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121.
《西安交通大学学报(医学版)》2019,(3):399-405
目的探究氧化应激通过激活细胞周期蛋白依赖性激酶5(cyclin-dependent kinase 5, Cdk5)抑制叉头框转录因子O亚家族蛋白1(forkhead box O1, FOXO1)的神经元损伤的具体机制。方法在HEK细胞中,共同转染过表达P39/Cdk5和FOXO1-WT或者FOXO1-S249A突变体,利用特异性磷酸化抗体pS249-FOXO1能够特异识别FOXO1的Ser249位点磷酸化特点,通过Western blot检测Cdk5/p39对FOXO1的磷酸化。通过体外培养HEK细胞中过表达Cdk5、p39和FOXO1,免疫共沉淀探究Cdk5和FOXO1以及Cdk5和p39的相互作用。在原代神经元过表达不同的Cdk5激活因子(p25、p35、p39)以及Cdk5激酶复合物,使用双荧光素酶实验探究其不同组合对FOXO1转录活性的影响。用Cdk5抑制剂rocovitine干预,观察其对FOXO1出入的影响;同时通过核质分离的方法对比了Cdk5杂合小鼠和野生型大脑皮层组织的FOXO1核质定位。分别用H_2O_2、glutamate处理神经元,通过Western blot观察氧化应激对Cdk5的活性调节,同时用双荧光素酶实验探究其对FOXO1转录因子的影响;最后通过caspase-3染色观察H_2O_2、glutamate的不同时间梯度处理对神经元凋亡的影响。结果 Cdk5和p39能够直接与FOXO1相互作用,并磷酸化FOXO1的Ser249位点。激活Cdk5能够显著抑制FOXO1的转录活性,而用Cdk5抑制剂(roscovitine)能够显著提高FOXO1的转录活性并诱导FOXO1入核。与野生型对比,在Cdk5杂合子中,FOXO1蛋白在细胞核中定位显著提高。H_2O_2和glutamate处理诱导p35切割形成p25,同时抑制FOXO1的转录活性,而敲低Cdk5能够缓解H_2O_2和glutamate对FOXO1的转录活性的抑制。通过H_2O_2和glutamate处理的原代神经元,caspase3染色显著增加。结论 Cdk5/p39可以磷酸化FOXO1-ser249位点,并抑制FOXO1的转录活性;而氧化应激能够通过激活Cdk5,抑制FOXO1的转录活性,并诱导神经元凋亡。 相似文献
122.
东京地铁公司鹭沼检车区员工为改善车辆维修作业开展了技术攻关活动,文章介绍为改进更换弓头托架时的搬运方法以及减轻作业人员体力负担而制作的搬运弓头托架工装的基本结构、使用方法及应用效果,指出使用该工装(夹具)能提高作业效率、减轻负担及提高施工安全性。 相似文献
123.
124.
加固软弱地基克服箱桥顶进时的“扎头” 总被引:1,自引:0,他引:1
软弱地基箱桥顶进,是一个比较复杂的施工过程,影响因素很多,本文分析了软弱地基箱桥顶进,“扎头”的原因,介绍了用快硬混凝土对地基土进行加固的方法。 相似文献
126.
127.
对主机活塞顶部严重烧蚀的情况和处理过程进行了简单介绍,重点对产生活塞头严重烧蚀的原因进行了详细的分析,指出有管理上的问题,也有设备方面固有的缺陷。对SULZER RTA-48型主机的管理具有一定的借鉴和指导意义。 相似文献
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故障现象:某型引俄新装备柴油机因缸套漏水后,进行吊缸修理。在更换缸头出水口密封橡胶圈时,发现原橡胶圈已经老化(一个圆型、一个腰型),因无进口备件安装了研仿代用品,初次安装时,选用国产4604型橡胶,最大耐温为250℃,当机器负荷增加至30%左右,淡水温度62℃,压力0.2MPa,排气温 相似文献
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130.
本文介绍内孔密封槽底径专用卡尺的类型、结构以及带T型测量头专用卡尺的设计方法。文章通过对专用卡尺测量误差的分析,达到指导和完善设计的目的。文中还介绍专用卡尺的扩展应用,通过改变卡脚形状和长度的计算,解决了在大型立式车床上加工倒置盲孔的测量问题。 相似文献