新型杂多化合物抗禽流感病毒的实验研究

目的探讨新型杂多化合物(PTW)抗禽流感病毒的作用。方法采用细胞病变法结合MTT法检测PTW对MDCK细胞的毒性和对禽流感病毒(H5N1)的抑制作用;以H5N1感染的小鼠为实验模型,检测PTW对H5N1感染小鼠的治疗作用。结果PTW对MDCK细胞的最大无毒质量浓度为190.55 mg/L,半数致死质量浓度为909.9 mg/L;体外实验结果表明PTW对禽流感病毒半数抑制质量浓度(IC50)为13.49 mg/L,治疗指数(TI)为67.44;体内实验显示PTW对H5N1感染小鼠有明显的治疗作用,25 mg/kg剂量组对H5N1感染小鼠的肺炎抑制率达166.16%,生命延长率为28.36%。结论PTW对H5N1禽流感病毒具有较好的抑制作用。     

HPV-6/11 L1/E6、HPV-6/11 L1/E7嵌合DNA疫苗质粒的构建

目的　构建HPV 6 / 11L1/E6、HPV 6 / 11L1/E7预防、治疗性DNA疫苗质粒。方法　运用PCR扩增HPV 6 /11L1、E6、E7序列 ,PCR产物连接至pGEMT Easy质粒 ,测序鉴定正确后 ,分别连接至真核表达载体pVAX ,再用酶切、连接而构建成HPV 6 / 11L1 E6 /E7 pVAX质粒。运用电穿孔法将所获得质粒转染COS 7细胞 ,免疫组化检测蛋白表达情况。结果　所构建质粒的插入目的片段测序正确 ;免疫组化检测在胞浆胞核可见棕黄色点状阳性产物沉积。结论　所构建的HPV 6 / 11L1 E6 /E7 pVAX融合蛋白表达质粒可在体外表达L1 E6 /L1 E7蛋白 ,为今后进行DNA疫苗的动物实验及临床实验研究做好准备     

DETECTION OF CYTOMEGALOVIRUS（CMV） IMMEDIATE EARLY ANTIGENIN KIDNEY BIOPSIES AND TRANSPLANT NEPHRECTOMIES

Cytomegalovirus (CMV )infectionisoneofthemostcommonposttransplantcomplicationsandwasassociatedwithanincreasedmorbidityandmor talityintransplantrecipients[1,2 ] .Duringthefirst 4monthsafterrenaltransplantation ,theincidenceofactiveCMVinfectionisapproximately 5 0 % -90 % [3] .Recently ,manyresearchershavefoundthatCMVcouldaffecttheimmunityofhumanbe ing .CMVinfectionisalsoariskfactorforacuteandchronicrejectionofrenalallograftanddirectlycorrelateswithdecreased patientandallograftsur vival[4 - 7…     

涎腺肿瘤组织中人乳头瘤病毒DNA的检测

为探讨腺上皮起源的涎腺良、恶性肿瘤与人乳头瘤病毒（Ｈｕｍ ａｎ ｐａｐｉｌｌｏ ｍ ａｖｉｒｕｓ, ＨＰＶ）感染的关系,应用聚合酶链反应技术（ＰＣＲ）,采用共有引物检测４４例涎腺肿瘤组织中的ＨＰＶ ＤＮＡ的存在状况。１０ 例正常涎腺组织作为对照。结果显示：肿瘤组织中ＨＰＶ ＤＮＡ 阳性检出率达７０．４５％ （３１／４４）,其中恶性肿瘤 ＨＰＶＤＮＡ 阳性率为７７２７％ （３１／４４）;良性肿瘤ＨＰＶＤＮＡ阳性率为６３６３％ （１４／２２）;而正常对照组织中ＨＰＶ ＤＮＡ阳性率仅为１０％ （１／１０）。提示：涎腺肿瘤的发生可能与ＨＰＶ感染有关     

空气过滤器在邮轮预防新冠疫情中的应用

通过监测证明邮轮上存在新型冠状病毒通过气溶胶进行空气传播的风险,并论证采取高级别空气过滤器降低该风险的技术方案的可行性。采用WM-B600型在线气溶胶监测设备对邮轮上典型密闭公共场所中的气溶胶含量进行实时监控,发现被监测的场所出现周期性的气溶胶质量浓度急剧上升的情况,且与船上用餐、集会和登船等人员聚集在场所内的时间相吻合,证实船上存在病毒通过气溶胶进行空气传播的风险;通过分析常见预防措施的适用性,论证在船上采用高级别空气过滤器是预防病毒传播的有效措施。在此基础上,给出通过升级现有邮轮隔离区等高风险区域的中央空调系统空气过滤器等级预防病毒在船上通过空气传播的实船应用方案。     

