抗鸭乙肝病毒core蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备抗鸭乙肝病毒core蛋白的单克隆抗体并进行鉴定。方法 PCR扩增鸭乙肝病毒(DHBV)core基因片段,构建表达载体pET28a(+)/DHBV core。转化诱导表达融合蛋白,用Ni 2+亲和柱纯化目的蛋白。免疫Balb/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,ELISA筛选,采用有限稀释法筛选单克隆杂交瘤细胞并进行细胞克隆。体内诱生法大量制备单克隆抗体,进行抗体的特异性、效价和亚型的鉴定。结果成功构建表达载体pET28a(+)/DHBV core,并表达DHBV core蛋白。获得2株稳定分泌抗DHBV core抗体的杂交瘤细胞株,分别为2D7和5G10,细胞培养液抗体效价为1∶400和1∶800。选择5G10细胞株制备单克隆抗体,小鼠腹水抗体效价可达1∶320 000。鸭肝组织免疫组化结果显示,DHBV病毒载量>1010copies/mg的肝组织中DHBV core蛋白的表达明显高于病毒载量<105copies/mg的肝组织,而未感染DHBV的鸭肝细胞内不表达DHBV core蛋白。亚型鉴定结果为IgG2aκ链。结论制备并获得了抗DHBV core蛋白的单克隆抗体,为DHBV core蛋白的功能研究、诊断试剂的研制与抗病毒治疗研究奠定了基础。     

单克隆抗体DH7识别抗原与胃癌增生及分化的关系

应用免疫组化ＡＢＣ法观察ＤＨ７识别抗原在５３例胃粘膜不典型增生和胃癌组织中的表达，结果显示胃粘膜不典型增生和高分化腺癌的阳性率分别为７／７，９／９，低分化腺癌阳性率为１４／１６，其中高分化腺癌与低分化腺癌的强阳性率分别为７／９和１／１６，两者间具有高度显著性差异。     

侧向流免疫层析-表面增强拉曼光谱联用技术超灵敏检测猪肉中喹乙醇残留

以具有强表面增强拉曼光谱(surface enhanced Raman scattering, SERS)活性的胶体金颗粒(Au nanoparticles, AuNPs)为基础,分别在其表面修饰4-氨基苯硫酚(PATP)和喹乙醇单克隆抗体(monoclonal antibody against olaquindox, OLA mAb),获得拉曼免疫探针OLA mAb-AuNPs-PATP.依据间接竞争原理组装侧向流免疫层析试纸,对各项实验条件进行优化,并借助拉曼光谱仪器,测定特征谱峰的拉曼信号强度计算出喹乙醇的浓度,由此建立了一种超灵敏定量检测猪肉中喹乙醇残留的侧向流免疫层析-表面增强拉曼光谱联用技术(SERS-LFA).结果表明:用该方法检测喹乙醇在0.000 1～1.0 ng/mL范围内线性良好,检出限为0.31 pg/mL,回收率为93%～108%,相对标准偏差在3%～6%之间(n=3).并且对信号的重现性进行测定,在5个不同浓度下,每个浓度随机测定10个点的相对标准偏差分别为5.6%,6.3%,3.7%,4.8%和3.1%.该方法检测猪肉中喹乙醇具有简便、快速、超灵敏性、高特异性和良好重现性的优点.     

克山病患者T细胞亚群分析及病区粮因素对大鼠T细胞功能的影响

作者用OKT系统单克隆抗体检测克山病患者T淋巴细胞亚群,发现患者T淋巴细胞亚群数量存在明显异常;用小鼠胸腺细胞生长法检测病区粮喂养大鼠的IL-2活性,发现实验组明显低于非病区粮对照组,但病区粮加硒组大鼠IL-2活性有显著提高。提示克山病的发生可能与自身免疫反应有关,病区粮因素能够降低大鼠的T细胞功能,微量元素硒具有增强机体细胞免疫功能的作用。     

