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《西安交通大学学报(医学版)》2019,(3):399-405
目的探究氧化应激通过激活细胞周期蛋白依赖性激酶5(cyclin-dependent kinase 5, Cdk5)抑制叉头框转录因子O亚家族蛋白1(forkhead box O1, FOXO1)的神经元损伤的具体机制。方法在HEK细胞中,共同转染过表达P39/Cdk5和FOXO1-WT或者FOXO1-S249A突变体,利用特异性磷酸化抗体pS249-FOXO1能够特异识别FOXO1的Ser249位点磷酸化特点,通过Western blot检测Cdk5/p39对FOXO1的磷酸化。通过体外培养HEK细胞中过表达Cdk5、p39和FOXO1,免疫共沉淀探究Cdk5和FOXO1以及Cdk5和p39的相互作用。在原代神经元过表达不同的Cdk5激活因子(p25、p35、p39)以及Cdk5激酶复合物,使用双荧光素酶实验探究其不同组合对FOXO1转录活性的影响。用Cdk5抑制剂rocovitine干预,观察其对FOXO1出入的影响;同时通过核质分离的方法对比了Cdk5杂合小鼠和野生型大脑皮层组织的FOXO1核质定位。分别用H_2O_2、glutamate处理神经元,通过Western blot观察氧化应激对Cdk5的活性调节,同时用双荧光素酶实验探究其对FOXO1转录因子的影响;最后通过caspase-3染色观察H_2O_2、glutamate的不同时间梯度处理对神经元凋亡的影响。结果 Cdk5和p39能够直接与FOXO1相互作用,并磷酸化FOXO1的Ser249位点。激活Cdk5能够显著抑制FOXO1的转录活性,而用Cdk5抑制剂(roscovitine)能够显著提高FOXO1的转录活性并诱导FOXO1入核。与野生型对比,在Cdk5杂合子中,FOXO1蛋白在细胞核中定位显著提高。H_2O_2和glutamate处理诱导p35切割形成p25,同时抑制FOXO1的转录活性,而敲低Cdk5能够缓解H_2O_2和glutamate对FOXO1的转录活性的抑制。通过H_2O_2和glutamate处理的原代神经元,caspase3染色显著增加。结论 Cdk5/p39可以磷酸化FOXO1-ser249位点,并抑制FOXO1的转录活性;而氧化应激能够通过激活Cdk5,抑制FOXO1的转录活性,并诱导神经元凋亡。 相似文献
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《铁道机车车辆工人》2022,(1)
对铁路货车板柱式侧墙制造传统工艺进行分析,提出板柱式侧墙自动化制造方案,通过对侧墙制造的各工位详细探究及工件自动传输、便捷化组装、自动化焊接、柔性叉式翻转、制造信息化技术的研究应用,实现板柱式侧墙的自动化生产,劳动用工显著减少,提高了生产效率,稳定了产品质量,为铁路货车板柱式侧墙的自动化制造提供了一定的经验。 相似文献
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<正>0引言当驾引人员申请拖船协助靠离泊时,通常将拖船配置在迎流端,若有2艘及以上拖船协助,则将大功率拖船配置在迎流端,通过拖船在外舷正横方向的顶推和拖拉完成靠离泊作业。但是,靠离泊时是否可以将拖船配置在内舷?拖船顶推的位置是否可以稍向前或向后移?拖船顶拖的方向朝前或朝后是否更好?拖船作为协助靠离泊的特殊船舶,还有哪些潜能可以开发和利用?这些问题值得深入思考。作为港内靠离泊专业人士的引航员,熟练掌握拖 相似文献
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<正>0引言救助船接近落水人员进行救助的方法,对于在海上大风浪中快速救人起关键作用。目前,8 000 k W的新型专业救助船,其操纵设备性能优良:配备前、后驾控操纵台;双车CPP控制;双襟翼舵,能使用分开/联合控制舵;艏侧推器2台推力98 k N,艉侧推器1台推力78.4 k N。以上操纵设备是救助船在海上精确操纵的硬件保障,但由于船舶操纵惯性以及海上风、浪、流的影 相似文献
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测量设备验收是一项基础、系统的工作,通过设备验收,检验设备实际指标是否符合购置的要求,是否满足相关测量规范标准,确定新购置设备在实际生产中的操作流程、工程适用度。三维侧扫声呐及条带测深仪是本中心2018年引进的新型测量设备,根据中心质量管理体系和相关规范的要求,测绘设备在投入使用前需要进行海上测试以保证设备有效性和结果的准确性,并积累设备使用经验,指导实际生产。 相似文献
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津浦线担子~符离集站区间自动闭塞改造工程,采用ZWP-2000A型无绝缘轨道电路,设双线双向四线制改方电路,要求出发信号机改为二方向出发信号机,正线轨道电路采用2000A型新型叠加轨道电路,增加反方向进站信号机。本次改造淘汰ZP-89型移频自动闭塞区间电路和正线股道发码电路部分,在施工中对既有设备安全和运输效率影响较大。在津浦线开通27站28区间的基础上,我们总结了ZWP-2000A型无绝缘轨道电路开通故障重点所在, 相似文献