿梭载体pAdTrack-K14-E6/E7-polA,线性化后与骨架载体AdEasy-1在细菌BJ5183内同源重组得到腺病毒质粒pAd-K14-E6/E7-polA,经人胚肾293细胞包装后得到重组腺病毒pAd-K14-E6/E7-polA。氢化铯(CsCl)梯度离心纯化病毒,提取病毒再感染后的293细胞总RNA,通过RT-PCR方法检测E6/E7基因的表达。结果通过同源重组的方法构建了腺病毒pAd-K14-E6/E7-polA载体,经酶切和测序鉴定该质粒构建成功。293细胞包装3d后观察到绿色荧光蛋白(GFP)表达,CsCl梯度离心纯化最终获得7.2×1010pfu/mL滴度的重组病毒;用该滴度病毒重新感染293细胞3d后,提取细胞总RNA,RT-PCR检测E6/E7有表达。结论利用新型腺病毒载体AdEasy系统可在短期内制备同时表达GFP和E6/E7的重组腺病毒pAd-K14-E6/E7-polA。这将为进一步研究HPV-16E6/E7基因功能及利用基因治疗女性宫颈癌奠定了基础。 相似文献
42.
水轮发电机组检修的计算机仿真系统开发 总被引:2,自引:0,他引:2
为了解决水力发电厂检修人员的技术培训及制定合理、高效的检修方案等问题,采用计算机仿真技术、虚拟现实技术及多媒体技术相结合的方法,开发了水轮发电机组检修仿真系统,系统开发的关键技术包括水轮发电机组所有零件的三维数字化建模、检修技术和工艺知识库建立、三维可视化浏览技术、基于虚拟现实的动态装配仿真技术及多媒体技术,该系统已成功地用于某大型水力发电厂的人员培训和检修方案的辅助制定。 相似文献
43.
某些特殊地区的水泥土地基既受到环境侵蚀又受到冻融循环的影响.通过室内试验的方法,研究水泥土先经受不同浓度和不同pH值的侵蚀性溶液侵蚀下,经过反复冻融后水泥土的强度特征,并探讨其强度改变的机理.试验结果表明,水泥土的强度特性受水化学作用和冻融循环的双重影响,其中水化学作用的影响贯穿全过程,冻融的影响与冻融循环次数关系紧密.结果可为特殊环境地基的设计与工程应用提供指导作用. 相似文献
44.
结合湄洲岛独特的海岛风貌(海上孤岛)、岛上的文化特色(妈祖文化)及地形、地质和水文条件等,对目前常用的跨海型式(桥梁、隧道)各自的特点进行分析、比较,提出独特的跨海型式——桥隧组合方案,既实现湄洲岛陆地交通,又能较好地保持湄洲岛独特的海岛风貌,更好地宏扬妈祖文化。 相似文献
45.
46.
随着整车及零部件设计和制造工艺快速发展,用户对车辆感知要求不断升级,如使用率极高的车门在关闭时,是否轻便、灵活,给人一种沉稳感,关注越来越高。本文通过分析X车型前门关闭力重问题,找出零件精度、装配误差等制造影响因素,剖析根本原因,制定解决措施。其他车企如遇类似问题,可参考本文制定解决方案,以提高问题解决效率,提升产品质量。 相似文献
47.
48.
49.
船舶安全检查是海事执法的核心工作,是水上安全监督的重要手段,只能加强不能放松,更不能弱化。本文对船舶安全检查规则更新后所出现的问题及对策进行了探讨,呼吁海事部门在充分发挥管理相对人的主观能动性的同时,需要不断探寻和把握监管的力度和手段,做到有力监管和便民利民的统一,使船舶安全管理水平不断迈上新台阶。 相似文献
50.
忻州市云中河傅山路桥是规划中连通云中河两岸路网的重要通道,也是云中河的重要景观节点。在满足道路通行基本功能的前提下,经过重点考虑桥梁整体景观效果的综合比选,该桥采用主跨90m下承式复式钢箱系杆拱梁组合桥方案,为拱梁固结、墩梁分离的连续结构体系,桥面标准宽度为43.5m,设置双向8车道。主梁采用单箱多室大悬臂混凝土箱形截面,主、副拱肋均采用梯形钢箱截面,拱脚位置设置系杆索平衡水平推力。该桥按照索辅梁桥理念进行设计,主梁承担约70%的恒载,通过充分发挥主梁的承载能力,提高结构效率,降低拱肋负荷,减小拱肋尺寸,实现桥梁结构创新、桥梁美学与工程经济的融合;通过采用可单根张拉、单根换索的钢绞线系杆索以及带PBL剪力键的钢-混接头方案增强结构的耐久性。 相似文献