人促甲状腺激素受体胞外段的体外重组、蛋白高效表达及其与构象功能的关系

目的　TSH受体 (TSHR)是诱发自身免疫性甲状腺病 (autoimmunethyroiddisease ,AITD)的主要自身抗原。TSHR上TSH结合部位、自身抗体及主要的B细胞、T细胞表位均位于其胞外段部分。本研究利用基因重组方法 ,建立人TSH受体胞外段 (hTSHRecd)体外高效表达、纯化系统 ,用于Graves’病的临床及实验研究 ,探索体外表达的重组hTSHRecd蛋白的免疫生物活性与其空间构象的关系。方法　设计 1对hTSHRecd特异性引物 ,自PCRTTM3 hTSHR载体中PCR扩增合成hTSHRecd片段 ,经限制性内切酶BamHⅠ、SalⅠ消化 ,胶回收纯化后 ,重新构建于表达质粒 pQE 30中。用质粒电泳、限制性内切酶消化、PCR 3种方法鉴定重组质粒是否构建正确 ,并于E .coliM15细胞进行诱导表达。所表达的 6×His hTSHRecd融合蛋白经 12 0 g·L-1SDS PAGE ,Westernblotting鉴定。细菌培养产物经超声波破碎、裂解液裂解后利用Ni NTA树脂 ,经金属螯合层析法纯化 ,并经原位再折叠、透析、浓缩等处理。以ELISA、12 5I TSH结合抑制试验检测纯化蛋白与Graves’甲亢患者血清及TSH的结合活性。结果　经鉴定 ,重组质粒中含有以正确方向插入的 12 0 5bp的hTSHRecdcDNA基因片段。hTSHRecd融合蛋白约 4 7kD ,于 12 0 g·L-1SDS PAGE可见深染的特异性蛋白条带 ,可与Graves?     

空间大角度长调节量吊索及其在天津富民桥上的应用

介绍一种新型的用于空间缆索结构悬索桥的空间大角度长调节量吊索,对其结构设计、具体实施方式、张拉方法等进行叙述,通过与传统结构的吊索对比得出其优异性,并通过在天津富民桥项目中的实施验证了该型吊索的可用性.     

自身免疫性甲状腺炎患者血清TSH、甲状腺自身抗体与甲状腺细胞病理学改变的相关性

目的 分析自身免疫性甲状腺炎(AIT)患者血清促甲状腺激素(TSH)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)以及甲状腺球蛋白抗体(TGAb)与甲状腺细针抽吸(FNAB)细胞病理学改变之间的关系.方法 选取经甲状腺细胞病理学诊断的82例AIT患者,采集空腹静脉血分别进行TSH、TPOAb、TGAb及T4等检测,分析血清学指标与细胞病理学改变的相关性.结果 ①82例患者中TPOAb、TGAb的阳性率分别为91.4%和74.4%,约有半数(47.6%)TSH值位于正常值范围内(0.3～5 mu/L);②所有患者细胞病理学均存在淋巴细胞不同程度的浸润,49.3%可见生发中心,32.8%可见嗜酸性变细胞(Askanazy细胞),26.9%可见浆细胞,22.4%可见胶质,9%可见多核巨细胞;③将淋巴细胞浸润程度分级,分别与TSH、TPOAb及TGAb进行相关性分析,发现仅淋巴细胞极重度浸润者其血清TSH、TPOAb水平较其他组显著升高(P<0.05),其他细胞病理学改变与血清学指标之间未发现显著相关性.结论 TPOAb、TGAb是AIT诊断的重要指标.     

成人胰岛分离纯化的实验研究

目的　研究成人胰岛分离纯化方法。方法　在传统的胰岛分离纯化方法的基础上 ,就供体选择、消化条件及方法、胰岛保护等方面作了一些改进 ,并在消化液和Ficoll分离液中加入大豆胰酶抑制剂 (STI)、牛血清白蛋白 (BSA)。结果　分离纯化后胰岛产量由原来的 (991± 14 4 )个胰岛·g-1组织提高至 (2 0 4 3± 2 4 9)个胰岛·g-1组织 (P <0 .0 1) ;纯度由 4 0 %提高到 6 0 %。结论　改进后的方法简单易行、经济实用 ,成功解决了传统方法中凝胶样物形成的难题 ;证实STI、BSA在成人胰岛分离纯化中同样具有保护作用 ;所获胰岛产量、纯度提高 ,并具良好的生物学活性。