全文获取类型
收费全文 | 35857篇 |
免费 | 458篇 |
专业分类
公路运输 | 16060篇 |
综合类 | 14389篇 |
水路运输 | 1774篇 |
铁路运输 | 1551篇 |
综合运输 | 2541篇 |
出版年
2024年 | 197篇 |
2023年 | 554篇 |
2022年 | 631篇 |
2021年 | 567篇 |
2020年 | 417篇 |
2019年 | 485篇 |
2018年 | 184篇 |
2017年 | 498篇 |
2016年 | 501篇 |
2015年 | 883篇 |
2014年 | 2099篇 |
2013年 | 1824篇 |
2012年 | 1838篇 |
2011年 | 1997篇 |
2010年 | 1858篇 |
2009年 | 2394篇 |
2008年 | 2300篇 |
2007年 | 1882篇 |
2006年 | 1768篇 |
2005年 | 1773篇 |
2004年 | 1714篇 |
2003年 | 1324篇 |
2002年 | 1351篇 |
2001年 | 1462篇 |
2000年 | 1034篇 |
1999年 | 893篇 |
1998年 | 626篇 |
1997年 | 614篇 |
1996年 | 621篇 |
1995年 | 484篇 |
1994年 | 363篇 |
1993年 | 295篇 |
1992年 | 261篇 |
1991年 | 221篇 |
1990年 | 170篇 |
1989年 | 213篇 |
1988年 | 4篇 |
1987年 | 6篇 |
1986年 | 5篇 |
1985年 | 2篇 |
1975年 | 1篇 |
1965年 | 1篇 |
排序方式: 共有10000条查询结果,搜索用时 31 毫秒
981.
目的构建Apoptin的原核表达载体,并制备抗原物质Apoptin融合蛋白。方法在获得Apoptin融合基因的基础上,成功构建了Apoptin的高效原核表达载体pET-28a( )-Apoptin,将该质粒转化至大肠杆菌E.coliBL21(DE3)受体菌中,以IPTG对其进行诱导表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳分析目的蛋白。结果转化有Apoptin的原核表达载体pET-28a( )-Apoptin的大肠杆菌E.coliBL21(DE3)经IPTG诱导后,经SDS-PAGE分析,在相对分子质量约17 000的位置出现目的蛋白条带,大小与Apoptin融合蛋白一致。结论Apoptin原核表达载体pET-28a( )-Apoptin能够表达出Apoptin融合蛋白,为进一步的Apoptin研究和制备Apoptin抗体奠定了基础。 相似文献
982.
幽门螺杆菌尿素通道蛋白基因UreI载体的构建、融合表达及纯化 总被引:2,自引:0,他引:2
目的构建幽门螺杆菌(H.pylori,Hp)尿素通道蛋白基因UreI的融合表达载体,并在E.coliBL21中表达,为进一步研究UreI的功能奠定基础。方法利用分子克隆技术以Hp DNA染色体为模板,扩增Hp UreI基因片段,将目的基因UreI与载体pET32a( )分别经kpnⅠ和HindⅢ双酶切,纯化,连接。筛选阳性重组载体,转化大肠杆菌BL21,以IPTG诱导表达pET32a( )/UreI融合蛋白。表达产物经Ni-NTA琼脂糖树脂纯化后,用SDS-PAGE及Western blot分析。结果经酶切、测序分析表明,插入的基因片段为Hp UreI编码基因,由585 bp组成,与GenBank相应菌株HP AM417 609序列完全一致,无碱基突变。经SDS-PAGE分析显示重组质粒pET32a( )/UreI在原核细胞中得到了高效融合表达,其重组融合蛋白分子量为130 ku,经Ni-NTA琼脂糖树脂纯化后,其纯度达95%以上,Western blot分析显示,该重组融合蛋白可被6-His鼠抗单克隆抗体所识别,具有良好的反应原性。结论成功地克隆和构建了原核表达载体pET32a( )/UreI,并在原核细胞中得到了高效融合表达。 相似文献
983.