乙脑病毒非结构蛋白NS1的原核表达及重组蛋白间接ELISA方法的初步建立

克隆表达乙脑病毒非结构蛋白NS1,并以其作为包被抗原,建立间接ELISA诊断方法。用此方法分别检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)及猪圆环病毒(PCV)阳性血清各3份,以及33份健康非免疫仔猪血清和205份乙型脑炎灭活疫苗免疫的猪血清,评价NS1-ELISA方法的特异性。取54份乙脑病毒感染的猪血清进行NS1-ELISA检测,评价该方法的敏感性。NS1-ELISA检测的特异性为95%,敏感性达90.7%。与商品化试剂盒比较,其符合率达到96.0%。在重复性试验中,NS1-ELISA检测方法重复性较好。本试验为进一步研究不同感染时期NS1抗体水平的差异奠定基础。     

携带NT4-AcSDKP融合基因重组腺相关病毒载体的构建

目的构建携带NT4-AcSDKP融合基因的重组腺相关病毒,为探讨AcSDKP(乙酰化-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸)的多样化功能提供基础。方法以质粒载体pGEM-T Easy/NT4为模板,PCR技术获得NT4-AcSDKP基因片段,插入腺相关病毒载体穿梭质粒pSSHG-CMV,构建重组质粒pSSCMV-NT4-AcSDKP。用腺病毒全基因组质粒pFG140、辅助质粒pAAV/Ad和已构建的重组质粒,三质粒磷酸钙共沉淀法转染80%融合的293细胞,包装rAAV-NT4-AcSDKP,RT-PCR方法测定重组腺相关病毒滴度。结果成功合成NT4-AcSDKP基因,构建重组质粒pSSCMV-NT4-AcSDKP,包装获得滴度为3.40×1010 copies/mL的重组腺相关病毒。结论成功获得表达AcSDKP重组腺相关病毒,为抗炎、抗纤维化、器官修复等方面的进一步研究奠定了基础。     

分泌表达NT4-AcSDKP的重组腺相关病毒对CCl_4致小鼠肝纤维化的保护

目的观察重组腺相关病毒rAAV/NT4-AcSDKP对四氯化碳(CCl4)诱导的小鼠肝纤维化的影响。方法 30只昆明雌性小鼠随机分为正常对照组、模型组和干预组,造模采用200mL/L CCl4花生油混合液腹腔注射致小鼠肝纤维化模型,共8周,干预组小鼠在加害4周后注射重组腺相关病毒。于8周实验结束时处理存活的全部小鼠,观察重组病毒对小鼠肝组织病理变化、肝功能生化指标以及肝纤维化指标等的影响,以及NT4-AcSDKP在肝组织中的表达变化。结果融合基因在干预组肝组织中表达并且重组腺相关病毒对CCl4引起的肝组织病理有明显改善;与模型组相比,干预组小鼠的肝纤维化指标透明质酸(HA)、层黏蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(CⅣ)的P值分别为0.00、0.00、0.01、0.03,P<0.05,差异具有统计学意义;但是谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)、总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)等肝功能生化指标的P值分别为0.89、0.38、0.58、0.32、0.32,均为P>0.05,差异无统计学意义。结论携带NT4-AcSDKP融合基因的重组腺相关病毒对CCl4引起的小鼠肝纤维化有一定的保护作用,与近期用商品化四肽保护CCl4诱导的小鼠肝纤维化作用保持一致。     

JC病毒蛋白VP3原核表达载体的构建及诱导表达

目的 构建JC病毒蛋白VP3原核表达载体,并观察其表达情况.方法 通过聚合酶链式反应(PCR)获得VP3基因,将其连接到pGEM T载体,测序正确后插入至原核表达载体pET 32a(+)中,转化BL21大肠杆菌,IPTG诱导,并通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)、Western blot免疫印迹分析鉴定融合蛋白的表达情况.结果 扩增获得VP3基因片段,成功构建了大肠杆菌原核表达JC病毒VP3载体.经IPTG诱导,得到了分子质量为59 ku的目的 蛋白,Western blot证实其具有良好的抗原性.结论 本研究成功表达了VP3蛋白,对于研究VP3蛋白的免疫原性和生物学特性奠定了的基础.     

2型腺伴随病毒基因治疗载体的构建

目的　构建一种适用于中枢神经系统疾病的基因治疗载体。方法　以野生型 2型腺伴随病毒 (AAV 2 )质粒pssv9int 及逆转录病毒载体质粒plxsn为基本元件 ,利用重组DNA技术 ,构建了一种通用型AAV载体质粒pssHG Neo。结果　该质粒除含有必备的原核细胞复制子及Ampr 筛选基因外 ,还含有真核细胞筛选基因———Neor 及供插入目的基因的多克隆位点 (MCS) ,在MCS的上游为逆转录病毒的长末端重复序列 (5’LTR) ,具有启动子的功能 ,启动定向插入到MCS的外源目的基因。质粒中的AAV反向末端重复序列 (ITR)具有定点整合于人基因组 1 9号染色体S1位点的特点。结论　AAV载体是具有广阔前景的基因治疗载体