Novel experimental strategy for high resolution AFM imaging of membrane-associated bacterial toxins

Bacterial pore-forming toxins （PFTs） are essential virulence factors of many human pathogens. Knowl- edge of their structure within the membrane is critical for an understanding of their function in pathogenesis and for the development of useful therapy. Atomic force microscopy （AFM） has often been employed to structurally interrogate many membrane proteins, including PFTs, owing to its ability to produce sub-nanometer resolution images of samples under aqueous solution. However, an absolute prerequisite for AFM studies is that the samples are single-layered and closely-packed, which is frequently challenging with PFTs. Here, using the prototypical member of the cholesterol-dependent cytolysin family of PFTs, perfringolysin O （PFO）, as a test sample, we have developed a simple, highly robust method that routinely produces clean, closely-packed samples across the entire specimen surface. In this approach, we first use a small Teflon well to prepare the supported lipid bilayer, remove the sample from the well, and then directly apply the proteins to the bilayer. For reasons that are not clear, bilayer preparation in the Teflon well is essential. We anticipate that this simple method will prove widely useful for the preparation of similar samples, and thereby enable AFM imaging of the greatest range of bacterial PFTs to the highest possible resolution.     

Simulation of mixed gas formation for a spray-wall complex guided LPG direct injection engine

To obtain an ultralean air-fuel ratio and to reduce engine-out NOX and HC emissions induced by the richer mixture near the spark plug, a spray and wall complex guided combustion system has been developed by utilizing the fuel characteristics of LPG. The new combustion system configuration is optimized by using a commercial CFD code, FIRE V2013, and the reliability of the system has been experimentally demonstrated by Plane Laser-Induced Fluorescence (PLIF). The mixture formation in the new combustion system under part load (2,000 rpm) is numerically simulated. With an injection timing of 40°CA BTDC, the LPG spray which is injected from two upper holes, reaches the ignition point, and the other part of the LPG spray which is injected from the bottom hole, is directed to the ignition point through the vertical vortices at the same time. At the ignition timing of about 20°CA BTDC, the two-part mixtures have been shown to form a stable and richer stratified mixture around the ignition point, and the maximum global air-fuel ratio reaches to 60: 1.     

小直径盾构施工中管片纵向应力监测研究

为了探索小直径盾构法隧道在施工过程中管片纵向应力的变化规律,对北京槐房再生水厂污水隧道管片纵向应力进行了现场监测:将第976环、第1 054环管片分别设为第1和第2监测断面,2监测断面各预埋5个纵向应力计,各监测断面从本监测断面管片安装后即开始监测,当盾构掘进至第1 129环时停止监测。研究表明:1)在管片离开盾尾50环后,其纵向应力波动值小于管片拼装期间应力值的5%。2)在盾构掘进期间,管片距离盾构越远,其纵向压应力值越小。3)在管片拼装期间,管片距离盾构越远,其纵向压应力经历了先增大后减小的过程。4)管片距离盾构108环后,该管片纵向压应力趋近于0.2~0.3 MPa。5)随着盾构推进,管片纵向应力经历了4个阶段的变化过程,即周期性剧烈波动阶段—动态稳定阶段—逐渐衰减阶段—趋于稳定阶段。     

乙醇汽油对车辆颗粒物排放的影响

在符合国Ⅰ、国Ⅲ、国Ⅴ标准的3辆试验车上,分别燃用国Ⅴ汽油、低芳烃E10、低烯烃E10 3种燃料,进行了NEDC和WLTC工况下的常温冷起动排放试验,重点对颗粒物(PM)排放量和粒子数量(PN)进行分析。结果表明:在两种工况下,燃用乙醇汽油相比普通汽油能大幅降低车辆的PM排放,低芳烃E10对国Ⅰ和国Ⅲ车辆PM降低效果最明显,分别下降19%和35%,低烯烃E10对国Ⅴ车辆PM降低效果最好,下降46%;在WLTC工况下燃用乙醇汽油能大幅降低车辆PN排放,其中低芳烃E10平均降低43%,低烯烃E10平均降低32%。     