目的观察氧化苦参碱对慢性肾脏病(CKD)患者血清转化生长因子-β1(TGF-β1)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)的影响,探讨其在肾间质纤维化发生发展过程中的作用和治疗价值。方法选取健康对照者10例、慢性肾脏病患者40例,根据肾小球滤过率(GFR)分为轻度肾损害组(GFR<90 mL/min.1.73 m2,CKDⅠ)、中重度肾损害组(GFR<60 mL/min.1.73 m2,CKDⅡ),再分层随机抽样,分为常规治疗组和氧化苦参碱组。利用双抗体夹心酶联免疫吸附法分别检测各研究对象治疗前、后血清TGF-β1、ColⅢ含量,采用t检验比较两组TGF-β1、ColⅢ水平的差异。结果氧化苦参碱组TGF-β1、ColⅢ含量显著低于常规治疗组(P<0.05)。结论氧化苦参碱可能通过下调TGF-β1、ColⅢ水平,减少ECM沉积,从而达到防止肾间质纤维化的作用。 相似文献
984.
目的设计构建携带NT4-Ant-Shepherdin[79-87]的cDNA融合基因的重组载体,为针对Survivin的靶向治疗奠定基础。方法应用非对称引物/模板法、PCR技术制备NT4-Ant-Shepherdin[79-87]cDNA片断,连接于pGEM-T-Easy载体,经克隆测序、酶切后与PBV220/NT4质粒连接;转化感受态细胞E.coliDH5α,亚克隆获得NT4-Ant-Shepherdin[79-87]融合基因。结果克隆出Ant-Shepherdin[79-87]基因,经酶切及测序证实结果正确;连接PBV220/NT4,经克隆、酶切,琼脂糖凝胶电泳证实获得321bp的NT4-Ant-Shepherdin[79-87]目的基因片断。结论通过分子生物学技术成功构建了携带NT4-Ant-Shepherdin[79-87]融合基因的重组载体,为进一步研究针对Survivin的靶向抗肿瘤作用奠定了基础。 相似文献
985.
苏渝 《广东交通职业技术学院学报》2008,7(1):102-104
在《机械(工程)制图》教学中,学生对基本体的变化及其在实际中的应用难以理解,文中介绍提高基本体教学效果的方法。 相似文献
986.
公路工程投标报价的探讨 总被引:1,自引:0,他引:1
白昌海 《广东交通职业技术学院学报》2008,7(4):22-24
从国内公路工程招投标工作的具体实践出发,探讨、分析投标报价,在帮助投标单位取得中标并获得更高施工利润的同时,希望能够与招标单位共同探讨:如何更加合理地开展投标报价,使其投标文件更具竞争性。 相似文献
987.
健胃愈疡颗粒对慢性胃炎伴幽门螺杆菌感染胃黏膜PAF、PS2的表达及对上皮细胞凋亡的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的观察健胃愈疡颗粒(JWYY)对幽门螺杆菌相关性胃炎胃黏膜乳癌相关肽(PS2)和血小板活化因子(plate-let activating factor,PAF)表达的变化,并分析其可能的作用机制。方法80例幽门螺杆菌感染慢性胃炎患者随机分为2组,治疗组42例给予健胃愈疡颗粒治疗,对照组38例给予西药三联药物治疗。应用胃镜下活检胃黏膜组织快速尿素酶和Warthin-Starry染色法检测幽门螺杆菌,应用Western blot检测PS2、PAF表达变化。应用末端转移酶介导的dUTP切口末段标记法(TUNEL)检测细胞凋亡。第4周复查胃镜。结果治疗组凋亡指数明显比对照组减少(P<0.05),治疗组总有效率高于对照组(P<0.05)。Western blot检测显示:JWYY颗粒可上调PS2并下调PAF的表达,而对照组对胃黏膜PS2和PAF的表达影响不大。结论健胃愈疡颗粒治疗幽门螺杆菌(Hp)相关性胃炎可能与杀灭Hp、上调PS2和下调PAF的表达来抑制细胞凋亡有关。 相似文献
988.
989.
990.
文章首先提出公路建设是国民经济发展的命脉,是现代社会文明进步的标志。其次论述发展公路事业的意义。最后探讨了解解决问题的基本思路和主要对策。 相似文献