反义HSP70真核表达载体的构建和在人喉癌细胞的表达

目的　进行促凋亡治疗喉癌实验 ,构建和鉴定携带反义HSP70 (heatshockprotein 70 )基因的真核表达载体。方法　将HSP70cDNA反向克隆入 pcDNA 3.1,构建CMV启动子控制的真核表达载体 pcDNA AHSP70 ,用酶切鉴定结果 ;应用该载体转染人喉表皮样癌细胞Hep 2 ,G4 18筛选阳性克隆 ;westernblot和免疫组化检测转染前后瘤细胞的HSP70的表达。检测转染前后瘤细胞的生物学性状。结果　获得 pcDNA AHSP70真核表达载体 ,HSP70反义RNA阻断了Hep 2细胞的HSP70的表达 ,经westernblotting和免疫组化证实 ,实验组瘤细胞不能表达或低表达HSP70 ,而对照和空载体组高表达HSP70。转染反义HSP70的真核表达载体的Hep 2细胞比空载体组和对照组的细胞生长缓慢 ,细胞周期可见实验组出现亚二倍凋亡峰 ,而空载体组没有。结论　本研究成功构建了反义HSP70真核表达载体并在人喉癌细胞得以表达。     

p16INK4/CDKN2在胆囊癌中的表达及临床意义

为明确p16基因及其产物在胆囊恶性肿瘤中表达的意义，用免疫组化ABC法对46例胆囊癌p16INK4／CDKN2表达进行检测，结果表明：p16INK4／CDKN2在良性病变中的阳性率高于胆囊癌（P＜0．05）。该蛋白的失活或缺失主要见于肿瘤的中、晚阶段，与胆囊外浸润和淋巴转移密切相关（P＜0．01），与肿瘤的病理类型及分化程度无关（P＞0．05）。检测p16INK4／CDKN2对临床正确地估计肿瘤的侵袭性、淋巴转移潜能及判断预后具有重要价值。     

GA路面结构技术要求和施工要点

GA-浇注式沥清为高等级面层结构首选的一种路面结构。阐述浇注式沥清的适用范围、材料选择要求、主要技术要求以及表面的处理方法。     

β-淀粉样蛋白增加基底前脑神经元对谷氨酸的易感性

目的探讨β-淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)与谷氨酸(Glu)联合应用,对原代培养的大鼠基底前脑神经元的作用。方法原代培养大鼠基底前脑神经元,应用形态学、MTT法结合ChAT免疫组织化学染色,分别观察Aβ25-35与Glu联合应用,对原代培养的基底前脑神经元存活率、形态学及ChAT免疫反应阳性神经元的影响。结果将100 nmol/L、1μmol/L Aβ分别和20μmol/L Glu联合用于培养的基底前脑神经元,在倒置显微镜下观察,细胞表面粗糙,立体感减弱,胞浆中出现深色颗粒,细胞肿胀或收缩;尼氏染色显示尼氏体减少;MTT检测显示神经元存活率明显下降,100nmol/L Aβ+20μmol/L Glu组与100 nmol/L Aβ组间,1μmol/L Aβ+20μmol/L Glu组与1μmol/L Aβ组间比较均具有统计学差异(P<0.05);ChAT免疫阳性神经元的灰度和截面积均减小。结论Aβ25-35可增加神经元对Glu神经毒性作用的敏感性,表明Glu在阿尔茨海默病发病中起着非常关键的作用。     

新型EGFP标记的杆状病毒转移载体的构建及EGFP的制备

目的构建可表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合蛋白的昆虫杆状病毒转移载体,利用Sf-9细胞表达、制备EGFP。方法用PCR法从pEGFP质粒中扩增EGFP基因,NcoⅠ/SalⅠ双酶切,克隆入杆状病毒转移载体NcoⅠ/SalⅠ酶切位点之间,获得pFB-EGFP质粒;转化E.coliDH10Bac,通过转座子Tn7的介导,获得重组杆状病毒Ac-EGFP;感染Sf-9昆虫细胞;利用激光共聚焦显微镜和SDS-PAGE观察并检测EGFP的表达。非变性法纯化EGFP。结果荧光显微镜和激光共聚焦显微镜证实感染的Sf-9细胞可表达EGFP;通过SDS-PAGE获得的EGFP,大小为27ku。结论重组pFB-EGFP载体具备表达EGFP的能力,为分子生物学研究提供了一种新型可表达EGFP融合蛋白的昆虫杆状病毒表达载体。     

