小反应体积实时定量PCR的可行性评价

目的 从扩增稳定性、扩增效率以及可靠性等多方面评估实时定量PCR(RtPCR)反应小体积的可行性,同时确定适合小体积体系的模板量.方法 将实验分为10、15、20μL 3个体积组,每组分别采用0.1、0.2、0.3、0.4μL的大鼠cDNA为模板,进行大鼠β-actin mRNA的RtPCR扩增.通过扩增曲线和熔解曲线考察反应的稳定性,以梯度模板拟合标准曲线获得反应的扩增效率,其线性相关程度反映模板量是否合适.另外,构建大鼠降植烷诱导的关节炎(pristane-induced arthritis, PIA)模型,采用选定的反应体系,分别对模型组和正常组大鼠脾脏TNF-α mRNA进行扩增,通过TNF-α的相对表达趋势反映小体积扩增的可靠性.结果 在大鼠β-actin mRNA的RtPCR扩增中,10、15、20μL 3个体积组均能特异稳定地进行扩增,并保证高扩增效率.而且每个体积组中的模板梯度表现出很好的线性相关趋势.同时选用10μL和20μL反应体积、0.2μL模板对关节炎大鼠脾脏进行TNF-α mRNA扩增,结果一致表现出了预期的显著性上调.结论 实验证实10μL、15μL等小反应体积应用于RtPCR扩增中是可行的,具有较好的稳定性和可靠性,同时0.1～0.4μL cDNA模板在3种体系的合适模板范围内.这种较小的PCR反应体积,不仅节省了试剂和实验材料,对一些来之不易的临床标本尤为重要,也利于高通量大规模的RtPCR检测的实现.     

英汉诗歌对比在高校英诗教学中的应用策略

英国和中国都是诗歌的国度,英语和汉语都产生了无数世界闻名的优秀诗篇,但是中国高校英语专业的学生虽然对汉语诗歌表现出了一定的兴趣,却由于英语诗歌与汉语诗歌大相径庭的格律,对英语诗歌兴味索然。为了解决这个问题,任课教师可以利用学生对汉语诗歌的喜爱,通过汉英诗歌对比来帮助学生掌握英诗中的眼韵、跨步诗行、语序的变化、音步等有别于传统中国诗歌的诗歌现象,从而培养学生学习英诗的兴趣,促进英诗教学的发展。     

Superpave沥青混合料低温抗裂性评价方法

采用低温弯曲破坏试验和约束试件温度应力试验,评价了Superpave沥青混合料的低温抗裂性,并对两种试验方法及其评价指标进行对比分析。研究结果表明:约束试件温度应力试验中的冻断温度和转折点温度可以较好的评价Superpave沥青混合料的低温抗裂性;弯曲破坏试验中用弯曲应变能密度作为评价指标可以很好表征Superpave沥青混合料的低温性能,并且与约束试件温度应力试验结果基本吻合。     

一种基于身份的无可信中心密钥管理方案研究

传统基于身份的密码系统存在着密钥托管和密钥撤销两大难题.针对该问题,提出一种新的基于身份的无可信中心密钥管理方案.方案利用Weil对的特性和单向函数的稳固性,结合Fujisaki-Okamoto混合变换,借鉴BF方案的时间片思想,添加显式的密钥撤销过程.给出安全性和性能分析.结果证明,此方案安全性较高并在计算效率上有很大提高.     

