T细胞CTLA-4、TCRVβ8基因克隆、重组及表达

目的克隆Graves’病患者甲状腺组织T淋巴细胞的CTLA-4胞外段和TCRVβ8目的基因,重组为CTLA-4-TCRVβ8基因并表达出融合蛋白。方法RT-PCR从Graves病患者甲状腺组织中克隆T淋巴细胞的CTLA-4胞外段和TCRVβ8基因,依次与表达质粒进行连接,双酶切及测序鉴定获得正确的重组子;原核表达融合蛋白,SDS-PAGE及Western-Blotting检测蛋白表达情况。结果基因克隆扩增出CTLA-4和TCRVβ8目的基因片段,测序结果证实序列与已发表的一致。重组基因原核表达出与预期分子质量大小相符的目的蛋白。结论成功构建和表达了CT-LA-4-TCRVβ8基因,为探索Graves’病免疫耐受治疗提供了基因产品。     

碱金属离子掺杂对CaWO4:Tb^3+发光和余辉性能的影响

钨酸钙作为一类优越的无机发光材料,以其稳定的化学、物理性质,吸引了广泛的注意.而共掺碱金属离子对绿色CaWO4:Tb3+荧光粉的发光及余辉性能的影响尚未报道,因此本文采用高温固相法在空气氛围下制备了Li+,Na+,K+掺杂的CaWO4:Tb3+系列绿色荧光粉,并通过XRD、激发光谱、发射光谱、余辉衰减、热释光谱等对其发光性能和余辉性能做了相关测试和研究.通过研究比较,当共掺杂不同碱金属离子作电荷补偿时CaWO4:Tb3+的发光及余辉性能得到不同程度的提高.     

基于PLC的烧结炉温度控制

基于PLC的温度控制系统以三菱FX2N型PLC为控制核心,由扩展模块FX2N-4AD-TC,FX2N-2DA,热电偶组成。根据已经建立的模糊语言变量赋值表和模糊控制规则,进行模糊推理和模糊判决,建立离线的模糊控制查询表,并给出电阻炉温度模糊控制的相关程序。采用Fuzzy-PID复合控制,系统同时获得良好的动态性能和稳态性能。     

原代培养乳鼠窦房结细胞的形态学及表面抗原研究

目的 建立乳鼠窦房结细胞(SNC)的体外分离纯化培养方法,了解SNC的形态结构特点,观察表面抗原超极化激活环核苷酸门控阳离子通道基因4(HCN4)和缝隙连接蛋白45(Cx45)的细胞表达特点,为细胞生物起搏的深入研究提供一定实验依据.方法 取新生SD乳鼠的窦房结组织,胰酶逐次消化,并予差速贴壁及5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-BrdU)纯化处理进行原代窦房结细胞的培养.结果 在培养的窦房结细胞中可观察到3种形态的细胞,即梭形细胞、三角形细胞和多边形细胞,其中梭形细胞所占比例最大,搏动频率最快,细胞器不发达,肌原纤维稀少,表达HCN4和Cx45;三角形细胞微量表达Cx45.结论 ①胰酶消化法结合差速贴壁及5-BrdU处理,是可靠的窦房结细胞纯化培养技术;②搏动频率最快、HCN4和Cx45表达阳性的梭形细胞可能系窦房结起搏细胞.     

离子束增强沉积TiN薄膜的耐蚀性

采用不同离子束入射方向的离子束增强沉积技术（IBED）在W18Cr4V高速钢表面沉积TiN薄膜.利用阳极极化曲线测试技术研究TiN薄膜在0.5mol/L H2SO4和3％ NaCl溶液中的耐蚀性.结果表明：在0.5mol/LH2SO4溶液中,离子束入射角度为45°时的TiN薄膜的阳极极化曲线呈现自钝化,自腐蚀电位Ecorr由原始高速钢的-400 mV增至-71 mV,致钝电流密度ib和维钝电流密度ip分别比原始试样降低4个和2个数量级,耐蚀性能显著提高.在3％ NaCl溶液中,离子束入射角度分别为0°、30°沉积的TiN薄膜的阳极极化曲线均呈现自钝化-点蚀击穿过程,随着入射角度的增加,自腐蚀电位和点蚀击穿电位升高,入射角度为45°时的TiN薄膜不发生点蚀破坏,自腐蚀电位Ecorr由原始高速钢的-600 mV增至-10 mV,具有高的抗点蚀性能.     