纤维粘连蛋白及Ⅷ因子相关抗原在体外循环前后的测定及其意义

体外循环 (ＣＰＢ)可以导致机体凝血功能失调 ,除了血小板功能损害和数量减少及凝血因子消耗外 ,细胞外基质成分纤维粘连蛋白及Ⅷ因子相关抗原也在凝血机制中起重要作用。因此 ,探讨促凝物质Ｆｎ和Ⅷ Ｒ Ａｇ在体外循环前后的变化及临床意义很有必要。我们就这一问题进行了研究 ,报告如下。1　资料与方法　选取心脏直视手术患者 43例 ,手术在气管插管静脉复合麻醉下进行。包括室间隔缺损修补术2 2例 ,房间隔缺损 8例 ,法鲁氏四联症 4例 ,瓣膜手术 9例。使用美国Ｓａｎｓ70 0 0型人工心肺机和西京 90型鼓泡式氧合器。体外循环采用中度稀释 ,…     

基于渗透性能的道床脏污评估标准研究

在分析有砟轨道道床理论最大质量脏污率范围的基础上,利用自主研制的直径50cm渗透仪器,采用达西渗流试验,进行道床脏污率对道床渗透性能的影响研究,并提出基于渗透性能的道床脏污评估标准。结果表明:有砟轨道道床质量脏污率范围为18.9%~28.3%;道床的脏污程度按照渗透性能分成4个等级,小于或等于10%为轻度脏污,10%~17%为中度脏污,17%~25%为重度脏污,25%以上为严重脏污;当道床的质量脏污率小于或等于10%时,不需要清筛;当道床的质量脏污率在10%~17%范围内时,可以考虑进行清筛;当道床的质量脏污率在17%~25%范围内变化时,需要进行清筛;当道床的质量脏污率大于25%时,需要立即进行清筛。     

动态规划在轨道交通清分系统中的应用

城市一卡通和轨道交通路网化运营,迫切需要统一高效的清分清算中心.轨道交通清分系统承担各线路及公交卡之间的清分结算,实现轨道交通路网范围内的“一票换乘、统一清分票务收入、统一发行管理票卡、统一安全管理”.轨道交通线路大多是多方投资建设且周期较长,因此建立灵活准确的清分模型,满足用户的特定清分要求,公平准确地划分票务收益,...     

QS-650型全断面道砟清筛机提速动力转向架的研制

介绍了QS-650型全断面道砟清筛机120 km/h提速动力转向架技术改造,在设计过程中对提速动力转向架的零部件强度进行了理论计算,对配装提速动力转向架的QS-650型清筛机进行了线路动力学试验,结果表明该转向架具有较好的运用可靠性和整车动力学性能.     

EXPRESSION OF NESTIN AND GLIAL FIBRILLARY ACIDIC PROTEIN IN DIFFERENT PERIOD AFTER SPINAL INJURY IN ADULT RATS

Objective To study the expression of Nestin and glial fibrillary acidic protein (GFAP) in different period after spinal injury in adult rats. Methods Animal moels were created by artery clamp. Expression of Nestin and GFAP in different period ( 1,3,5days; 1-8 weeks) and different area( injury locus and its surrounding tissue ) after spinal injury were observed pathologicaly using immunofluorescence and LeicaQ5001W imaging processing system.Results There was expression of Nestin and GFAP in injured area 1 day after injury. The expression increased not only in in injured area but its sourrounding 3--7 days later and gradually got to peak value. As the time went on, expression of Nestin and GFAP dereased. Conclusion Spinal injury can induce the expression of Nestin. Nerve stem cell has response to spinal injury. There is positive correlation between expression of Nestin and hyperplasia of reactivity astrocyte. Nerve stem cell maybe invovled in the repair of central nervous system (CNS).