构建及鉴定携带角蛋白启动子和人乳头瘤病毒16E6/E7基因的重组腺病毒

目的利用AdEasy系统构建携带人角蛋白启动子的人乳头瘤病毒-16(HPV-16)E6/E7基因重组腺病毒,并通过RT-PCR方法检测E6/E7基因的表达。方法应用PCR方法从含有HPV-16全基因序列的质粒上扩增E6/E7基因,构建pCDNA3.1(-)-K14-E6/E7-polA载体,扩增、酶切获得K14-E6/E7-polA片段插入腺病毒穿梭载体质粒pAdTrack上,构建重组穿梭载体pAdTrack-K14-E6/E7-polA,线性化后与骨架载体AdEasy-1在细菌BJ5183内同源重组得到腺病毒质粒pAd-K14-E6/E7-polA,经人胚肾293细胞包装后得到重组腺病毒pAd-K14-E6/E7-polA。氢化铯(CsCl)梯度离心纯化病毒,提取病毒再感染后的293细胞总RNA,通过RT-PCR方法检测E6/E7基因的表达。结果通过同源重组的方法构建了腺病毒pAd-K14-E6/E7-polA载体,经酶切和测序鉴定该质粒构建成功。293细胞包装3d后观察到绿色荧光蛋白(GFP)表达,CsCl梯度离心纯化最终获得7.2×1010pfu/mL滴度的重组病毒;用该滴度病毒重新感染293细胞3d后,提取细胞总RNA,RT-PCR检测E6/E7有表达。结论利用新型腺病毒载体AdEasy系统可在短期内制备同时表达GFP和E6/E7的重组腺病毒pAd-K14-E6/E7-polA。这将为进一步研究HPV-16E6/E7基因功能及利用基因治疗女性宫颈癌奠定了基础。     

ANALYSIS ON GENETIC POLYMORPHISM OF 6 STR LOCI ON CHROMOSOME 12 IN CHINESE HAN POPULATION

Shorttandemrepeats(STRs)arearichsource ofhighlypolymorphicmarkersinthehumange nome,arerelativelysmallinsize,andcanbestud iedwiththerelativeexpediently.ThustheSTR polymorphismsarehighlyusefultoolsforlinkagea nalysisofdisease relatedgenesandconstructionthe …     

隧道施工地质预报方法模糊优选与应用

以某公路隧道工程进口段为例,利用模糊数学中的隶属度理论对预报方案的模糊信息进行定量化处理,再对预防方案的多因素进行定量评价,得出优选预报方案为"TRT+地质雷达+超前钻孔"。通过现场实践,模糊优选后的施工地质预报方法基本揭露了隧道前方存在的破碎围岩位置与岩溶不良地质体,基于预报结论实施的预防措施有效地防止了涌水、突泥等施工事故的发生,保障了施工安全。     

有界核Marcinkiewicz积分交换子的双权弱型不等式

得到Ω满足一类有界核Dini型条件时Marcinkiewicz积分交换子μn,b（f）的双权弱型估计。     

江六高速公路扬州南绕城段拼宽桥梁动态设计

文章对江六高速公路扬州南绕城段拼宽桥梁在施工中主要存在的问题,平面、高程控制原则,病害处理的动态设计进行介绍,建议在设计外业调查阶段对老桥的尺寸进行现场调查与复核,并测量关键点坐标及高程;后期施工中需根据设计调整的情况进行动态设计     

旋压密封式制动缸前盖成型工艺优化

本文介绍了如何在Pro/E与eta/DYNAFORM软件的平台上对305 mm×254 mm型旋压密封式制动缸前盖进行成型模拟,并进行了工艺优化设计、虚拟验证。经生产验证表明,改进工艺后制动缸前盖平面度和外观质量有了较大的提高。     

如何正确开展ISM规则的管理复查

通过介绍ISM规则所要求船公司管理复查的目的、内容、信息输入及管理复查的实施步骤,强调管理复查作为安全管理体系自我完善的重要性,以引起船公司的足够重视。     

防冻剂的改性及冬季施工混凝土最佳预养时间的确定

于混凝土中掺加适量的规定温度为-10℃的改性防冻剂，结合采用合理的综合养护工艺，不但使混凝土的强度达到冬季施工要求，有效地改善了混凝土的抗头性能，而且取得了很好的经济效益。     

Hemming Mechanism Kinematic Analysis and Hemming Simulation for Vehicle Closure Panels

为减小包边仿真的误差,以提高汽车覆盖件外缘的尺寸精度和表面质量,推导了包边模中常用的预包边机构运动学公式,并用于有限元仿真中.采用此方法分析得到的包边成型规律和相关文献中的实验数据符合较好；而它在某包边模具设计的应用结果验证了其有效性.     

关于车辆维修中二系簧加垫的分析与计算

在车辆维修手册中规定,当车轮两次镟轮轮径值减少量超过一定限度以后,需要在二系簧下加垫片补偿,以保证车体高度。对广州地铁现有的4条线车辆该值进行分析与计算,并得出相应结论。