大型活动交通影响评价方法

大型活动吸引和产生的突增交通量会造成周边地区的交通拥挤。通过比较大型活动与大型商业建设项目的交通影响评价特点和分析大型活动交通管理的影响因素,分别针对“提供一次性服务的大型活动”和“提供长效服务的大型活动”,设计了交通需求的预测方法。以交叉口服务水平分析方法为基础,提出一种了大型活动的交通影响评价方法。以长春市南岭体育场举办的“中国足球甲A联赛”为对象,运用Vissim微观交通仿真软件对所提出的方法进行了初步验证。结果表明,在大型活动条件下,所提出的方法能够确定需要进行交通管制的空间范围。     

新加坡公共交通发展经验及启示

通过实际考察和走访咨询,系统地总结了新加坡的公共交通发展经验。首先介绍了新加坡对小汽车和公共交通发展采取的＂推、拉策略＂,以及新加坡公共交通的发展历程。在此基础上,对新加坡公共交通发展的成功经验进行了归纳和总结,包括管理机制、公共交通设施建设、公共交通运营系统、政策法规等方面的内容。结合我国城市交通发展的现状和特点,对城市公共交通的发展提出了措施和建议。     

混凝土箱梁温度作用的参数分析

根据非稳态导热偏微分方程,施加合适的边界条件,用有限元法进行了混凝土箱梁温度场的参数分析,并确定了影响混凝土箱梁温度场的主要因素。研究表明,混凝土箱梁的截面尺寸、所用混凝土的热物理性质以及气温对混凝土箱梁的竖向最大温度的影响均不大,对混凝土箱梁竖向温度梯度影响最大的是太阳辐射强度。     

关于公交停靠站影响区范围的研究

随着城市公共交通系统的发展,公交停靠站对道路交通流的影响已逐渐引起人们的注意。分析公交停靠站的影响首先应该对停靠站的影响区范围进行界定。在分析前人研究成果的基础上,基于交通波理论,按考虑超车与否,分析公交停靠站的影响区范围长度,得到不同交通流密度条件下公交停靠站影响区长度的计算公式。     

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国家体育场作为北京奥运会的主会场成功地承担了开闭幕式和田径赛事任务。本文研究了其停车场车辆的交通疏散问题,制定了疏散方案。首先,分析了国家体育场停车场和泊位布局及车辆疏散的具体条件。其次,通过给定环境的场景和参数设定,对具体的奥运场馆停车场车辆的疏散方案进行了仿真和评价。最后,利用奥运会开幕式的车辆疏散实测数据进行了对比分析,在仿真中要员和贵宾车辆的总疏散时间为26min,而奥运会开幕式车辆疏散实测结果表明,全部要员、贵宾疏散完毕,共用时27min,从而验证了车辆疏散方案的准确性和实用性。     

幽门螺杆菌尿素通道蛋白基因UreI载体的构建、融合表达及纯化

目的构建幽门螺杆菌(H.pylori,Hp)尿素通道蛋白基因UreI的融合表达载体,并在E.coliBL21中表达,为进一步研究UreI的功能奠定基础。方法利用分子克隆技术以Hp DNA染色体为模板,扩增Hp UreI基因片段,将目的基因UreI与载体pET32a( )分别经kpnⅠ和HindⅢ双酶切,纯化,连接。筛选阳性重组载体,转化大肠杆菌BL21,以IPTG诱导表达pET32a( )/UreI融合蛋白。表达产物经Ni-NTA琼脂糖树脂纯化后,用SDS-PAGE及Western blot分析。结果经酶切、测序分析表明,插入的基因片段为Hp UreI编码基因,由585 bp组成,与GenBank相应菌株HP AM417 609序列完全一致,无碱基突变。经SDS-PAGE分析显示重组质粒pET32a( )/UreI在原核细胞中得到了高效融合表达,其重组融合蛋白分子量为130 ku,经Ni-NTA琼脂糖树脂纯化后,其纯度达95%以上,Western blot分析显示,该重组融合蛋白可被6-His鼠抗单克隆抗体所识别,具有良好的反应原性。结论成功地克隆和构建了原核表达载体pET32a( )/UreI,并在原核细胞中得到了高效融合表达。