宫颈癌组织中erbB3、erbB4的表达及意义

目的　探讨erbB3、erbB4在宫颈癌中的表达及意义。方法　应用免疫组织化学HGH SABC方法检测了 5 0例宫颈癌组织 (鳞癌、腺癌各 2 5例 )、15例正常宫颈上皮组织中erbB3、erbB4的表达。结果　宫颈癌组织中erbB3、erbB4阳性表达率显著高于正常宫颈上皮组织 (P <0 .0 5 ) ,两者表达呈显著正相关关系 (r =0 .5 872 ,P <0 .0 0 1)。鳞癌中erbB3、erbB4的表达高于腺癌 ,但无统计学差异 (P >0 .0 5 )。erbB3、erbB4的表达与癌细胞分化程度呈负相关、与临床分期 (FIGO分期 )呈正相关 ,但无论erbB3、erbB4单独表达或同时表达均与宫颈癌预后无统计学意义。结论　erbB3、erbB4在宫颈癌发生发展中可能起到一定作用 ,可以预测宫颈癌恶性程度 ,但不能作为宫颈癌预后独立评价指标     

基于DirectShow框架的视频监控系统

根据实际需求，针对网络视频监控系统数据量大，实时性要求高等特点，提出了基于MPEG-4格式的远程视频监控系统的体系结构和逻辑模型，并在VC6．0环境下运用DirectShow框架和组播技术实现了一个基于PC的远程视频监控系统。该解决方案是基于软件编码方式的，具有良好的可重用性和可扩展性。     

原发性肾病综合征患儿白细胞介素-4、γ-干扰素与激素疗效的关系

目的探讨原发性肾病综合征患儿治疗前外周血白细胞介素-4(IL-4)、γ-干扰素(IFN-γ)与激素治疗效应的关系。方法31例原发性肾病综合征患儿于治疗前抽取静脉血分离单个核细胞,加入植物血凝素刺激其生长,取其上清液,用酶联免疫吸附双抗夹心法检测IL-4、IFN-γ,激素治疗8周后根据治疗反应分为激素敏感组(17例)及激素耐药组(14例)。20例健康儿童作为对照组。结果原发性肾病综合征中激素敏感组治疗前外周血IL-4水平明显高于激素耐药组(P<0.01);IFN-γ水平在激素敏感组及激素耐药组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论测定肾病综合征患儿治疗前外周血中的IL-4可以作为预测激素疗效的一项指标。     

介导p73去阻抑肽表达的重组腺伴病毒的构建和鉴定

目的构建编码融合基因NT4-p53(N37)-HA2-TAT的重组腺伴病毒表达载体,为恶性肿瘤基因治疗的实验研究奠定基础。方法采用互补引物二次PCR法以及T载体克隆法获得p53(N37)基因克隆,酶切后将其连同穿膜肽HA2-TAT片段一起连入pUC19/NT4质粒,再将融合基因NT4-p53(N37)-HA2-TAT亚克隆至腺伴病毒的穿梭质粒pSSHG-CMV中,构建重组质粒pSSHG-CMV/NT4-p53(N37)-HA2-TAT并进行酶切鉴定;应用磷酸钙沉淀法,pSSHG-CMV/NT4-p53(N37)-HA2-TAT、辅助质粒pAAV-Ad,腺病毒全基因组质粒pFG140三种质粒共转染HEK293细胞,包装出重组腺伴病毒rAAV/NT4-p53(N37)-HA2-TAT并用斑点杂交法测定重组病毒的滴度;MTT比色法、流式细胞仪观察重组腺伴病毒rAAV/NT4-p53(N37)-HA2-TAT对HepG2细胞的抑制作用。结果克隆出p53(N37)基因,经酶切及测序证实结果正确;得到高滴度的(2×1013pfu/L)重组腺伴病毒表达载体并对HepG2细胞有明显的抑制作用,且这一作用是通过诱导肿瘤细胞凋亡实现的。结论通过分子克隆体外重组技术成功制备了rAAV/NT4-p53(N37)-HA2-TAT复制缺陷型重组腺伴病毒,为下一步开展在p53突变或缺失肿瘤中针对p73的靶向性肿瘤基因治疗研究奠定了基础。     

基于BQ值和大地电磁法的公路隧道围岩分级

BQ值法是目前公路隧道围岩分级普遍采用的方法,实际应用中勘察结论多与施工现场存在一定差别。以石家庄西部某隧道为例,采用EH—4大地电磁法对隧道围岩进行了定性分析,并结合BQ值综合确定了围岩等级。结果表明,采用BQ值和EH—4综合评定隧道围岩等级可有效提高勘察精度。