突变型低氧诱导因子1α加速骨缺损部位新血管生成的实验观察

目的通过突变低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1,HIF1α)基因的3个氨基酸位点研究该基因在常氧条件下骨缺损区域对血管新生效应的影响。方法定点突变HIF1α编码区(coding sequence,CDS)402、564和803位3个氨基酸后将基因重组入腺病毒pAdEasy-1系统并测定滴度,同理包装未突变组和空病毒组;以3种病毒液连同空白组共分4组进行后续实验(A组:含突变HIF1α基因病毒液,B组:含未突变HIF1α基因病毒液,C组:空病毒液,D组:空白组);将病毒液转染入兔骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)内,通过示踪因子人源化绿色荧光蛋白(human renilla reniformis green fluorescent protein,hrGFP)观察病毒转染效率,检测各组转染细胞中HIF1α基因mRNA和蛋白表达情况;制作兔桡骨缺损动物模型,将含目的基因的病毒液按上述分组转染MSCs后作为种子细胞移植到多孔纳米磷灰石-硅灰石生物活性玻璃陶瓷(apatite-wollastonite magnetic bioactive glass-ceramic,A-W MGC)载体中搭建人工组织工程骨架载体并植入体内,于术后8周处死各组动物,取植入区域组织做新血管生成检测。结果 CDS区第402、564和803位氨基酸均定点突变为丙氨酸;3种腺病毒重组体构建成功并鉴定完毕;A、B两组HIF1αmRNA表达量明显高于C、D两组,差异具有统计学意义(P<0.05),而A、B两组之间及C、D两组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05);A组HIF1α蛋白表达量明显高于其他3组,差异具有统计学意义(P<0.05),而B、C、D 3组之间比较差异无统计学意义(P>0.05);A组转染到动物体内后可见明显成血管效果,其他3组未见缺损区域有血管新生。结论 13点突变后HIF1α基因能够在常氧条件下大量且高效表达;23点突变后HIF1α基因能够在体内局部形成有效的血管网络。     

叶酸对冠心病大鼠血清同型半胱氨酸和血管内皮生长因子的影响

目的观察叶酸、维生素B12对冠心病大鼠模型血清同型半胱氨酸(HCY)、血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法将健康4周龄雄性SD大鼠60只(体重110±10g)随机分为正常对照组、高脂饮食组、叶酸组、维生素B12组、叶酸及维生素B12组。正常对照组给予普通饲料喂养;余各组给予高脂饲料喂养,第12周末测定各组大鼠血清血脂、HCY、VEGF含量;光镜、电镜查看腹主动脉组织学改变;利用Western blot检测各组大鼠腹主动脉中VEGF的表达。结果用药12周后,单独应用叶酸或联合维生素B12都能有效地降低冠心病模型大鼠血清HCY水平(P<0.01),升高血清和血管中VEGF水平(P<0.05),同时能改变VEGF的蛋白表达(P<0.05)。结论高脂饮食可以影响血清和血管中HCY、VEGF的水平,而应用叶酸或联合维生素B12可以改善或减轻高脂状态所造成的血管内皮损伤。     

星形细胞瘤中血管生成拟态的鉴定及其临床意义

目的明确星形细胞瘤中是否存在血管生成拟态及其临床意义。方法应用三维培养技术、HE染色、免疫组织化学与组织化学双重染色方法,观察星形细胞瘤中拟态血管的存在情况。结果星形细胞瘤细胞株三维培养后发生细胞重塑,彼此融合,相互连接形成网状结构;免疫组织化学与组织化学双重染色可见,Ⅰ、Ⅱ级星形细胞瘤中均未发现血管生成拟态;Ⅲ级星形细胞瘤中发现有3例存在血管生成拟态(3/18),血管生成拟态密度为(5.55±3.13)个/HP;Ⅳ级星形细胞瘤中发现有7例存在血管生成拟态(7/25),血管生成拟态密度为(8.81±2.84)个/HP;血管生成拟态随着恶性程度的增加明显增加,各组间差异具有统计学意义(P<0.05)。结论星形细胞瘤中存在血管生成拟态现象,血管生成拟态与肿瘤的恶性程度呈正相关。     

再植肢不同时期侧支循环重建的影像学实验研究

研究大鼠再植肢不同时期主要动脉阻断后侧支循环重建的影像学表现。方法，选用成年ＳＤ大鼠４８只制成再植肢动物模型，每组随机选３只鼠做出管造影，分析，比较再植肢不同时期侧支循环的影象学变化。     