老桥下水中承台施工技术方案探索

水中承台施工采用钢套箱是一种常规施工方法,但是在净空狭小的老桥下承台施工采用钢套箱则比较少见。以某市某路快速化改造工程项目为例,介绍老桥下狭小净空内钢套箱的设计及施工,对低净空下钢套箱分节位置选取、受力计算、拼装、下沉、混凝土封底等施工难题进行探索,供类似工程参考。     

基于性能劣化分析的钢桥维护策略优化研究

为保证桥梁的安全性与适用性,同时合理控制全寿命期总成本,在桥梁性能劣化分析的基础上,对钢桥维护策略优化的多目标动态优化方法进行研究.用可靠度指标与状态指标表征桥梁性能状态,考虑环境、荷载及材料特性的影响,提出基于损伤累积的桥梁可靠度指标与状态指标劣化模型;以全寿命成本最小为目标、以可靠度指标和状态指标为约束条件,分别建立加固策略及维修策略的优化模型.通过引入改进的Logistic动态粒子群优化算法结合Monte-carlo模拟与"乘大数"的惩罚策略实现多目标优化求解.通过对钢拱梁组合体系的天津海河国泰桥主桥运营期维修加固策略进行优化,证明了该方法的有效性和适用性.     

自锚式悬索桥钢丝绳主缆力学性能研究

某大桥为自锚式钢筋砼悬索桥,该桥采用85根6×36SW+1WR的镀锌高强钢丝绳作主缆。介绍了对该种钢丝绳弹性模量、松弛特性、摩擦系数等的研究,提出了钢丝绳主缆名义弹性模量曲线、松弛特性及松弛率公式,以及由此组成的主缆与索夹的摩擦系数。     

考虑公路施工影响的出行OD修正方法研究

针对高速公路建设项目施工期对地方交通的干扰问题,提出了考虑公路施工影响的出行OD修正方法,从而为施工期区域交通组织方案制定提供基础数据。首先,探讨了OD矩阵的拆分方法,即由基于县市级的OD矩阵转化为基于乡镇级的OD矩阵的实现方法。然后,借鉴效用理论提出了弹性出行发生概率计算公式,用以修正弹性出行生成量,从而定量描述公路施工对地方交通出行的影响。其次,将施工运输车辆对周边路网产生的交通负荷以附加出行方式进行量化,并给出了相应的计算方法。最后,结合实际工程项目进行了案例分析,证明了上述方法的实际可操作性。     

多发性骨髓瘤MMSA-1抗原的二级结构预测及多克隆抗体的制备

目的 运用生物信息学技术研究人多发性骨髓瘤MMSA-1(GenBank:AY952881)基因表达蛋白的二级结构和B细胞抗原表位,并制备多克隆抗体.方法 应用DNAStar Protean软件提供的模块分析和预测MMSA-1蛋白的二级结构和B细胞抗原表位.采用多通道同步固相全自动合成系统合成15肽,免疫健康新西兰成年家兔,制备相应的多克隆抗体.结果 MMSA-1蛋白含有较多的β折叠和转角结构.综合柔韧性、亲水性、抗原性、表面可能性、二级结构、偶联难易及实验难度等因素,选取了MMSA-1蛋白序列318～333位作为抗原表位,即SSSLLPQSPAPTEHL,15肽合成产物经HPLC纯化和质谱检测,纯度达到98.65%,序列正确.免疫兔子获得血清抗体采用层析柱纯化,ELISA检测效价:1∶6000.结论 本研究为基于人MMSA-1抗原表位手段的免疫治疗研究提供了理论依据.     

人脑胶质瘤PTEN基因mRNA和蛋白的表达及其相关性分析

目的 探讨PTEN mRNA和蛋白在脑胶质瘤组织中的表达及临床意义,并分析其相关性.方法 分别采用反转录PCR(RT-PCR)和免疫组化(IHC)方法检测PTEN在正常脑组织及不同组织学分级的人脑胶质瘤组织中的表达情况.结果 Kruskal-wallis H检验显示,PTEN在脑胶质瘤组织中的表达与正常脑组织相比差异有统计学意义(P<0.01),且随着胶质瘤恶性程度的增高,PTEN表达强度逐渐下降.结论 PTEN表达的缺失可能是脑胶质瘤发生、发展过程中极其重要的环节,PTEN可能是脑胶质瘤发生以及其预后判断的重要生物学指标.