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增强型绿色荧光蛋白标记的Hela细胞株的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
目的构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的Hela细胞系。方法PCR和DNA测序鉴定pEGFP-C1真核表达质粒,采用Qiagen tip 500进行pEGFP-C1真核表达质粒DNA的提取和纯化;cellfectin转染Hela细胞,G418筛选,有限稀释法单克隆培养,荧光显微镜进行荧光检测EGFP的表达,采用激光共聚焦显微镜观测器检测荧光特性。结果PCR和DNA测序证实pEGFP质粒结构正确;在倒置荧光显微镜下,转染24h后,部分Hela细胞可见绿色荧光,转染72h时,大约80%Hela细胞内均可见绿色荧光。加入含G418的选择性培养基进行选择性培养,选择荧光较强的Hela细胞经有限稀释,持续筛选及克隆化培养,获得稳定表达绿色荧光的Hela细胞克隆,扩大培养并传至10代以上,将此细胞株命名为Hela-EGFP。激光共聚焦显微镜观察发现:在蓝光(-395nm)激发时,Hela-EGFP细胞绿色荧光激发波长为395nm,最大发射峰为509nm。结论Hela-EGFP细胞株具备稳定表达EGFP的能力,为实时可视化进行宫颈癌侵袭转移机制的研究奠定了基础。 相似文献
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介绍了贝雷法的主要特点、设计方法,并对贝雷法设计的沥青混合料提出了优缺点,此方法为沥青混合料设计开辟了一个新的领域,它的应用将有广阔的发展前景。 相似文献
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贝雷支架原位现浇铁路简支箱梁施工技术 总被引:1,自引:0,他引:1
以温福铁路简支箱梁采用贝雷支架原位现浇代替移动模架制梁施工技术为例,系统介绍了贝雷支架结构体系设计、支架结构检算,以及贝雷支架拼装、贝雷支架现浇施工注意事项。 相似文献
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赵成贵 《铁道标准设计通讯》2013,(1):82-85
以津秦铁路客运专线31.5 m标准跨径简支梁支架法施工为例,分别介绍2支点双层贝雷梁支架、4支点单层贝雷梁支架及碗扣式支架现浇施工方案,以及3种类型支架方案的各自适用条件和优缺点,相对比较,其中以4支点支架工程量最小。 相似文献
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赣龙铁路新考塘隧道出口处于全风化花岗岩富水地层,且处于三线渐变段,开挖跨度大,隧道埋深小,最大开挖跨度达到30.3 m,最大开挖面积为396 m2,为国内外铁路隧道工程所罕见。为安全、经济、快速修建此隧道,基于工程所处具体地形地质条件,对浅埋软岩特大跨度渐变段隧道的结构选型与施工工法进行研究,形成了应用于喇叭口渐变段的隧道内轮廓采用多个分段阶梯式变化的设计方法。渐变段共计215 m,分6段阶梯式加宽,加宽值分别为0.8、2、4、6、8、10.3 m,轨面以上净空面积从85.16 m2到 200.02 m2变化。除加宽0.8 m段按常规双线段考虑外,加宽2、4、6 m段分别采用了四步CRD法、双侧壁导坑法、大墙脚复合双侧壁法,加宽8 m和10.3 m段采用了“靴型大边墙+加劲拱”复合工法,且其支护参数不同。目前新考塘隧道已施工完毕并投入运营,实践证明设计的隧道结构型式及相应的工法是合理可行的。 相似文献
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一种大跨度桥梁抢修方案 总被引:1,自引:1,他引:0
针对单孔跨径约100 m的桥梁遭到严重破坏的情况,提出一种运用装配式公路钢桥与斜拉索的抢修方案,进行了结构设计,应用ANSYS软件对主要构件进行了受力分析,计算结果表明方案基本可行. 相似文献
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客运专线斜交刚构连续梁支架设计与施工 总被引:1,自引:0,他引:1
在新建甬台温铁路客运专线某一跨河3×17m斜交刚构连续梁的工程实践中,对于跨河的刚构连续梁,采用贝雷桁架作为现浇支架,机械吊装操作,不仅降低了劳动强度,节约了工期,而且减少了施工成本,取得了显著的经济效益。 相似文献
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观音湖圣莲岛钢便桥采用贝雷式321型桁架单元,总长度(46×12m+6m+4×12m),其中50跨为上承式结构,边跨(第1跨)为下承式结构。介绍了设计荷载、设计水位的选取、便桥的结构布置及设计注意事项,提出了钢便桥使用维护措施。通载试验表明设计符合要求。实际使用表明,圣莲岛钢便桥安全可靠,加快了圣莲岛开发建设进度。 相似文献