抑癌基因p16、Rb的表达与胆囊癌预后的关系

目的　研究抑癌基因 p1 6及Rb的表达与胆囊癌预后的关系。方法　用SP免疫组化法同步检测 41例胆囊癌患者抑癌基因 p1 6及Rb的蛋白表达。 结果　p1 6与Rb蛋白表达阳性组生存率明显优于阴性组。结论　p1 6及Rb在胆囊癌的预后判定中具有重要价值 ,同步检测两者的预后价值优于单一检测。     

重组PCR——一种快速体外基因重组技术

重组PCR是一种用于体外进行基因重组的简单、高效、快速技术 ,在基因重组过程中 ,不受载体和待连接DNA片段内部自身酶切位点的制约 ,连接时不依赖于限制性内切酶和连接酶 ,具有传统的DNA重组技术无法比拟的优势。     

豚鼠心脏表面神经节丛SP、CGRP及VIP的免疫组织化学研究

目的　研究SP、CGRP及VIP在心脏表面 3个主要神经节丛 ,右心房神经节丛 (RAGP)、心房背侧神经节丛 (DAGP)及主动脉与肺动脉间神经节丛 (A PGP)的化学性质和定位分布。方法　应用免疫组织化学ABC法 ,对豚鼠心脏表面 3个主要神经节丛的神经元及神经纤维进行了SP、CGRP及VIP免疫组织化学染色及光镜观察。结果　在上述三个神经节丛内 ,未发现SP及CGRP免疫反应阳性神经元 ,但可见少量SP免疫反应阳性神经纤维分布 ,CGRP免疫反应阳性神经纤维数量较SP阳性纤维密集 ,尤其在A PGP更为明显 ;VIP免疫反应阳性神经元和神经纤维分布最为密集 ,交织成神经节丛。结论　豚鼠心脏表面主要神经节丛内确实存在SP、CGRP及VIP ,并且这 3种神经肽可能直接参与心肌细胞和心脏血管活动的调控。     

人工合成广谱细胞生长因子全基因

目的 利用ＰＣＲ介导的半酶促半化学法人工合成经改造的广谱细胞生长因子基因。方法 将基因依据其限制性内切酶切点分为左中右三个区段。化学合成若干寡核苷酸小片段,利用ＰＣＲ的方法介导寡核苷酸小片段之间的连接。最后将三条基因区段基因区段组合为完整的基因。结果 各区段及全基因的序列经测定与设计方案相符。结论 广谱细胞茵子基因的成功合成为将来的表达与应用研究创造了条件,同时证明ＰＣＲ介导的人工基因合成法是一种     

基于近似约简的基因选择方法

为了对癌症等疾病分型、诊断及进行病理学研究,利用基因微阵列数据识别疾病相关基因.考虑到了基因微阵列数据是典型的矛盾决策系统,在证明矛盾系统在近似分布集上是协调的这一事实的基础上提出了一套近似分布约简理论,讨论了不同近似分布集上约简之间的关系,提出了基于近似约简的基因选择方法.使用两组真实的基因表达数据对所提出的方法进行了验证.实验结果表明,该方法能在保持分类能力的情况下降低特征基因集的相关性,从而显著地减少特征基因的数量.     

TNFα基因-863位点单核苷酸多态性与宫颈癌以及HPV感染的关系

目的 探讨TNFα基因 863位点的单核苷酸多态性与宫颈癌以及HPV感染的关系.方法 采用模板介导的染料终止物掺入荧光偏振检测(TDI-FP)的方法对59例宫颈癌以及22例对照进行TNFα基因 863位点的单核苷酸多态性检测.结果 宫颈癌组的TNFα基因 863位点A等位基因频率(39.0%)较对照组(14.6%)明显升高(P<0.01,OR=2.673,95% CI:1.300～5.497);AA基因型在宫颈癌组和对照组中分别为15.3%和0,差异显著(P<0.05);CA基因型在两组中分别为47.5%和29.2%,差异显著(P<0.05);A等位基因频率在HPV阳性者与HPV阴性者之间没有显著性差异(P>0.05,OR=1.950,95% CI:0.840～4.527),但是在HPV阳性者中具有增高趋势(37.5%),高于HPV阴性者(19.2%).结论 TNFα基因 863位点A等位基因以及CA、AA基因型与宫颈癌的危险性升高有关,与HPV感染危险性无关.     

