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目的 构建以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因的脑源性神经营养因子(BDNF)融合蛋白真核表达质粒,并对其表达和定位进行研究.方法 以人血白细胞DNA为模板,利用一对删除终止密码子的引物进行PCR获得BDNF基因片段,并将其与pEGFP-N1质粒载体连接,构建BDNF-EGFP融合蛋白真核表达质粒.以脂质体Lipofectamine2000 转染Hela细胞,提取总RNA,通过RT-PCR方法检测BDNF-EGFP在转录水平的表达,Western blot 及荧光显微镜进一步观察融合蛋白的表达定位.结果 酶切和PCR鉴定证实BDNF基因片段正确克隆入载体质粒中,转染Hela细胞后,RT PCR证实BDNF EGFP融合蛋白在转录水平有表达,荧光显微镜观察显示BDNF EGFP融合蛋白主要分布于细胞质中,Western blot结果显示Hela细胞培养液中有BDNF EGFP融合蛋白存在. 结论成功构建了BDNF EGFP融合蛋白真核细胞表达质粒,BDNF EGFP融合蛋白能够在Hela细胞中表达,主要位于细胞质中并可以分泌到细胞外. 相似文献
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Partial safety factors must be evaluated precisely for the given target reliability index to ensure the certain level of structural reliability due to uncertain factors. The current studies of partial safety factors do not consider human error in construction for structural reliability. A mathematically model should be improved to simulate the partial safety coefficient concerned uncertainty factors which concern the effect of human error in construction. We employ the contaminated distribution to obtain the realistic mean value and standard variance of variable of structural parameters which coexist with random error human error. The reasonable partial safety coefficient can be calculated based on the realistic value of structural parameters concerned the effects of random error and gross error. 相似文献
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本文应用人工神经网络方法,以经济指标为衡准,在考虑了航线的船型,港口装卸效率等因素后,对我国煤炭海运系统中的主要航线运量分配方案最优化进行讨论,为国家有关决策部门制订合理发展我国煤炭海运计划提供了理论依据。 相似文献
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