反义HSP70真核表达载体的构建和在人喉癌细胞的表达

目的　进行促凋亡治疗喉癌实验 ,构建和鉴定携带反义HSP70 (heatshockprotein 70 )基因的真核表达载体。方法　将HSP70cDNA反向克隆入 pcDNA 3.1,构建CMV启动子控制的真核表达载体 pcDNA AHSP70 ,用酶切鉴定结果 ;应用该载体转染人喉表皮样癌细胞Hep 2 ,G4 18筛选阳性克隆 ;westernblot和免疫组化检测转染前后瘤细胞的HSP70的表达。检测转染前后瘤细胞的生物学性状。结果　获得 pcDNA AHSP70真核表达载体 ,HSP70反义RNA阻断了Hep 2细胞的HSP70的表达 ,经westernblotting和免疫组化证实 ,实验组瘤细胞不能表达或低表达HSP70 ,而对照和空载体组高表达HSP70。转染反义HSP70的真核表达载体的Hep 2细胞比空载体组和对照组的细胞生长缓慢 ,细胞周期可见实验组出现亚二倍凋亡峰 ,而空载体组没有。结论　本研究成功构建了反义HSP70真核表达载体并在人喉癌细胞得以表达。     

通用腺伴随病毒载体的构建及表达报告基因GFP的实验研究

目的构建基因治疗通用型腺伴随病毒(AAV)载体并检测其转染外源基因作用。方法使用限制性内切酶切除pSSV9int质粒中的AAV病毒Rep和Cap基因元件后,插入了重组腺病毒专用穿梭质粒-pACCMVpLpA的含有CMV启动子、多克隆位点(MCS)和多聚腺苷酸信号(PolyA)的表达盒,构建了重组AAV通用载体质粒pSSHG-CMV。在该质粒MCS插入绿色荧光蛋白(GFP)基因后,使用pSSHG-CMV-GFP、GFP140和pAAV/Ad三种质粒共转染293包装细胞,制备GFP重组AAV。应用斑点杂交实验检测重组病毒滴度,并将该病毒感染新生大鼠NIH3T3细胞,荧光显微镜观察GFP表达。结果重组AAV的滴度在浓缩前可达2×1011cfu/mL,浓缩后可达2×1013cfu/mL,表明成功地构建了重组AAV载体。插入外源基因GFP后,在包装病毒和辅助质粒的联合作用下,能产生具有感染性的重组AAV。感染了重组GFP-AAV的大鼠NIH3T3细胞表达了明显的GFP荧光。结论构建的重组AAV通用载体pSSHG-CMV可转染外源基因,这为进一步的基因治疗奠定了基础。     

重庆主城区停车问题与综合改善对策研究

结合重庆主城区停车难的实际情况,从交通管理、基础设施建设、智能交通应用、换乘等多方面对重庆主城区停车发展对策进行探讨分析,提出了近期和中远期重庆主城区停车发展的建议和对策,以改善重庆停车难问题。     

含软弱夹层和均质围岩隧道洞口仰坡动力特性研究

针对洞口段均质围岩仰坡和含软弱夹层仰坡2种工况,开展大型振动台模型试验,分析水平和竖向激振下仰坡加速度和洞口段仰坡模型土振动特性。研究结果表明:水平向激振时仰坡存在明显加速度放大效应,竖向激振对含软弱夹层仰坡的影响不可忽视;洞口段隧道衬砌各点加速度时程曲线不一致,衬砌结构受力状态复杂;在水平向激振作用下,均质仰坡模型土坡肩土体先出现张拉裂缝,而后坡肩土体局部出现倾倒崩塌,最后沿坡面滑落堆积;含软弱夹层仰坡坡脚土体先出现挤压破碎,而后坡顶表面沿软弱夹层位置出现张拉裂缝,上覆土体沿软弱夹层滑动,最后土体大规模崩塌、滑落。本文为山岭隧道洞口段边坡抗减震研究和设计提供参考。     

CBTC区域控制器若干技术研究

区域控制器是CBTC系统的核心设备,它根据列车和地面的动态信息,实时生成列车行车许可命令,并通过无线通信系统传输给车载子系统,保证其管辖内的所有列车的安全运行,并实现移动闭塞。在移动闭塞设计中,对列车位置的准确识别是移动授权分配的前提,是复杂运营场景的控制基础。在对区域控制器列车位置识别分析的基础上,展开分析列车出入段、跨区切换等复杂运营场景。     

新拌混凝土测试仪应用的研究

该论主要针对FCTl01新拌砼测试仪的应用进行了研究，使用该仪器可以在工程当中现场得出新拌合砼的水灰比，坍落度和预测出其28d强度。     

XBASE数据库系统数据字典的设计与实现

简述了为ＸＢＡＳＥ数据库应用系统数据字典的必要性及数据字典的功能；重点讨论了数据字典中数据内容及组织方式；对数据字典核心功能－系统管理的实现进行了研究。     

数学文化与数学教育探讨

论述数学文化的内涵及其特点，指出数学工具论的危害和树立以人为本的数学教育观的必要性，提出改革数学教育的设想。     

天津富民桥施工过程主梁应力分析

天津富民桥为(157.081 86.4) m单塔空间索面自锚式悬索桥.通过对天津富民桥施工过程中主梁关键截面的应力跟踪测试及对测试应力数据的处理分析,掌握主梁在施工各阶段的结构受力情况.分析表明,主梁在施工过程中受力比较合理,基本处于受压状态,拉应力较小,均在安全控制范围内.     

庆大霉素中毒豚鼠蜗核SP免疫反应阳性神经元的变化

用免疫组化方法探讨庆大霉素耳中毒时蜗核ＳＰ免疫反应神经元的胞体截面积及细胞数的变化。结果发现庆大霉素１００ｍ ｇ·ｋｇ－ １·ｄ－ １腹腔注射后１ｄ,豚鼠蜗核ＳＰ样神经元胞体截面积立即发生了变化,并持续到连续注药第２１ 天;ＳＰ样神经元细胞数量的相对变化发生在注药３ｄ 以后。结果提示：①庆大霉素中毒豚鼠蜗核神经元的变化和耳蜗的病变可能同时发生或蜗核早于耳蜗病变。②临床上治疗氨基甙类抗生素所致耳聋应兼治中枢病变并尽早实施