E-cadherin基因启动子C-160A SNP与胃癌的相关性

目的探讨E-cadherin基因启动子区C-160A与胃癌易感性之间的联系。方法通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,分析150例健康人群(对照组)和150例胃癌患者(胃癌组)的E-cadherin启动子区-160位点SNP情况。结果胃癌组E-cadherin基因启动子区-160位点基因型和等位基因型分布与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。根据吸烟状况、上消化道恶性肿瘤家族史和术后病理分期分层分析发现,无论吸烟与否,在胃癌患者和健康个体中,E-cadherin-160基因型及等位基因型分布均有显著性差异(P<0.05),而无论吸烟状况、上消化道恶性肿瘤家族史和病理分期状态,E-cadherin-160基因型及等位基因型在胃癌患者中的分布未呈现出显著性差异(P>0.05)。结论 E-cadherin C-160A多态性基因型和等位基因型与胃癌的易感性相关,E-cadherinC-160A多态性与胃癌患者吸烟状况、上消化道肿瘤家族史和术后病理分期之间无相关性。     

力帆基因决定了力帆就是做汽车的——访力帆汽车销售有限公司总经理胡祺

我们的采访在胡棋的办公室里进行，因为我希望胡祺能多说一点非官方的东西，胡祺把采访提纲反扣在桌上，笑着将我一军说：“我可以不看提纲，我怎么说，取决于你怎么问，看你怎么挖掘。”大家都笑了。然后，我开始“挖掘”。[编者按]     

用动物模型定位、克隆复杂性疾病的易感基因:以类风湿关节炎动物模型为范例

基于复杂性疾病的临床异质性,或称表型异质性;遗传异质性,或称位点异质性;多基因的微效作用;异位显性(epistasis);拟表型(phenocopy);环境因素的作用等特点,鉴定复杂性疾病的易感基因是一种艰巨有时难以完成的任务。近交系动物遗传背景清晰,动物实验可控制环境因素的干扰,以及转基因动物在研究基因功能中独特的作用,应用动物模型为筛选鉴定人类复杂性疾病的易感基因提供了不可替代的工具。以大鼠类风湿关节炎模型为例,定位克隆易感基因步骤包括:①选择亲代近交系,建立关节炎模型;②分离育种,连锁分析、确定数量性状位点(QTLs);③建立Congenic系、窄化QTL区域;④位置克隆基因;⑤易感基因的功能验证。我们应用这一策略从朴日斯烷(Pristane)诱导的关节炎大鼠模型中已筛选出十余个控制关节炎发生发展的非MHC基因位点,在此基础上克隆的Pia4基因被鉴定为是中性粒细胞胞浆因子1(Ncf1)。说明该研究策略是完全可行的,并且可能发现新的功能基因或已知基因的新功能。     

头孢西丁耐药的葡萄球菌mecA基因检测及耐药性分析

目的对头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的可靠性进行评价,并分析头孢西丁耐药的葡萄球菌即MRS感染及耐药性情况,以指导临床合理用药。方法临床分离葡萄球菌310株,以PCR检测葡萄球菌mecA基因为判断MRS的标准,按美国国家临床实验室标准化研究所(CLSI/NCCLS)标准操作规程进行头孢西丁、苯唑西林纸片扩散法(K-B法)药敏试验检测MRS,同时检测MRS及甲氧西林敏感葡萄球菌(MSS)对10种常用抗生素的耐药性。结果在310株葡萄球菌中金黄色葡萄球菌198株,凝固酶阴性葡萄球菌112株,经mecA基因检测,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)为57.1%(113/198),耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)为62.5%(70/112);头孢西丁纸片扩散法检测MRSA的敏感性和特异性均为100%,检测MRCNS敏感性为98.6%,特异性为100%;除复方新诺明和万古霉素外,MRS对其余8种抗生素的耐药率明显高于MSS,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论头孢西丁纸片扩散法操作简便,结果可靠,可作为临床实验室检测MRS的常规方法;MRS的感染发生率及耐药性较高,且对各类抗生素多重耐药,需加强其耐药性监测。     

Diego血型基因在西安地区汉族人群中的频率分布

目的　研究人类红细胞Diego(Di)血型抗原在西安地区汉族人群中的分布频率。方法　采用PCR SSP技术对2 2 0例随机个体红细胞的Dia 和Dib 抗原分型进行检测。结果　检测到 3种表现型。其中 2 10例表现为Dia -b + ,9例表现为Dia+b + ,仅 1例表现为Dia +b - 。Dia 基因频率为 0 .0 2 5 0 ,Dib 基因频率为 0 .975 0。结论　西安地区汉族人群的Dib 抗原表达高于Dia,Dia -b - 的表现型未检测到     

