携带CIP2A shRNA重组腺相关病毒载体的构建及其鉴定

目的构建携带CIP2AshRNA重组腺相关病毒载体,制备靶向性沉默CIP2A表达的高浓度重组腺相关病毒。方法设计合成CIP2AshRNA,退火形成双链与pDC316-EGFP-U6质粒BamHⅠ和HindⅢ双酶切产物相连接构建形成质粒pDC316-EGFP-CIP2AshRNA,以鉴定正确的pDC316-EGFP-CIP2AshRNA克隆为模板PCR扩增EGFPCIP2AshRNA片段,EcoRⅠ和SalⅠ双酶切PCR扩增产物及pSNAV2.0质粒后进行连接形成重组质粒pSNAV2.0-EGFP-CIP2AshRNA,建立载体细胞株BHK/CIP2A-shRNA,采用AAV MaxTM包装系统大规模制备rAAV2-EGFPCIP2AshRNA并对其纯化及滴度测定。将rAAV2-EGFP-CIP2AshRNA感染肝癌细胞HepG2,利用空载病毒载体rAAV2-EGFP作对照,采用Real-time PCR及Western blot方法检测CIP2AshRNA基因沉默效果。结果携带编码CIP2AshRNA腺相关病毒载体质粒pSNAV2.0-EGFP-CIP2AshRNA经双酶切及测序鉴定,质粒构建正确;将重组质粒与辅助病毒HSV1-rc/ΔUL2共转染包装细胞BHK-21,成功制备重组腺相关病毒rAAV2-CIP2AshRNA,经测定纯化所得rAVV2病毒滴度为0.25×1012v.g./mL。筛选MOI值为1×105感染肝癌细胞HepG2,CIP2A mRNA及蛋白表达水平分别于感染后24h和48h与对照细胞相比出现明显下降。结论成功制备高滴度携带CIP2AshRNA重组腺相关病毒载体rAAV2-CIP2AshRNA。     

基于数值波浪水池的柔性浸没短板流固耦合研究

浸没于水中的柔性板壳可作为水下防波堤、波浪能装置等海洋工程结构的简化模型。论文基于Stokes五阶波浪和人工阻尼消波理论对软件ANSYS Fluent进行二次开发，在构建的数值波浪水池中，对柔性浸没短板的有限元结构模型进行双向流固耦合计算。改变板壳结构刚度、沉没深度等参数，分析短板的水弹性振动和波浪的透射系数。仿真结果表明，短板在特定的板壳结构刚度和沉没深度下会发生共振，并能有效反射波浪。搭建的双向流固耦合计算平台能对复杂的流固耦合现象准确地仿真，为研究柔性浸没短板与波浪相互作用提供可靠的工具。     

半刚性基层施工工艺及常见问题处理方法研究

前言由于半刚性材料存在的开裂等问题无法避免,而由基层开裂引起的面层开裂也是造成沥青面层早期损坏的主要因素之一,加上近年来我国许多高速公路由于半刚性基层发生了结构性破坏而进行的大规模近乎重修式的道路维修,目前有一种趋势认为半刚性基层已不适应当前我国公路发展的需要,尤其是随着国际上永久性路面或长寿命路面的理念的提出,半刚性基层也受到许多质疑,许多学者转而研究柔性基层。但半刚性基层具有的经济性好等优点确是柔性基层所不可比拟的,因此认为虽然半刚性基层开裂不可避免,但可以通过对水稳材料的特性和施工环节的质量控制等方法将基层的开裂控制在一个合理的范围内,进而保证基层的施工质量。     

柔性基层路面在西柏坡高速公路设计中的应用

工程概述 西柏坡高速公路是河北省省会石家庄和革命圣地西柏坡的快速直达高速通道，该项目地处平原和山前微丘区，采用设计速度为120km／h的6车道高速公路标准建设，路基宽度采用34．5m。     

深水大落差柔性吊挂双壁钢围堰封底施工

随着桥梁深水基础不断挑战最大水深,施工过程中的质量控制也是各方关注的重点。为保证封底混凝土施工质量,确保大水深条件下承台的无水施工,不同环境因素影响下各项工艺遇到的技术难题的处理尤为重要。以童庄河大桥吊箱围堰为课题,探讨深水、大水位差柔性吊挂系统水下封底施工技术各个关键环节与处理措施,确保质量控制在设计安全系数内。     

商务物流

正国务院同意成渝城市群发展规划1据中国政府网4月15日消息,国务院发布成渝城市群发展规划的批复,原则同意《成渝城市群发展规划》。批复指出,着力加强供给侧结构性改革,加快培育新的发展动能,以建设具有国际竞争力的国家级城市群为目标,全面融入"一带一路"和长江经济带建设,打造新的经济增长     

卡赛首站:玲珑轮胎队夺冠

6月3日,"陕汽杯2014全国超级卡车越野大赛"首场分站赛——河北涞水野三坡站酣战数日,终于在拒马河畔落下帷幕。玲珑轮胎队凭借冠亚军争夺战中的超常发挥,问鼎冠军,零公里润滑油队屈居亚军,涞水野三坡景区队则获得本站比赛的季军。零公里润滑油车队的孙佳、固铂成山轮胎队的盛祝辉、e途行车记录仪车队的孟庆波三人分别获得个人前三。     

10年10万辆,陕汽海外市场渐入佳境

陕汽在东南亚市场取得了重大突破,例如在越南市场销售重卡1 789辆,同比增长600%以上;在马来西亚重卡市场整体下滑17%的背景下,实现了118%的逆势增长。3月17日,"陕汽2016年国际商务年会"在厦门召开。此次会议上,陕西汽车控股集团有限公司董事长袁宏明肯定了2015年陕汽集团在海外市场取得的成绩,并规划了2016年发展战略,为"走出去"指明了方向;新任陕西重型汽车进出口有限公司总经理田超,则为大家进一步解释了陕汽海外市场的销售战略。     

重卡用户进“两惠” 欧曼连发三红包

"让广大人民群众有更多获得感"。"两会"期间,在国家派发政策"红包"之时,重卡用户也进入了"两惠"模式,福田戴姆勒以产品动力升级、服务更加贴心为切入点,派发"产品、服务、金融"三大超级红包,助力用户运营更高效,省心更省钱,为重卡用户带来真金白银的红包福利。