构建及鉴定携带角蛋白启动子和人乳头瘤病毒16E6/E7基因的重组腺病毒

目的利用AdEasy系统构建携带人角蛋白启动子的人乳头瘤病毒-16(HPV-16)E6/E7基因重组腺病毒,并通过RT-PCR方法检测E6/E7基因的表达。方法应用PCR方法从含有HPV-16全基因序列的质粒上扩增E6/E7基因,构建pCDNA3.1(-)-K14-E6/E7-polA载体,扩增、酶切获得K14-E6/E7-polA片段插入腺病毒穿梭载体质粒pAdTrack上,构建重组穿梭载体pAdTrack-K14-E6/E7-polA,线性化后与骨架载体AdEasy-1在细菌BJ5183内同源重组得到腺病毒质粒pAd-K14-E6/E7-polA,经人胚肾293细胞包装后得到重组腺病毒pAd-K14-E6/E7-polA。氢化铯(CsCl)梯度离心纯化病毒,提取病毒再感染后的293细胞总RNA,通过RT-PCR方法检测E6/E7基因的表达。结果通过同源重组的方法构建了腺病毒pAd-K14-E6/E7-polA载体,经酶切和测序鉴定该质粒构建成功。293细胞包装3d后观察到绿色荧光蛋白(GFP)表达,CsCl梯度离心纯化最终获得7.2×1010pfu/mL滴度的重组病毒;用该滴度病毒重新感染293细胞3d后,提取细胞总RNA,RT-PCR检测E6/E7有表达。结论利用新型腺病毒载体AdEasy系统可在短期内制备同时表达GFP和E6/E7的重组腺病毒pAd-K14-E6/E7-polA。这将为进一步研究HPV-16E6/E7基因功能及利用基因治疗女性宫颈癌奠定了基础。     

论神经元再生现象的科学认识论意蕴

本从神经元再生这一新的医学发现出发，阐述了神经元再生现象对以稳定神经结构为基础的科学认识论带来的挑战，并就它对人的大脑可塑性、人工智能的拓展及传统认知观念的更新所具有的意义进行了多角度的分析。论力图表明：神经科学的新发现必然会不断地粉碎陈旧的思维定势所设置的障碍，改变我们对世界的看法，推动哲学观念的变革。     

我国高等教育的现状分析及对策研究--从人的全面发展的目标定位审视

20世纪 90年代中期以来 ,高等教育改革在理论和实践两方面都取得了一定的成效。本文试图从人的全面发展的视角 ,在对其成效和基本走向进行梳理的基础上 ,指出已有的改革仍存在着与人的全面发展的目标定位不相符合的问题和倾向 ,具体表现为 :素质教育的形式化、表面化倾向 ;培养方式上过多的共性制约 ;忽视发展的可持续性 ;教育评价中的机械化、教条化倾向等 ,针对这些问题 ,提出了今后进一步推进改革的思路和对策     

实验性单纯疱疹病毒性角膜炎角膜神经损伤的观察

目的观察兔实验性单纯疱疹病毒性角膜炎(HSK),不同病程阶段的角膜神经组织损伤的显微及超微结构的改变。方法兔角膜刮痕接种HSVⅠ,多聚酶链反应技术检测兔角膜感染,分期进行角膜美蓝活组织染色,光镜及透射电镜下观察角膜神经的改变。结果感染HSK后第4天光镜下即出现角膜神经纤维稀疏、变细,中央神经网密度下降。至7～14d,神经损伤显著。第30天,仍未达到正常的神经网密度。电镜下,HSK后第4天,上皮内神经末梢轴膜不完整,轴浆部分溶解。第7～14d,神经损伤严重。第30天,神经轴膜仍不完整,轴浆内微管及小泡减少。结论HSK导致角膜神经纤维损伤及神经网密度下降,且角膜神经损伤恢复较慢。     

劳动异化:马克思人学理论的一个新视角

马克思在《巴黎手稿》中把异化劳动作为基本范畴来研究，既没有淡化对现实的人的研究，也没有离开人类生活与活动，这恰恰是研究现实的人的最佳切入点，马克思关于劳动异化学说揭明了人与自然界相互作用肪其现实的人的本质，为构建科学的人学理论体系提供了一个新的视角。     

浅析建设工程物资采购合同管理

论述了建设工程物资采购合同管理的内容,阐述了在工程建设当中,不应忽略建设工程物资采购合同管理的理由。     

穿刺式顶管在高等级公路施工中的应用

以长余高速公路通信人井排水管的施工为例,介绍了一种小口径顶管的特殊施工方法———穿刺式顶管法。工程实践表明,这种施工方法不但具有造价低、施工工艺简单、快速方便等优点,而且施工过程不破坏已建成的路基,也不影响其他施工作业,对保证工程质量和总体施工进度很有实用价值,可为今后高等级公路通信工程中人井排水设计与施工提供参考。     

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近十几年来，人口增长、建成区快速扩张以及经济发展使交通需求迅猛增长，导致我国许多大城市现有的客运站从布局和功能上都不能适应新的需求。对客运站布局模式对城市交通系统的影响进行了一定的理论分析。结合武汉市的空间发展，对现状及规划客运站点分布进行了分析评价。利用地理信息系统（GIS）的空间分析功能对新旧客运站点布局的出行效率进行了定量评估。同时，本文对实施该方案所面临的关键问题进行了一定的分析和探讨。     

秦巴山区孕妇人巨细胞病毒宫内感染与UL54、UL97基因突变的关系

目的探讨秦巴山区孕妇妊娠期人巨细胞病毒(HCMV)宫内感染与HCMV UL54、UL97基因突变的关系。方法采用PCR方法检测228对孕妇血清和新生儿脐血血清中的HCMV DNA,对HCMV DNA阳性者采用限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测HCMV UL54、UL97基因501、594及595密码子是否发生突变。结果①228例孕妇血清中HCMV DNA阳性者19例,阳性率为8.33%;新生儿脐血血清中HCMV DNA阳性8例,阳性率为3.51%。在19例HCMV DNA阳性孕妇中,其配对脐血阳性7例,HCMV宫内传播率为36.84%。②HCMVDNA阳性孕妇血清及其配对脐血阳性的标本中均未发现HCMV UL54、UL97基因501、594及595密码子发生突变。结论秦巴山区HCMV宫内感染的发生率较高,其发生与HCMV UL54、UL97基因501、594及595密码子突变无相关性,但不排除存在其他位点突变或其他形式基因异常导致病毒致病性改变的可能性。     

Cyclin D_1反义寡核苷酸对人黑色素瘤细胞周期的影响及对细胞增殖抑制作用的研究

目的　探讨cyclinD1反义寡核苷酸对人黑色素瘤的潜在治疗作用。方法　合成针对cyclinD1翻译起始部位序列的 2 0bp硫代反义寡核苷酸 (AS ODN)。采用流式细胞仪检测细胞周期的分布 ,用台盼蓝计数、集落形成抑制试验体外观察AS ODN对人黑色素瘤细胞增殖的影响。结果　cyclinD1反义寡核苷酸能增加G1期细胞百分比 ,降低S期细胞百分比 ,且明显抑制人黑色素瘤细胞生长和集落形成。结论　CyclinD1反义寡核苷酸能有效抑制人黑色素瘤细胞的增殖。