丙型肝炎病毒非结构蛋白3全长基因的克隆和表达

目的克隆和表达丙型肝炎病毒(HCV)非结构基因NS3,为进一步研究其基因功能奠定基础。方法设计特异性引物,以HCV全长cDNA质粒为模板进行PCR扩增,获得全长NS3基因。将其插入克隆载体pMD18-Tvector中,经酶切、PCR及测序鉴定后,与表达载体pET32a重组,后转入BL21菌株并诱导表达。采用SDS-PAGE电泳及Western-blot检测NS3基因的蛋白表达水平。结果含有NS3的重组体构建成功并在大肠杆菌中表达。结论运用原核细胞基因工程技术成功构建和表达了HCV非结构基因NS3蛋白,为尽一步研究HCVNS3基因功能奠定了基础。     

基因表达谱芯片技术筛选乙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白基因C1反式调节基因

目的对未知功能基因C1转染人肝母细胞瘤细胞系(HepG2)后的基因表达谱进行分析,探索该基因的表达对肝细胞基因表达谱的影响及其可能的调节功能线索。方法以分子生物学技术构建C1的真核表达载体pcDNA3.1(-)-C1,以表达质粒pcDNA3.1(-)-C1转染HepG2细胞,空载体pcDNA3.1(-)为平行对照,制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA,逆转录为cDNA。应用基因表达谱芯片技术对差异表达的mRNA进行检测和分析。结果HepG2细胞经转染C1表达质粒后,有26条差异表达基因,其中24条基因表达水平下调,2条基因表达水平上调。这些差异表达的基因与细胞信号转导、凋亡、细胞增生分化及肿瘤的发生密切相关。结论应用基因表达谱芯片成功筛选了C1转染细胞后差异表达基因,为进一步阐明C1蛋白可能的生物学功能及乙型肝炎病毒核心蛋白的致病机制提供了理论依据。     

DXS6804基因座等位基因分型标准物的克隆制备及其群体遗传学研究

目的用分子克隆技术制备DXS6804基因座等位基因分型标准物,并用于中国云南普米族人群的群体遗传学研究,解决长期困扰短串联重复序列分型上存在的准确性和标准化问题。方法用PCR扩增出DXS6804基因座的各等位基因片段,PCR产物克隆后,DNA测序证实插入片段的大小和结构,按国际标准进行命名后,经扩大培养、扩增及再鉴定后,制备出该基因座的等位基因分型标准物,进行群体研究。结果调查了中国云南地区普米族人群基因座的基因型分布频率,发现DXS6804基因座两个分型标准物外等位基因。结论分子克隆技术是制备等位基因分型标准物的可靠方法,DXS6804基因座是一个适合我国法医学和群体遗传学分析的遗传标记。     

外源性p16基因对肾癌细胞周期及体外增殖的影响

目的　观察外源性 p16基因对肾癌细胞周期的影响及其对肾癌细胞的生长抑制作用。方法　利用携带人 p16基因的真核表达载体,采用脂质体介导法将其导入人肾癌细胞系 GRC- 1 中,观察其对瘤细胞的作用。结果　①免疫组织化学方法检测显示转染 p16基因的GRC 1细胞可显著表达 p16蛋白。②流式细胞仪检测证明,外源性 p16 基因可在肾癌细胞周期G1期到S期发挥抑制作用。③与对照组相比,转染 p16 基因的 GRC- 1 细胞生长明显受到抑制。结论　外源性 p16基因具有细胞周期特异性地抑制肾癌细胞生长的作用。     

丙型肝炎病毒NS3-NS4基因的表达及鉴定

目的　构建丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白NS3 NS4全长基因重组质粒并诱导表达 ,鉴定NS3 NS4蛋白的抗原性。方法　应用PCR技术从pUC19/HCV中扩增目的基因 ,构建重组表达质粒 ,进行原核表达 ,用SDS PAGE、ELISA技术对表达产物的抗原性进行鉴定。结果　成功构建、表达了重组质粒pBV2 2 0 /NS3 NS4 ,用 5 0份质控标准血清对表达蛋白质进行抗原性检测 ,与第二代诊断试剂相比 ,总符合率为 96 %。结论　全长NS3 NS4蛋白是一个优势免疫原性区 ,应该是HCVEIA诊断试剂的有效成分。