通用腺伴随病毒载体的构建及表达报告基因GFP的实验研究

目的构建基因治疗通用型腺伴随病毒(AAV)载体并检测其转染外源基因作用。方法使用限制性内切酶切除pSSV9int质粒中的AAV病毒Rep和Cap基因元件后,插入了重组腺病毒专用穿梭质粒-pACCMVpLpA的含有CMV启动子、多克隆位点(MCS)和多聚腺苷酸信号(PolyA)的表达盒,构建了重组AAV通用载体质粒pSSHG-CMV。在该质粒MCS插入绿色荧光蛋白(GFP)基因后,使用pSSHG-CMV-GFP、GFP140和pAAV/Ad三种质粒共转染293包装细胞,制备GFP重组AAV。应用斑点杂交实验检测重组病毒滴度,并将该病毒感染新生大鼠NIH3T3细胞,荧光显微镜观察GFP表达。结果重组AAV的滴度在浓缩前可达2×1011cfu/mL,浓缩后可达2×1013cfu/mL,表明成功地构建了重组AAV载体。插入外源基因GFP后,在包装病毒和辅助质粒的联合作用下,能产生具有感染性的重组AAV。感染了重组GFP-AAV的大鼠NIH3T3细胞表达了明显的GFP荧光。结论构建的重组AAV通用载体pSSHG-CMV可转染外源基因,这为进一步的基因治疗奠定了基础。     

海滩垃圾填埋场地基处理方案探讨

海滩垃圾填埋场主要由建筑垃圾、生活垃圾组成,地质复杂、地下水位高,地基承载力极低。本文结合铁路青岛北站枢纽工程在海滩垃圾填埋场地基处理的应用,介绍了不同类型地基处理方案,以经济、安全为原则,采用多种地基处理方式相结合进行地基加固,解决了大型铁路站场软弱地基处理难题,具有借鉴价值。     

CRTSⅡ型板式无砟轨道路涵过渡段的优化设计研究

研究目的:以京沪高铁廊坊段CRTSⅡ型板式无砟轨道路涵过渡段为背景,采用Abaqus数值分析软件建立车辆-轨道-过渡段动力系统耦合模型,研究不同因素对列车通过路涵过渡段时运行安全性及平稳性的影响。根据极差和方差分析方法,确定影响列车运行安全性及平稳性的因素重要性次序,提出高速铁路路涵过渡段最佳设计方案。研究结论:(1)以横向力或线路横向稳定性系数为试验指标优化时,过渡段方式为第一影响因素;以车轮脱轨系数、轮重减载率或Sperling舒适度指标为试验指标优化时,行车速度为第一影响因素;以垂向加速度为试验指标优化时,填土厚度为第一影响因素;(2)建议在路涵过渡段设计时采用倒梯形过渡、过渡段长度25 m、涵洞跨径2 m、填土厚度4 m、行车速度330 km/h的方案,能使列车运行安全性及平稳性达到最优状态;(3)该研究成果可为其他高速铁路路涵过渡段的设计提供借鉴。     

β淀粉样肽1～42单克隆抗体的制备

目的　制备稳定分泌β -淀粉样肽 1～ 4 2 (Aβ1-42 )单克隆抗体的杂交瘤细胞 ,产生高效价抗体。方法　通过基因工程技术 ,将Aβ1-42 基因融合于乙肝核心抗原 (HBcAg)的主要免疫优势区 (MIR) ,制备Aβ和HBcAg的融合蛋白 ,免疫BALB/c小鼠 ,取脾细胞与SP2 / 0细胞融合 ,筛选能稳定分泌Aβ1-42 单克隆抗体的杂交瘤细胞。结果　得到两株能稳定分泌Aβ1-42 单克隆抗体的杂交瘤细胞 ,Aβ1-42 单克隆抗体的Ig亚类为IgG3 。结论　制备得到的Aβ1-42 单克隆抗体特异性强 ,效价高     

CLONING AND SEQUENCING OF MATURE FRAGMENT OF HUMAN BMP4 GENE

Bone morphogenetic protein- 4(BMP- 4) is alow molecular weight glycoprotein ,classified as amorphogen.It is capable of inducing the formationof new cartilage and bone.This osteoinductiveability has led to the use of bone morphogeneticproteins as therapeutic agents for creation of newbone useful in treatment of skeletal injuries anddiseases,and in oral and maxillofacial applica-tions.Although many researchers have got the na-tive BMP from animal s demineralized bone by bio-chemical method,the…     

船用小型直流起动机的故障探讨

分析了船用小型直流起动机的基本工作原理及故障,对柴油机的使用与管理有重要参考作用。     

北黑铁路(龙镇至黑河段)升级改造动车组开行方案研究

北黑铁路(龙镇至黑河段)升级改造后,后方通道存在牵引种类不一致的情况,在电气化铁路、非电气化铁路间跨线运行时,因标准不一致无法提供高质量的客运服务。结合北黑铁路(龙镇至黑河段)现状及存在问题,根据功能定位进行升级改造,分析动车组列车开行必要性。分析了采用电力动车组、内燃动车组及混合动力动车组等各开行方案的优缺点,推荐采用混合动力动车组开行方案,随着动车组技术更新,可以有效满足不同的市场需求,提高铁路客运服务质量。     

自动变速器及在公交车上的应用

1自动变速器的分类 自动变速器按结构一般分为三类:即机械式无级变速器(CVT)、机械式自动变速器(AMT)和液力自动变速器,这其中按控制类型又分为液控液力自动变速器(AT)和电控液力自动变速器(EAT).     

自动档公交车的正确使用

自动档公交车的使用操作与手动档车相比,有很大不同.沿用手动档车的操作规范和经验来使用自动档车,轻者会造成燃料的大量浪费,发挥不了自动变速器的技术优势;重者会导致自动变速器的异常损坏,甚至引发生事故.本文从使用的角度,介绍装用电控液力自动变速器公交车的驾驶操作各环节及技术使用规范要求.     

宣教与整治是车之两轮,不可偏废

正在上海开展的大规模交通大整治中,宣传教育和依法整治必须你中有我,我中有你,犹如车之两轮,鸟之两翼,互为依托,不可偏废;必须两者结合,贯彻始终。有了宣传教育,才会增强全民文明交通意识、遵纪守法意识,交通整治才有思想基础、群众基础,才能有效改变交通面貌、社会秩序。宣传教育须作为交通整治的重要组成部分。同时,交通整治本身也是宣传教育,而且是最重要、最生动、最有力、最贴近现实、最贴近市民的宣传教育。本人仔细观察,地铁车厢即将