RNA干扰Bcl-2基因表达对人胆囊癌细胞株GBC-SD裸鼠移植瘤生长的影响

目的 探讨RNA干扰Bcl-2基因表达对人胆囊癌细胞GBC-SD裸鼠体内成瘤能力和移植瘤生长的影响.方法 本课题分为成瘤能力和治疗两个方面.成瘤能力:用针对Bcl-2基因小干扰RNA(siRNA)真核表达载体稳定转染的人胆囊癌细胞GBC-SD和人胆囊癌细胞GBC-SD分别制作裸鼠模型,观察移植瘤的生长情况,计算肿瘤成瘤率、生长体积、生长率.治疗实验:制作人胆囊癌细胞GBC-SD移植瘤模型,随机分为pSilencerTM-EGFP sh515组(实验组)、pSilencerTM-EGFP shCon组(空载体阴性对照组)和正常对照组.实验组用Bcl-2基因的siRNA真核表达载体多点注射于移植瘤周围,空载体阴性对照组用空载体多点注射于移植瘤周围,正常对照组不作处理,观察移植瘤的生长情况,计算肿瘤生长体积、生长率.6周后处死裸鼠,剥离瘤体组织进行称重,并采用免疫组化检测Bcl-2蛋白的表达.结果 ①成功地建立裸鼠人胆囊癌GBC-SD细胞的动物模型;②成瘤能力:人胆囊癌细胞GBC-SD组和Bcl-2 siRNA稳定转染细胞组成瘤率分别为100%、60%,瘤体平均体积分别为(1914.6±125.0)mm3、(629.7±78.9)mm3,平均生长率分别为45.58%、14.99%,瘤体重量分别为(2.24±0.33)g、(0.77±0.12)g,两组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);③治疗实验:实验组、空载体阴性对照组及正常对照组瘤体平均体积分别为(729.7±66.6)mm3、(1493.2±98.9)mm3、(1548.67±101.0)mm3,瘤体平均重量分别为(0.82±0.10)g、(1.68±0.21)g、(1.90±0.25)g,平均生长率分别为18.711%、38.286%、39.709%.实验组与空载体阴性对照组及正常对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05),而空载体阴性对照组与正常对照组比较无明显差异.结论 针对Bcl-2基因siRNA真核表达载体转染人胆囊癌GBC-SD细胞可以有效降低Bcl-2基因的表达,该基因沉默后肿瘤细胞增殖受到抑制,体内成瘤能力下降,瘤体生长减慢.     

精神分裂症ghrelin基因多态性与利培酮治疗前后血糖的变化

目的 观察精神分裂症受试者经利培酮单药治疗后血糖的变化及ghrelin基因Leu72Met多态性与血糖变化的关系.方法 66例精神分裂症受试者经利培酮单药治疗10周,于治疗前和治疗4周、10周时分别检测受试者的空腹血糖水平.PCL-RFLP检测受试者ghrelin基因Leu72Met多态性.结果 利培酮治疗期间,精神分裂症受试者的空腹血糖显著性增加,治疗4周和10周时与治疗前相比差异有统计学意义[(4.994±0.808)、(5.211±0.655)mmol/L vs. (4.589±0.832)mmol/L,F=13125.61,P<0.05];空腹血糖变化在性别间没有显著性差异(F=0.147,P>0.05),但女性血糖升高时间早于男性;空腹血糖水平变化与ghrelin基因多态性有关,Leu72等位基因携带者空腹血糖水平较高[(0.702±0.009)mmol/L vs. (0.677±0.008)mmol/L,F=4.269,P<0.05].结论 精神分裂症患者在利培酮急性治疗期间会有空腹血糖水平的升高,尤以女性更易发生;ghrelin基因Leu72等位基因是应用利培酮时高血糖的危险因素.     

Genotypic diagnosis of long QT syndrome by analysis of candidate genes

Objective To diagnose 6 LQTS families by genetic analysis. Methods A total aof 6 LQTS pedigrees with 43 family members were brought together for genetic diagnosis by using short-sequence tandem-repeat (SIR) markers or sequencing. Genomic DNA was extracted from blood samples by standard procedure. STR markers or KCNQ1, KCNH2 and SCN5A were amplified. The haplotype analysis for LQTS was performed. If the family got the negative haplotype analysis, the sequencing was performed. Results LQTS patients were always linkaged with the SCNSA gene in family 1. KCNH2 was linkaged with the disease in family 2 to 5.21 gene carriers were identified from these 5 families. A mutation (A561V-KCNH2) was only found in the proband of family 6 and an SNP (G1691A) was found in all the members of the family. Conclusion Genetic diagnosis can not only improve presymptomatic diagnosis,bnt also provide the basis for personal therapy and research on disease-causing mutations.     

Construction of expression vector for NT4-ADNF-9 fusion gene

Objective To construct the prokaryotic expression vector bearing fusion gene NT4-ADNF-9 and lay foundation for further study on genetic therapy of neuraseusory deafness. Methods By means of asymmetrical prince/ template, double stranded eDNA of activity dependent neurotrophic factor-9 (ADNF-9) was obtained, which included restriction enzymes sites on the two extremities. ADNF-9 eDNA was ligated to the signal and leader peptides of nenrotrophin 4 (NT4), and the fusion gene was named NT4-ADNF-9. Then it was suheluned into prokaryotic expression vector pBV220, and called pBV220/ NT4-ADNF-9. Results Evidences of DNA sequence analysis and restrtction enzymes digestion showed that we recombined ADNF-9 eDNA to the 3'terminal of the signal and leader peptides of NT4, and the fusion gene was subcluned into pBV220 successfully. Bioactivity of the products was proved that it could support the cell survival and neurite growth in the primary cultures of dorsal root ganglia (DRG) of embryonic day-8 cbicken neurons as compared to the control. Conclusion Prokaryotic expression vector pBV220/NT4-ADNF-9 can be constructed successfully and the bioactivtty is satisfactory.