hGPx-1-198Leu真核表达载体的构建与鉴定及在H9C2细胞中的表达

目的构建含有人GPx-1基因Pro198Leu多态的真核表达载体,为深入研究GPx-1基因Pro198Leu多态在相关疾病中的作用与机制提供依据。方法采用全基因合成的方法合成含多态位点的人GPx-1基因cDNA片段,同时在基因5′端和3′端分别引入BamHⅠ和NotⅠ酶切位点,通过限制性内切酶酶切目的片段和真核表达载体pEGFPN3,再用T4DNA连接酶将含有目的基因的片段定向插入到载体pEGFP-N3真核人巨细胞病毒启动子下游。连接产物转化至DH5α中。挑取克隆、提取质粒进行鉴定。将hGPx-1-198Leu真核表达载体转染HEK293细胞,观察转染效率,并采用RT-PCR检测转染重组载体后细胞中GPx-1的mRNA表达水平。重组载体转染H9C2细胞,观察补硒之后的GPx-1表达情况。结果获得目的基因cDNA片段全长869bp,PCR和测序鉴定载体中含有人GPx-1-198Leu基因cDNA。重组载体转染HEK293细胞后检测到GPx-1的mRNA水平比未转染组及空质粒转染组明显升高,为深入研究GPx-1基因Pro198Leu多态在相关疾病中的作用与机制奠定了基础。H9C2细胞在转染后GPx-1蛋白水平升高并且随着硒浓度的升高而升高。结论成功构建了含Pro198Leu多态位点的hGPx-1真核表达载体,并且也插入了保证该基因有效表达的硒代半胱氨酸插入序列。     

江苏省低碳交通运输发展现状及对策建议

本文分别从结构调整、科技创新、政府监管、能力建设等方面全面总结梳理了江苏省低碳交通运输发展的主要成效及其经验,查找分析了存在的主要问题,从加强组织领导、完善政策制度体系、深化试点示范等方面提出了对策建议。     

梁板结构在轴力及弯矩作用下截面剪力滞效应的研究

梁板结构截面的剪力滞问题是一个比较复杂的问题。本文通过大型试验的研究，分析梁板结构截面的剪力滞效应，及翼缘板的有效分布宽度，为设计提供参考。     

特大桥钢筋混凝土上部构造现浇施工技术简介

介绍特定地理环境条件下,设计较新颖的现浇预应力钢筋混凝土连续空心板的施工技术。     

评定客运企业资质实现规模集约化经营

根据交通部2000年4月颁发的《道路旅客运输企业经营资质管理规定（试行）》（交公路发[2000]225号）要求,今年将对现有从事道路客运的企业全面进行经营资质等级评定,企业全部按本企业所评定的经营资质,经营与其资质相对应的客运线路,新成立的企业在开业时就应取得经营资质等级,以实现道路客运在经营上的合理分工,实现企业和车辆的结构调整。     

漯驻高速公路水泥稳定碎石基层机构化施工

根据在漯驻高速公路水泥稳定碎石的施工经验,对其施工工艺及主要 需注意的几个问题作了较为系统的阐述。     

浅谈超限运输管理体系的建立与运作

为了既保护公路完好畅通道,又要维护超限运输车辆通行公路的宏观需要,就必须加强对超限运输车辆行驶公路的管理。