疫苗公平可及与知识产权全球治理:冲突调适与中国方案

疫苗作为一种特殊的商品，与市场激励的知识产权制度之间，存在明显的张力。为了促进疫苗的公平可及，世界卫生组织、世界知识产权组织、世界贸易组织等国际组织从数据开放共享、公共资金投入合作研发，以及知识产权豁免几个方面进行了知识产权政策调适。这些政策调整的背后体现了知识产权全球治理的价值冲突和路径分歧。我国应坚持以人类命运共同体为理念，将疫苗作为公共产品，在国际组织中主动参与知识产权全球治理话语权争夺，积极呼吁回归知识产权制度本源，推动知识产权全球治理向着更加公正合理的方向发展。     

HSV-1截短gB基因DNA疫苗的构建及初步鉴定

目的　为有效预防单纯疱疹Ⅰ型病毒 (HSV - 1 )感染 ,给多价DNA疫苗的构建奠定基础 ,构建表达截短HSV - 1 gB糖蛋白的DNA疫苗。方法　用PCR技术从HSV - 1基因组中扩增出编码HSV 1gB糖蛋白 1 - 5 1 7氨基酸序列的一段基因序列 ,通过 pGEM -T中介载体 ,将其插入到真核表达质粒pcDNA 3 1 (+)的CMV启动子下游。结果　构建的重组真核表达质粒可在动物体内正确表达目的基因 ,对HSV - 1病毒攻击具有免疫保护作用。结论　本研究对截短HSV - 1 gB基因DNA疫苗进行了初步的探索性研究 ,也为多价HSV 1DNA疫苗的构建奠定了基础。     

DNA核酸疫苗诱导小鼠免疫应答的作用

目的　研究DNA核酸疫苗诱导机体免疫应答的能力 ,为揭示其诱导机制奠定基础。方法　采用本室构建的单纯疱疹病毒 2型 (HSV 2 )糖蛋白D的真核表达质粒 pcDNA gD2免疫小鼠 ,通过ELISA法动态检测特异性抗体的产生及小鼠外周血Th1型细胞因子IFN γ、IL 2的水平同时进行病毒攻击实验。结果　pcDNA gD2和HSV 2免疫组小鼠从第 2周开始产生特异性抗糖蛋白D抗体 ,第 4～ 5周达到高峰 ;外周血清中IFN γ、IL 2水平明显高于阴性对照组。病毒攻击实验显示 2周内 pcDNA gD2和HSV 2免疫组小鼠无一只死亡 ,而阴性对照组小鼠全部死亡。结论　pcDNA gD2真核表达质粒可以诱导小鼠产生特异性体液免疫和Th1型细胞免疫 ,并具有免疫保护作用     

结核分枝杆菌Ag85A基因DNA疫苗的构建和免疫原性研究

目的　构建编码结核分枝杆菌蛋白Ag85A基因为基础的DNA疫苗。 方法　采用聚合酶链反应从结核杆菌H37Rv株基因组中 ,扩增出分泌蛋白Ag85A成熟蛋白的编码基因 ,用限制性内切酶消化后 ,插入克隆载体 pGEM TEasy中。经酶切鉴定与序列测定证实后 ,以亚克隆法构建于真核表达载体 pcDNA3.1的相应酶切位点。重组质粒肌注免疫小鼠 ,4周后用ELISA法检测抗体滴度。结果　结核分枝杆菌H37Rv株Ag85A成熟蛋白的编码基因经序列测定证实无突变 ;经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切鉴定证实克隆基因正确插入载体 pcDNA3.1。ELISA法检测几何平均滴度为 1∶10 0 0。结论　以Ag85A成熟蛋白的编码基因为基础的DNA疫苗的成功构建和表达 ,为进一步研究其在结核病与肿瘤防治方面的作用奠定了基础     

chk2反义寡核苷酸对顺铂作用下HeLa细胞凋亡的影响

目的观察宫颈癌HeLa细胞转染chk2反义寡核苷酸后,在顺铂作用下对凋亡的影响。方法采用MTT法检测不同浓度顺铂作用人宫颈癌细胞株HeLa 24、487、2 h后对细胞的生长抑制率。以脂质体为载体将chk2正义链和反义链转染HeLa细胞,用Western blot检测HeLa细胞中Chk2蛋白的表达,用流式细胞仪和TUNEL法检测顺铂作用后细胞凋亡率。结果顺铂对HeLa细胞有生长抑制作用,并有时间和浓度依赖性;反义chk2转染后可明显抑制Chk2蛋白表达(P<0.01),顺铂作用下细胞凋亡率明显高于转染正义链组(P<0.01)。结论反义寡核苷酸封闭chk2基因可增加HeLa细胞对顺铂的凋亡敏感性。     

CD25分子胞外段基因免疫应答中B淋巴细胞的变化及意义

目的 用鼠CD25分子胞外段基因疫苗免疫Balb/c小鼠,观察其诱导的体液免疫应答中B淋巴细胞的变化并探讨其意义.方法 用pcDNA3.1-CD25胞外段真核表达质粒分别在第0天、第10天和第20天肌肉注射免疫同系Balb/c小鼠,酶联免疫法(ELISA)检测抗CD25胞外段的抗体水平及亚型,FACS检测脾细胞中B淋巴细胞的比例变化及细胞因子IL-4、IL-10和IFN-γ的表达变化.结果 与对照组相比,CD25胞外段基因免疫组小鼠血清抗CD25抗体在免疫后逐渐升高,第30天达最高峰;抗CD25抗体主要以IgG1为主;免疫小鼠脾细胞中B细胞的比例变化不显著(P>0.05),但高分泌IL-4和IL-10(P<0.05),而低分泌IFN-γ(P<0.05).结论 CD25胞外段蛋白基因免疫中B细胞功能变化显著,这为后续深入研究体液免疫应答在T细胞疫苗中的作用提供了前期实验基础.     

