芳香硫酸酯酶定点饱和突变方案的比较

目的比较随机引物与精确引物PCR扩增实施绿脓杆菌芳香硫酸酯酶(Pseudomonas aeruginosa arylsulfatase, PAAS)定点饱和突变的整体效率及成本,以建立高效实用的定点饱和突变方案。方法以大肠杆菌碱性磷酸酶(Escherichia coli alkaline phosphatase, ECAP)与PAAS融合表达质粒为模板,分别用针对PAAS目的位点的随机引物、精确引物等量混合物及单个精确引物,进行全质粒PCR扩增构建定点饱和突变体库;碱裂解细胞后高通量测定PAAS突变体与ECAP活性比值进行筛选,比较3种定点饱和突变建库方案需筛选的单克隆数量、所获突变体种类、整体耗时、整体成本及影响因素。结果用随机引物PCR对M72位定点饱和突变有明显密码子偏好性,筛选超600个单克隆仅获得10种预期突变体,但对G138位定点饱和突变未见明显的密码子偏好性且筛选不到150个单克隆获得18种预期突变体;精确引物等量混合物对M72位实施定点饱和突变,筛选不超过190个克隆成功获得19种预期突变体;单个精确引物对M72位逐个PCR实施定点饱和突变,仅各筛选2个单克隆就获得19种预期突变体。单个精确引物逐个PCR实施定点突变所获饱和突变体库完整,需筛选的单克隆数最少,总耗时和总成本最低;相比之下,用随机引物和精确引物等量混合物实施定点饱和突变时,所需筛选的单克隆数、整体耗时及成本均显著增加。结论解析序列-活性关系时,用单个精确引物逐个PCR实施定点饱和突变有显著整体成本和效率优势;仅筛选阳性突变体时,用精确引物等量混合物进行PCR建库在成本和效率上更有优势。     

外购商誉的计量

企业并购浪潮的涌现，将会出现巨额的外购商誉。通过对现行商誉会计理论的反思，探讨了外购商誉的确认，计量，摊销及减值等问题。     

单个随机集中载荷作用下弹性基础梁的响应

较系统地分析了弹性基础梁在单个随机载荷作用下的振动，研究了它的动力响应的概率特征．     

无形资产评估咨询系统的开发

本文介绍了一个用超文本技术开发的无形资产评估咨询系统，它能方便地为用户提供有关无形资产的基本概念，法律条文的咨询，疑难问题的解答，以及各类无形资产的评估方法。     

无形资产在青岛港长远发展中的价值体现

<正>无形资产是指没有实物形态,看不见摸不着的资产,但能被企业占有、使用并带来经济效益的资产。传统的说法认为企业无形资产主要包括商标权、著作权、专有技术、土地使     

传媒业上市公司无形资产减值准备的分析

随着社会主义市场经济的不断深入和改革开放的日益深化,传媒业已不仅仅是宣传媒体了,它还需要强化市场经营行为来发展壮大自己。时下,伴随着我国传媒的逐步发展,媒介市场的无形资产日益突出其巨大的增值或贬值效益,所以传媒的无形资产减值准备也备受关注。     

基于单个交叉口TCT技术应用初探

现代交叉口交通控制类型种类繁多,控制方法五花八门,如何从让人眼花缭乱的方法中挑选出最适合该交叉口的控制方法是关键。本文通过对TCT技术(即交通冲突技术)在单个交叉口实施控制应用的情况分析,为单个交叉口在交通控制决策的方面提供有力的参考。     

关于平顶山市旅游景区品牌保护问题的研究

本文针对平顶山市旅游景区无形资产保护中存在的问题,提出了保护平顶山市旅游景区品牌的4项具体措施。分别是：（1）增强旅游景区的商标意识;（2）通过注册商标保护旅游景区品牌;（3）政府部门和行业组织共同努力;（4）对于已经抢注的商标花代价抢回来。