聚合酶链反应(Ⅰ)

<正> 聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)是近年来发展起来的一项革命性技术,由于它能把痕迹量的遗传物质迅速而简便地扩增百万倍,使原来无法进行分析和检测的各种项目得以完成,所以PCR的问世为传统基因分析、基因诊断技术带来了变革。现已公认,PCR是90年代最具发展前景的新技术之一。该技术已广泛应用于生物医学的各个领域,并取得了令人瞩目的成绩。     

一种简便、高效的DNA片段转移印迹技术

<正>核酸分子杂交是分子生物学研究中最重要的基本技术之一。其中,膜上印迹转印杂交则是最常用的一种分子杂交方法。它不仅在基因定位、定性和定量分析上极为常用,而且是分子克隆、基因突变及基因诊断上不可缺少的关键技术。当前,southern转印印迹技术虽然从经典的虹吸印迹法发展到电转印法、真空印迹法等,但仍有许多不能令人满意之处,例如:操作不便,需要特殊的仪器设备,每次转印结果仅供一次杂交之用等。为了克服上述不足,同时考虑到精简步骤和适应于教学,作者在实践中不断摸索、总结及参考国外经验,对常用的虹吸法southern印迹技术进行了改良。实验证明该方法简便、经济实用,适合基层应用。     

用聚合酶链反应检测口腔癌组织中人乳头状瘤病毒的E_6转化基因

作者采用聚合酶链反应（ＰＣＲ），并对照核酸斑点杂交法对１０例口腔恶性肿瘤组织中ＨＰＶ１６Ｅ６转化基因进行了检测。这些肿瘤包括６例口腔粘膜鳞癌（ＳＣＣ），２例涎腺腺样囊性癌（ＡＣＣ），１例涎腺恶性多形性腺瘤（ＭＰＡ）和１例腭部软组织胚胎性横纹肌肉瘤（ＥＲ）。对照组为１０例非肿瘤组织，包括唇裂、腭裂粘膜组织标本各５例。结果表明两种方法检测结果基本一致，肿瘤组阳性６例（６／１０），包括４例ＳＳＣ，１例ＡＣＣ和１例ＥＲ（除外１例ＡＣＣ用核酸杂交法检测为弱阳性），其余为阴性；对照组用核酸杂交法检测４例，除１例唇裂标本为弱阳性以外，均为阴性（０／４）；用ＰＣＲ法检测１０例均为阴性结果（０／１０）。两组间ＨＰＶ１６Ｅ６转化基因的检出率有明显差异（Ｐ＜０．０５）。这一结果为开展口腔癌的ＨＰＶ病因学研究提供了参考资料。     

大骨节病和腺病毒感染的相关性研究

目的研究腺病毒感染与大骨节病(KBD)发病的关系。方法用巢式聚合酶链式反应(Nest-PCR)检测KBD病区和非病区儿童全血及KBD患者血清接种软骨细胞的腺病毒DNA,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测KBD病区和非病区儿童血清腺病毒IgG抗体。结果KBD病区KBD儿童、病区对照组儿童和非病区儿童全血腺病毒DNA的阳性率分别为33.33%、34.92%和28.57%,腺病毒IgG抗体的阳性率分别为68.29%、65%和68.97%,差异无统计学意义(P>0.05);KBD患者血清培养细胞腺病毒DNA的PCR结果均为阴性。结论KBD病区和非病区儿童腺病毒均有较高的检出率;KBD的发病和腺病毒感染可能无直接病因学关系。     

应用PCR方法检测人乳头瘤病毒的E_7转化基因

应用聚合酶链反应技术（ＰＣＲ）检测５４份子宫颈癌活检标本中人乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ－１６）Ｅ７转化基因的存在情况，结果显示阳性率为７２．２％（３９／５４）。ＨＰＶ－１６Ｅ７转化基因在人子宫颈癌组织中的高检出率，证实该转化基因与其发生关系密切。本研究同时证明，ＰＣＲ方法具有敏感、特异、快速和实用特点，值得推广。     

