GM-CSF基因修饰的卵巢癌细胞NuTu-19/GM-CSF的构建

目的构建能分泌表达粒细胞-单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)的卵巢癌细胞NuTu-19/GM-CSF。方法将T-h GM-CSF重组质粒转化入感受态大肠杆菌中,筛选出耐药性单克隆菌落送测序。利用PCR技术扩增出GM-CSF目的基因片段,将PCR产物连入pGEM-T easy载体,转化入大肠杆菌中扩增,用SDS碱裂解法提取Teasy-GM-CSF重组质粒,用限制性内切酶酶切Teasy-GM-CSF重组载体,连入经相同酶酶切的pLXSN反转录病毒载体中。用磷酸钙沉淀法转染PA317包装细胞系进行病毒包装,用含有病毒的上清液感染卵巢癌NuTu-19细胞,经G418加压筛选感染成功的NuTu-19/GM-CSF细胞,用免疫细胞化学和ELISA法检测NuTu-19/GM-CSF分泌表达GM-CSF蛋白的情况。结果T-h GM-CSF重组质粒测序结果与GenBank Accession#:NM_000758基因序列对比后确定为人类GM-CSF基因编码序列;PCR产物酶切电泳在Mark 400-500 bp中有一条带,符合GM-CSF基因序列长度;重组Teasy-GM-CSF质粒用EcoRⅠ、BamHⅠ限制性内切酶酶切后,电泳鉴定在400-500 bp之间有一目的条带,重组反转录病毒质粒pLGM-CSFSN酶切电泳有目的条带;G418加压筛选感染后的NuTu-19细胞,14 d后慢慢形成单克隆继续生长;免疫细胞化学检测到感染成功的NuTu-19细胞膜表面有明显的棕褐色颗粒沉淀,ELISA法检测细胞培养上清液中GM-CSF的质量浓度为150 pg/mL。结论成功构建了能分泌表达人GM-CSF蛋白的卵巢癌细胞NuTu-19/GM-CSF,为以后研究卵巢癌免疫治疗提供必备、有效、可靠的工具基础。     

驼峰无线机车遥控系统升级改造的研究

驼峰无线机车遥控系统应用于编组站推峰机车上，对于提高解编效率，改善司机的劳动条件，起到了很大作用。介绍驼峰无线机车遥控系统设备的升级改造方案，并通过现场运用实践，提出了合理的维修管理建议，使驼峰无线机车遥控系统的应用得到更加可靠的保证，从而提高调车及推峰作业效率。     

拉压双作用预应力混凝土结构设计理论研究

简述了拉压双作用预应力混凝土结构的发展概况，提出了预压调质钢预压控制应力的取值原则，建立了基于预应力筋两阶段工作原理的结构构件承载力计算公式，推导了受拉预应力筋用量Ap、预压调度钢用量At、受拉非预应力纵筋用量As及受压非预应力纵筋用量A′s的匹配关系。最后，明确了需进一步研究的相关问题。     

月亮魂

自从盘古开天地,华夏民族便有了对太阳的崇拜、对月亮的遐想,创造了博大精深的月亮文化.她植根于中华大地,以历史人文为背景,以丰富美化生活为要旨,以独特的生活方式和文化视野,给人们带来了无穷的物质和精神享受.她沟通着远古和现代,承载着中华文明的古老历史和自然科学技术.     

堤以姓传人间天堂在苏堤地因人杰西湖风月属东坡——苏东坡与杭州、颍州、惠州西湖

2006年,是苏东坡诞辰970周年.在杭州西湖苏东坡纪念馆和广东惠阳东江江畔的惠州东坡故居,各有一块金安清题黄冈东坡故居联: 一生与宰相无缘,始进时、魏公误抑之,中岁时、荆公力扼之,即论免役、温公亦深厌其言,贤奸虽殊,同怅君门违万里;     

兰台之悲剧美

世界上有一种绝美,这绝美叫做悲剧。美的固然不是悲剧本身,而是悲剧所毁灭的美好、美丽。这美好、美丽可以被毁灭,但它仍会留下自己美的律动。在中华民族的五千年兰台上空,群星璀璨,交相辉映。而在汉代那片兰台的星空上,曾高悬过几颗闪亮的明星,那就是史学家班彪、班固、班昭、司马谈、司马迁、蔡邕、蔡文姬。他（她）们所作的鸿篇巨著以及人生遭遇,在让人读后感动、伤怀之余,挥袖掘泪之后,体味出一种兰台之悲剧美。     

港口通信站雷害分析及防护措施

本文分析了近年来日照港通信站设备遭受雷害的原因,并在此基础上介绍了通信站雷害防护的具体措施。     

水性底色漆热闪干设备的设计与调试

上海汽车工业（集团）总公司新建临港油漆车间项目由机械工业第四设计研究院设计承建,设计产能40JPH,现有产品为荣威550。该涂装线采用水性中涂、水性底色漆和溶剂型罩光漆。在自2008年9月19日投产后的近两年时间内,已生产合格荣威550车身20000余台。本文对上汽临港项目中面漆线热闪干设备的设计与调试工作进行了总结,供有关技术人员参考。     

掠影春运话安全

一年一度的春运即将收尾.春运最要紧的是安全,而影响安全的关键是超载.但很多人不能自觉做到春运期间不开超载车,不坐超载车.     

含惯性摆发电装置之浮标的水动力分析

文章利用拉格朗日方程推导了含惯性摆波能发电装置之浮标在规则波作用下的七自由度运动方程。为了验证所推导公式的正确性,制作了一个物理模型,并对无负载阻尼工况在水槽中进行了模型试验。借助商业软件AQWA-LINE计算浮标的附加质量、辐射阻尼系数及波浪扰动力。利用文中推导的方程,计算了浮标及摆锤的运动响应,并将理论计算得到的结果与实验结果进行了比较。最后,分析了负载阻尼系数对浮标纵摇运动、摆锤纵摇运动、摆锤相对纵摇运动及波能转换效率的影响。