GM-CSF基因修饰的卵巢癌细胞NuTu-19/GM-CSF的构建

目的构建能分泌表达粒细胞-单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)的卵巢癌细胞NuTu-19/GM-CSF。方法将T-h GM-CSF重组质粒转化入感受态大肠杆菌中,筛选出耐药性单克隆菌落送测序。利用PCR技术扩增出GM-CSF目的基因片段,将PCR产物连入pGEM-T easy载体,转化入大肠杆菌中扩增,用SDS碱裂解法提取Teasy-GM-CSF重组质粒,用限制性内切酶酶切Teasy-GM-CSF重组载体,连入经相同酶酶切的pLXSN反转录病毒载体中。用磷酸钙沉淀法转染PA317包装细胞系进行病毒包装,用含有病毒的上清液感染卵巢癌NuTu-19细胞,经G418加压筛选感染成功的NuTu-19/GM-CSF细胞,用免疫细胞化学和ELISA法检测NuTu-19/GM-CSF分泌表达GM-CSF蛋白的情况。结果T-h GM-CSF重组质粒测序结果与GenBank Accession#:NM_000758基因序列对比后确定为人类GM-CSF基因编码序列;PCR产物酶切电泳在Mark 400-500 bp中有一条带,符合GM-CSF基因序列长度;重组Teasy-GM-CSF质粒用EcoRⅠ、BamHⅠ限制性内切酶酶切后,电泳鉴定在400-500 bp之间有一目的条带,重组反转录病毒质粒pLGM-CSFSN酶切电泳有目的条带;G418加压筛选感染后的NuTu-19细胞,14 d后慢慢形成单克隆继续生长;免疫细胞化学检测到感染成功的NuTu-19细胞膜表面有明显的棕褐色颗粒沉淀,ELISA法检测细胞培养上清液中GM-CSF的质量浓度为150 pg/mL。结论成功构建了能分泌表达人GM-CSF蛋白的卵巢癌细胞NuTu-19/GM-CSF,为以后研究卵巢癌免疫治疗提供必备、有效、可靠的工具基础。     

我国省（市）辖区国土面积排名2014年

处于低谷期多年的海运业迎来了首个国家层面的发展战略。记者9月3日从国务院新闻办召开的新闻发布会上获悉,《国务院关于促进海运业健康发展的若干意见》日前发布,我国海运业迎来全面深化改革、稳步扩大开放的新机遇。这是新中国成立以来我国国家层面第一个关于海运业发展的顶层设计,也是第一次比较全面系统地明确海运发展的战略目标和主要任务。特别是在当前海运发展受国际金融危机影响。     

现在还未进入后合资时代 上海车展佛吉亚采访记

本届上海国际车展前夜,传来了佛吉亚和长安集团签署了持股比例50:50的合资公司协议。值此车展媒体日,本刊记者应邀采访了佛吉亚中国区总裁蔚蓝先生。古人云三十而立。现在国内一直都在提"后合资时代"这一概念,尤其对整车企业而言,这样的声音是比较强盛的。但佛吉亚和长安是一种整零合资的模式,请问蔚蓝先生怎样看待这样一个后合资时代背景下的整零合资模式,以及它的未来走向。首先我觉得现在应该还没有进入这样一个后合资时代,因为我们的合资模式还是非常普遍的,与主机厂之间仍然还有很多的合资合作。同时,在佛吉亚的主要业务领     

城市更新背景下的快速路功能提升关键技术研究——以上海市外环普陀段交通功能提升为例

随着我国城市化逐步推进,特别是在“坚持节约和集约利用土地、严格控制新增建设用地、加大存量用地挖潜力度、提高土地利用效率”的高质量发展基调下,我国城镇建设转向以存量更新为主的新阶段。城市的发展离不开交通的支撑,因此,在新阶段城市更新背景下,探究如何提升城市快速路功能是非常值得研究的课题。以外环普陀段功能提升项目为例,分析地区发展与外环建设形式间的主要矛盾,从重构地区干道路网、提高路网功能、缝合城市用地等方面详细论证提升的必要性,并进一步提出功能提升的具体方案。     

卵巢上次性肿瘤ER、TNF表达及相互关系

用肿瘤坏死因子（TNF）、雌激素受体（ER）的单克隆抗体对46例卵巢上皮肿瘤及10例正常卵巢新鲜组织的冰冻切片，进行TNF、ER免疫组化ABC法测定。结果：卵巢囊腺癌TNF及ER表达的阳性率高于卵巢囊腺瘤；临床分期越晚，TNF及ER表达强度越高。表明卵巢上皮性肿瘤TNF及ER表达与其组织学类型及临床分期有关。提示TNF在卵巢癌中的表达可预测预后，ER的表达可指导卵巢肿瘤内分泌治疗。     

春天的笑声

春天 寂静了一冬的河水 在春风的煽动下 开始热烈的喧嚣了 灿烂了一生的心事 都争先恐后的 在杏树桃树的枝头发表 春天轰轰烈烈的春天来了 好一派改天换地的模样     

后张法预应力空心板梁施工方法

介绍了后张法预应力空心板梁施工方法。     

黄河堤防工程维修养护工作的探索

工程维修养护工作要求做到日常化、标准化、规范化、精细化、科学化施工管理。为了更好的落实五化,笔者认为有必要对其进行深层次的解析,让大家充分了解其内涵和相互之间的关系,便于更好的贯彻落实。     

公路建设中施工机械的选配

公路建设项目施工过程中,首先需要解决的问题是施工机械的配备——选型、组合和购置(或租赁)。公路工程施工机械合理选择的主要依据、一般原则、选择方法以及科学的配套组合等技术问题进行简要的总结、分析