UL2基因与HSV-1在三叉神经节中潜伏感染的相关性

目的　深入了解UL2基因与HSV 1在三叉神经节潜伏感染的相关性。方法　选择HSV 1国际参考标准株F株、HSV 1RE(株 ) (UL2基因插入突变株 )和其亲代HSV 1△ 30 5株 (TK- )三株病毒进行对比分析研究。对三株HSV 1病毒腹腔免疫接种小鼠双侧三叉神经节分别进行PCR扩增。结果　HSV 1 (RE)和HSV 1 (△ 30 5)组HSV 1潜伏感染率明显低于HSV 1 (F)组 (P <0 0 2 5) ,提示UL2基因可能在HSV 1形成潜伏感染过程中起一定作用。经HSV 1 (F)病毒攻击实验后三个实验组小鼠 ,其潜伏感染率无明显变化 ,而对照组小鼠潜伏感染率明显高于HSV 1 (RE)组和HSV 1 (△ 30 5)组 (P <0 0 1 )。结论　HSV 1 (RE)株的免疫接种可以预防HSV 1潜伏感染的建立。同时也为HSV 1RE株作为神经系统疾病基因治疗载体提供了理论依据     

DETECTION OF E6 TRANSFORMATION CENE OF HUMAN PAPILLOMAVIRUS TYPE 16 IN ORAL CANCERS USING POLYMERASE CHAIN REACTIONS （ABSTRAC

ＤＥＴＥＣＴＩＯＮＯＦＥ６ＴＲＡＮＳＦＯＲＭＡＴＩＯＮＣＥＮＥＯＦＨＵＭＡＮＰＡＰＩＬＬＯＭＡＶＩＲＵＳＴＹＰＥ１６ＩＮＯＲＡＬＣＡＮＣＥＲＳＵＳＩＮＧＰＯＬＹＭＥＲＡＳＥＣＨＡＩＮＲＥＡＣＴＩＯＮＳ（ＡＢＳＴＲＡＣＴ）ＺｈａｎｇＴｏｎｇ；ＣｈｕＹｏ...     

宏基因组学及其技术的研究进展

宏基因组学是研究生态群体基因功能和其相互作用的新科学领域,以特定生态环境中微小生物遗传物质的总和作为研究对象,基本研究策略是通过克隆、异源表达,筛选出有用的新基因及其产物。宏基因组学为生命学科和药学研究提供了一个强有力的新技术,并在包括医学在内的许多领域取得了新成就。本述评对宏基因组学的概念、技术和应用作了简要介绍。     

DIG－DNA探针检测宫颈癌组织中HPV－16的E_7转化基因

应用地高辛配基（Ｄｉｇ－１１－ｄＵＴＰ）标记人乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ－１６）Ｅ７转化基因作探针，分别检测了宫颈癌活检组织、宫颈炎及正常宫颈脱落细胞ＤＮＡ。其检出率为：宫颈癌中４２．１％（２４／５７）、宫颈炎中２．５％（１／３９）、正常宫颈中５．５％（１／１８）。宫颈组织中ＨＰＶ－１６Ｅ７转化基因的检出率较高，提示该转化基因与宫颈癌的发生可能密切相关。本研究也证实ＤＩＧ配基标记的Ｅ７基因探针具有特异、敏感、安全、稳定和能反复使用的优点，适合基层使用。     

APPLICATION OF DIGOXIGENIN LABELED PROBES TO DETECTION AND TYPING OF HERPES SIMPLEX VIRUS

ＣｈｕＹｏｎｇｌｉｅ（楚雍烈）；ＬｉｕＱｉａｏｆａｎｇ（刘巧芳）；ＬｉｕＺｈｅｎｇｆｅｎｇ（刘正风）；ＤｕＹｉｈｕａ（杜忆华）；ＬｉｕＹａｎｎａ（刘延娜）ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮＯＦＤＩＧＯＸＩＧＥＮＩＮＬＡＢＥＬＥＤＰＲＯＢＥＳＴＯＤＥＴＥＣＴＩＯＮ...