WT1多肽疫苗对荷人单核细胞白血病SCID小鼠的抗肿瘤免疫效应

目的研究WT1多肽疫苗对荷人单核细胞白血病重度联合免疫缺陷(SCID)小鼠的抗肿瘤免疫效应。方法对SCID小鼠腹腔注射人外周血淋巴细胞(PBL)后24h,皮下接种THP1细胞,建立SCID小鼠荷人单核细胞白血病模型,随机分组,每组8只。空白对照组的疫苗成分为不完全弗氏佐剂,辅助T细胞表位组的疫苗成分为辅助T细胞表位和不完全弗氏佐剂,WT1多肽组的疫苗成分为WT1多肽、辅助T细胞表位和不完全弗氏佐剂。当肿瘤体积约为100mm3时,开始腹腔注射疫苗成分,疫苗接种14d后处死SCID小鼠。采用乳酸脱氢酶法检测小鼠脾细胞特异性CTL杀伤活性,肿瘤组织HE染色后镜下观察组织学特点,利用流式细胞仪检测外周血CD3~+/CD4~+T细胞、CD3~+/CD8~+T细胞及CD4~+CD25~+T细胞水平,应用ELISA方法检测血清中免疫球蛋白、IL-2、IFN-γ、TGF-β及IL-10水平。结果实验成功建立荷人单核细胞白血病SCID小鼠模型,各组中所有动物均成瘤;WT1组小鼠脾细胞对THP1细胞的CTL活性高于辅助T细胞表位组和空白对照组(P<0.05);WT1组小鼠的肿瘤平均体质量及体积均明显低于辅助T细胞表位组和空白对照组(P<0.05);WT1组肿瘤组织HE染色显示肿瘤细胞变性坏死,存活的肿瘤细胞减少;WT1组小鼠外周血CD3~+/CD4~+T细胞、CD3~+/CD8~+T细胞、IgG、IFN-γ和IL-2水平均明显高于辅助T细胞表位组和空白对照组(P<0.05);外周血CD4~+/CD25~+Treg细胞、TGF-β和IL-10水平均明显低于辅助T细胞表位组和空白对照组(P<0.05)。结论 WT1多肽疫苗可在荷人单核细胞白血病SCID小鼠体内产生抗肿瘤免疫效应,有效杀伤白血病细胞。     

基于windows可执行文件的免疫系统研究

主要提出了一种基于windows可执行文件的免疫系统模型（Portable Executable Immune System Model，以下简称PEISM）。这种免疫系统不同于以往的防病毒系统，其结构简单，易于实现。这种免疫系统的最大的一个特点是疫苗库的大小可以随时变化，疫苗库中的疫苗可以随时删除，并且不影响系统的功能。     

PRELIMINARY STUDY OF A NOVEL HUMAN PAPILLOMAVIRUS TYPE 16L1／E6-E7 CHIMERIC RECOMBINANT DNA VACCINE

Objective Preparations of HPV16 L1/E6 and L1/E7 prophylactic and therapeutic DNA vaccines. Methods The nucleotides within HPV16 E6 and E7 genes, which are responsible for viral transforming activity, were mutated by mage primer site-directed mutagenesis method. The correctly mutated E6 and E7 fragments were separately cloned into an eukaryotic expression vector pVAX1, together with HPV16 L1 gene, generating chimeric recombinants plasmids 1MpVAX1-L1E6, 2MpVAX1-L1E6, 1MpVAX1-L1E7, 2MpVAX1-L1E7 and 3MpVAX1-L1E7. CHO cells were transiently transfected with the individual DNA vaccines by calcium phosphate method. Target protein expressions in the extracts of the transfected cell lines were measured by ELISA and immunohistochemistry, with HPV16 L1 and E6 specific monoclonal antibodies. Results ELISA assays showed the P/N ratios in the cell extracts transfected with L1E6 and L1E7 plasmids were more than 2.1. Immunohistochemistry revealed brownish precipitant signal in cytoplasm and nuclei of the transfected cells. Conclusion Successful constructions of prophylactic and therapeutic DNA vaccine plasmids lay solid foundation for future animal experiment and clinical trial.     

白血病瘤苗对小鼠细胞毒性T淋巴细胞作用的研究

目的　探讨自制的一种白血病疫苗对C57BL/ 6小鼠细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)杀伤功能的影响。方法　建立白血病荷瘤小鼠模型 ,用自制的 3种不同的白血病疫苗进行预防或主动免疫治疗 ,用MTT比色法检测预防或治疗 2周、4周后小鼠CTL杀伤活性 ,并与对照组相比较。结果　①随着白血病细胞在小鼠体内的生长 ,小鼠的CTL杀伤功能受到严重抑制。②灭活肿瘤细胞 +IFA +细胞因子 (rGM CSF +rIL 2 +rIL 6)的肿瘤疫苗在提高小鼠CTL的杀伤功能方面 ,优于灭活肿瘤细胞 +IFA肿瘤疫苗 ,而仅含灭活肿瘤细胞的疫苗作用不明显。结论　灭活肿瘤细胞 +IFA +细胞因子 (rGM CSF +rIL 2 +rIL 6)的肿瘤疫苗可以激活以CTL为代表的特异性细胞免疫功能 ,此种疫苗在血液恶性肿瘤的特异性主动免疫治疗中很有潜力