ADSCs与HUVECs体外共培养促进HUVECs增殖及成血管化作用

目的为制备血管化胰岛,分离、培养脂肪来源干细胞(adipose derived stem cells,ADSCs),观察细胞共培养条件下,ADSCs对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVECs)增殖及成血管化功能的促进作用并探讨其机制。方法采用胶原酶消化法分别原代培养获得ADSCs与HUVECs,细胞形态学、免疫荧光或多向诱导分化鉴定,建立HUVECs与ADSCs接触式及间接共培养体系,设立HUVECs单独培养为对照组,比较两组成血管化功能、HUVECs增殖状况及上清液血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,b-FGF)浓度。结果通过原代培养成功获得ADSCs与HUVECs;第3代ADSCs呈均一的长梭形纤维细胞样形态,免疫荧光检测见CD44/CD49d(+)、CD31/CD34(-),并具有多向分化功能;第2代HUVECs免疫荧光检测示vWF/CD31(+)。于Matrigel内接触式共培养4h,ADSCs+HUVECs组血管密度高于HUVECs组;间接共培养时,HUVECs生长曲线于ADSCs+HUVECs组上移,在对数生长期的第3、4、5天,ADSCs+HUVECs组HUVECs计数为(4.52±0.31)×104、(7.18±0.45)×104、(8.23±0.36)×104,大于单独HUVECs组的(2.71±0.25)×104、(4.87±0.26)×104、(6.86±0.33)×104(P<0.01);ADSCs+HUVECs组HUVECs群体倍增时间为(1.36±0.23)d,短于单独HUVECs组的(1.62±0.31)d。四甲基噻唑蓝(methylthiazol tetraztlium,MTT)法测定HUVECs的A值培养第1、3、5、7天的ADSCs+HUVECs组高于单独HUVECs组(P<0.01)。培养第3、7、13天时ADSCs+HUVECs组上清液VEGF、b-FGF浓度均高于HUVECs组(P<0.01)。结论 ADSCs与HUVECs共培养时,ADSCs可能通过分泌或增加HUVECs分泌VEGF、b-FGF等细胞因子,进而促进HUVECs增殖及成血管化。     

肾小球疾病患者血清白细胞介素13和血管内皮生长因子的变化及其意义

目的研究原发性和继发性肾小球疾病(GD)患者血清白细胞介素-13(IL-13)和血管内皮生长因子(VEGF)的含量变化、二者的相关性及免疫抑制剂对其含量的影响。方法采用双抗体夹心ABC-ELISA法检测GD患者及对照者血清IL-13和VEGF的含量。结果GD患者血清IL-13和VEGF均显著高于对照组,且二者呈显著正相关(r=0.540,P<0.01)。未服用免疫抑制剂患者血清IL-13、VEGF显著高于对照组(P<0.05,P<0.01),而服用者与对照相比无显著性差异(P>0.05)。结论IL-13和VEGF共同参与GD的发病机制,且存在一定的相关性;免疫抑制剂可降低血清IL-13和VEGF的含量水平。     

多普勒超声检测糖尿病患者的血管内皮功能

目的　利用多普勒超声评价糖尿病 (Diabetes,DM)患者的血管内皮功能。方法　测 3 0例DM患者和 3 0例正常人肱动脉充气加压及舌下含服硝酸甘油前后血管直径的变化。结果　DM患者存在血管内皮功能受损 ,应用多普勒超声可以早期、准确、有效地评价糖尿病患者血管内皮功能。     

下肢动脉慢性完全闭塞病变介入治疗的血管评估方案研究进展

下肢动脉慢性完全闭塞性病变(chronic total occlusion, CTO)是下肢动脉硬化闭塞症(peripheral artery disease, PAD)最严重的类型,易引发高截肢及死亡率。介入治疗(endovascular therapy, EVT)为目前下肢动脉CTO的主要治疗策略,但由于CTO病变复杂程度高,常导致手术成功率较低且并发症发生。分析下肢动脉CTO的特征,建立一个有效预测下肢动脉CTO血运重建成功率的分级或评分系统,有助于制定合理治疗策略及评估获益/风险等。本文主要介绍近年来的一些分级及评分系统,包括钙化分级(PACSS、PARC、TAC)、CTOP分型、Infrapop-CTO评分及J-BTK CTO评分等。其中PACSS分级及PARC钙化分级适用于髂股段、股腘段及膝下动脉段钙化评估;TAC分级适用于膝下动脉段钙化评估。随着下肢动脉钙化分级增加,其CTO病变的血运重建成功率呈下降趋势。CTOP分型是依据下肢动脉CTO近远端纤维帽形态所研发,其Ⅳ型顺行介入成功率低。Infrapop-CTO评分及J-BTK CTO评分适用于预测膝下动脉段CTO血运重建成...     

2型糖尿病患者血清Lp(a)水平及其与血管并发症的关系

目的 观察2型糖尿病患者血清Lp(a)水平的变化及其与血管并发症的关系。方法 选择90例糖尿病患者和35例健康对照者,根据血管并发症的不同分为单纯糖尿病组、糖尿病合并高血压、冠心病、视网膜病变及糖尿病肾病组。采用免疫透射比浊法测定其血清中Lp(a)水平,采用酶法测定其血清中TC、TG、HDL、VLDL的水平。结果 单纯糖尿病组及糖尿病合并各种血管并发症组的血清Lp(a)水平明显高于正常对照组,同时,还发现有血管并发症组的血清Lp(a)水平明显高于单纯糖尿病组,血清Lp(a)水平与常见的血脂指标无明显相关关系。结论 Lp(a)是2型糖尿病血管并发症发生发展的一个独立危险因素。     

恒磁场对人脐动脉血管平滑肌细胞胞浆游离钙离子浓度的影响

目的 研究恒磁场对培养的人脐动脉血管平滑肌细胞(VSMC)胞浆内游离钙离子浓度([Ca2 ]i)的影响,探讨恒磁场抑制VSMC增殖的作用机制.方法 离体培养人脐动脉VSMC,不同强度的恒磁场垂直作用于VSMC,应用激光共聚焦显微镜观察恒磁场对VSMC胞浆[Ca2 ]i的影响.结果 5 mT的恒磁场作用于VSMC后10-50 min[Ca2 ]i较对照组明显下降,20 min下降最明显;其平滑肌细胞的Ca2 荧光强度明显弱于对照组,至60 min接近对照组.结论 恒磁场对VSMC胞浆[Ca2 ]i有明显降低作用,可能是抑制VSMC细胞增殖的机制.为经皮冠状动脉成型术(PTCA)术后再狭窄的治疗提供了新的理论基础.