通用腺伴随病毒载体的构建及表达报告基因GFP的实验研究

目的构建基因治疗通用型腺伴随病毒(AAV)载体并检测其转染外源基因作用。方法使用限制性内切酶切除pSSV9int质粒中的AAV病毒Rep和Cap基因元件后,插入了重组腺病毒专用穿梭质粒-pACCMVpLpA的含有CMV启动子、多克隆位点(MCS)和多聚腺苷酸信号(PolyA)的表达盒,构建了重组AAV通用载体质粒pSSHG-CMV。在该质粒MCS插入绿色荧光蛋白(GFP)基因后,使用pSSHG-CMV-GFP、GFP140和pAAV/Ad三种质粒共转染293包装细胞,制备GFP重组AAV。应用斑点杂交实验检测重组病毒滴度,并将该病毒感染新生大鼠NIH3T3细胞,荧光显微镜观察GFP表达。结果重组AAV的滴度在浓缩前可达2×1011cfu/mL,浓缩后可达2×1013cfu/mL,表明成功地构建了重组AAV载体。插入外源基因GFP后,在包装病毒和辅助质粒的联合作用下,能产生具有感染性的重组AAV。感染了重组GFP-AAV的大鼠NIH3T3细胞表达了明显的GFP荧光。结论构建的重组AAV通用载体pSSHG-CMV可转染外源基因,这为进一步的基因治疗奠定了基础。     

β,β-胡萝卜素改善H_2O_2对成骨细胞损伤的影响

目的研究β,β-胡萝卜素增强成骨细胞抗自由基损伤的作用。方法用H2O2作用M3T3-E1成骨细胞,建立自由基损伤细胞模型。培养的成骨细胞分为对照组、模型组、β,β-胡萝卜素低剂量组(1×10-8mol/L)、β,β-胡萝卜素中剂量组(1×10-7mol/L)和β,β-胡萝卜素高剂量组(1×10-6mol/L)。测定不同处理组细胞活力、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、活性自由氧(reactive oxygen species,ROS)含量、脂质过氧化物(lipid oxygen,LPO)含量,同时利用荧光偏振法测定细胞膜流动性。结果模型组细胞活力、SOD活性、细胞膜流动性均比不同β,β-胡萝卜素剂量组有显著降低(P<0.01),而ROS、LPO含量均比不同β,β-胡萝卜素剂量组有显著升高(P<0.01)。结论H2O2摄入会导致成骨细胞的氧化损伤,而β,β-胡萝卜素可以预防或降低此类损伤对细胞的影响。     

沥青路面冷再生试验研究

根据旧路调查和FWD弯沉测试结果,确定再生深度,形成了水泥全深度冷再生、泡沫沥青全深度冷再生和泡沫沥青再生3种旧路面层的冷再生方案。确定了稳定剂最佳剂量的选择方法．初步形成冷再生混合料的配合比设计方法。     

桥梁极限承载力研究现状与发展

结合沪宁高速公路扩建改造工程中桥梁极限承载力的（破坏性）试验研究,对目前桥梁极限承载力研究的国内外现状进行了总结,归纳了模型试验、实桥试验和理论分析等方面的主要研究成果。在此基础上指出了当前桥梁极限承载力研究中存在的主要问题,并提出了该领域未来的研究方向。     

后张法箱梁孔道压浆密实程度调查

为了解后张法预应力混凝土连续箱梁孔道压浆问题,以3座后张法预应力混凝土连续箱梁为工程背景．采用现场调查方法对箱梁后张法预应力孔道的压浆问题进行了调查研究。调查结果表明．3座桥梁的孔道压浆密实程度均较差,其中梁体纵向、横向预应力孔道中无压浆的截面分男q占调查总数的14．5％和47．58％。     

桥面铺装对箱梁梯度温度影响的研究

由于桥面铺装层的存在,可以有效地降低箱梁内的梯度温度,从而减小温差应力,但是新桥规只给出了单一桥面铺装层的温度基数取值,对于经常遇到的双层或多层桥面铺装并没有明确规定。通过一座双层桥面铺装的连续箱梁桥的计算与对比分析,提出了常见的双层桥面铺装的箱梁内温度梯度计算的实用方法,研究表明,对于有双层铺装层的箱梁桥,设计时考虑每层铺装层对箱梁梯度温度的影响更符合实际。     

堡镇隧道围岩变形的神经网络预测

隧道新奥法施工中，常以围岩变形量作为评判围岩稳定性和支护结构经济合理性的重要指标。隧道围岩变形量是随时间而变化的数据序列，因而可以建立一些实时跟踪预测模型和方法。针对宜万铁路堡镇隧道软弱围岩区段施工大变形特点，采用神经网络技术对其变形量进行了预测分析，预测结果经过工程实践检验，具有相对较高的准确性和可靠性，为隧道施工决策提供了有效依据。     

传统村镇旅游规划与开发模式探讨——以黟县西递古村落为例

传统村镇旅游发展存在着旅游过程生活化与村镇设施功能实用性、景区面积有限性与旅游者人数增长、传统村镇景区面积局限性与旅游者人数增长等之间的矛盾。结合西递古村落实际，认为传统村镇旅游地在发展过程中应坚持“修旧如旧”的原则，对少部分村落内居民进行迁居，同时坚持景区分区、建筑分类、游览分线、服务建区等规划与开发构想，考虑资源本体特征和游客需求等要素，合理开发。     

具有可变超松弛因子的OSEM在PET重建中的应用

基于最大似然期望法(ML-EM)重建的图像质量好,但因其收敛速度太慢,而难以直接应用于临床.有序子集最大期望法(OSEM)具有较高的重建图像质量和较短的计算时间,超松弛因子(OR)有可灵活调节超松弛因子和加速收敛两种功效.文中将OSEM和OR有机地结合起来用于PET图像重建,形成可变超松弛因子的OSEM重建算法(OR-OSEM).该方法综合了上述两种算法的优点,具有可根据需要灵活改变子集数和超松弛因子的功能.计算机仿真模拟和临床PET投影数据的重建结果表明了该方法的有效性.     

水飞蓟宾对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用及其机制

目的研究水飞蓟宾(Silibinin,SB)在体外对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用及其相关机制。方法采用MTT法观察不同浓度SB对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用;倒置显微镜下观察细胞形态变化;RT-PCR检测凋亡抑制因子Survivin的mRNA表达变化。结果MTT检测发现:随着SB浓度增加和作用时间延长,对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用增强,且各组间比较均有显著性差异(P<0.01),并呈时间-剂量依赖关系;倒置显微镜发现应用SB干预后,5637细胞体积缩小,变形,胞浆浓缩,核固缩深染;人膀胱癌细胞株5637中Survivin的mRNA表达随着SB浓度增加和时间延长相应下降。结论SB可抑制人膀胱癌细胞株5637的增殖;并下调凋亡抑制因子Survivin的mRNA表达。