β淀粉样肽1～42单克隆抗体的制备

目的　制备稳定分泌β -淀粉样肽 1～ 4 2 (Aβ1-42 )单克隆抗体的杂交瘤细胞 ,产生高效价抗体。方法　通过基因工程技术 ,将Aβ1-42 基因融合于乙肝核心抗原 (HBcAg)的主要免疫优势区 (MIR) ,制备Aβ和HBcAg的融合蛋白 ,免疫BALB/c小鼠 ,取脾细胞与SP2 / 0细胞融合 ,筛选能稳定分泌Aβ1-42 单克隆抗体的杂交瘤细胞。结果　得到两株能稳定分泌Aβ1-42 单克隆抗体的杂交瘤细胞 ,Aβ1-42 单克隆抗体的Ig亚类为IgG3 。结论　制备得到的Aβ1-42 单克隆抗体特异性强 ,效价高     

应用OKT单克隆抗体检测单纯疱疹性角膜炎中药治疗前后外周血T细胞亚群

为探讨单纯疱疹性角膜炎中药治疗前后外周血T细胞亚群变化，用OKT单克隆抗体检测了112例单纯疱疹性角膜炎，随机分为中药治疗组60例，西药对照组52例。发现中药治疗组治愈率86．6％，总有效率98．33％；西药对照组治愈率71．15％，总有效率90．38％；两组差异有显著性（P＜0．05）。外周血T细胞亚群：治疗前，两组患者辅助性T细胞（TH）的比例明显低于抑制性T细胞（TS）（P＜0.01）；中药治疗组辅助性T细胞（TH）治疗后较治疗前明显提高（P＜0．05），而西药对照组治疗后辅助性T细胞（TH）较治疗前虽有提高，但差异无显著意义（P＞0．1）。说明单纯疱疹性角膜炎患者服中药后，机体内辅助性T细胞比值增加，细胞免疫功能增强。     

寻常型泛发性银屑病患者外周血淋巴细胞亚群分析

用单克隆抗体,ABC法对寻常型泛发性银屑病患者外周血淋巴细胞亚群进行分析,结果显示:T淋巴细胞亚群数在退行期患者大致正常(P>0.05),T_(11)~+,T_4~+细胞和T_4/T_8比值在静止期进行期和患者显著减低,在进行期患者的下降更为显著(P<0.01)。说明寻常型泛发性银屑病患者外周血T淋巴细胞亚群失衡,其数值可能与病情的活动性有关。     

抗人钠碘转运体单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立与鉴定

目的　利用合成短肽制备抗人钠碘转运体 (NIS)单克隆抗体。方法　以人NIS蛋白质的两个片段 (第 2膜外段和第14f段 )为抗原免疫小鼠 ,运用杂交瘤技术 ,制备鼠抗人NIS单克隆抗体 (rhNISMAb) ,然后采用小鼠Ig亚类测定试剂条测定单抗的亚类 ,并通过ELISA、Western blot、免疫组化染色等技术鉴定其特异性。结果　运用杂交瘤技术成功地制备出能稳定分泌抗人NIS单克隆抗体的细胞系。Western blot分析表明 :此单抗所识别的靶分子的相对分子量主要在 97KD ,免疫组化染色显示 :甲状腺滤泡细胞膜上有棕黄色着色 ,以基底侧最为明显。结论　成功地制备出抗人NIS单克隆抗体 ,为NIS抗原 抗体的研究提供了新的工具     

小儿T淋巴细胞亚群的正常值的探讨

本文采用抗人T淋巴细胞单克隆抗体免疫荧光技术,对35例健康小儿的T细胞亚群进行了初步探讨。检验结果7岁～11岁健康小儿的CD_366～70%,CD_436～40%,CD_827～32%,CD_4/CD_8 0.86～1.76。本组资料的测定值与武汉、上海的类似研究进行了初步比较,对有关T细胞亚群的临床应用情况进行了初步讨论。鉴于健康小儿的T细胞亚群值报道甚少,建议本组测定值可作为类似研究时之参考值。