重组人松弛素-2对肝星状细胞增殖、Ⅰ型胶原合成及TGF-β_1与CTGF mRNA表达的影响

目的在细胞水平研究松弛素的抗肝纤维化作用,并初步探讨其分子机制,为肝纤维化的治疗提供实验依据。方法体外培养大鼠肝星状细胞(HSC-T6),分别用20、50、100ng/mL重组人松弛素-2(recombinant human relaxin-2,RLX-2)干预,采用噻唑蓝(MTT)比色实验检测RLX-2对HSC-T6增殖的影响,双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测对照组及RLX-2作用48h后的细胞培养基上清液Ⅰ型胶原水平,利用逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测药物干预48h的结缔组织生长因子(CTGF)、转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA表达情况。结果 RLX-2对HSC的增殖具有抑制作用,可降低HSCⅠ型胶原水平,RLX-2抑制HSC的CTGF mRNA表达,对HSC的TGF-β1mRNA表达无明显影响。结论 RLX-2可能通过抑制体外培养大鼠HSC细胞的增殖、Ⅰ型胶原及CTGF mRNA的表达而发挥抗大鼠肝纤维化作用。     

软基处理中水泥搅拌桩钻头结构改进及应用

传统的水泥搅拌桩设备钻头叶片少、层次单一,搅拌成桩效果不理想。结合泉州环湾快速路石狮连接线二期工程水泥搅拌桩工程案例,将传统钻头叶片4层8片结构改进为7层14片,叶片长度由均一的25 cm调整为长短不一的（15～25）cm组合,叶片间距从单一的20 cm调整为（13～22）cm,叶片角度由均一的平面调整为个别倾斜30°,充分发挥叶片多层次组合作用,提升钻头搅拌效率,确保土体同水泥浆混合充分、均匀,有效解决了传统成桩质量均匀性、完整性欠佳问题。     

市政管线入廊经济性分析

系杆拱桥成桥状态的合理与否直接关系到桥梁合理施工阶段的确定及成桥运营阶段的安全。本文通过对刚性支承连续梁法、弯曲能量最小法和相对刚度变化法在系杆拱桥合理成桥状态确定中的应用中的介绍,并通过某钢管混凝土系杆拱桥工程案例的有限元分析,对比分析了不同计算理论下的吊杆、系杆和拱肋内力和系杆位移状态,结果显示相较于其它两种方法,相对刚度变化法均能实现拱桥结构性能最合理状态。     

新技术在济南黄河三桥大直径超长钻孔灌注桩中的应用

济南黄河三桥是青银高速公路跨越黄河的一座特大桥,其直径2.0m、桩长大于115m的桩基有144根,为大直径超长钻孔灌注桩,技术含量高,施工难度大.施工中采用了大功率高性能钻机、钢筋镦粗直螺纹连接技术、气举反循环成孔技术、JJC-1D型灌注桩检测系统、混凝土双掺技术、灌注桩超声波检测技术、GPS定位技术等新技术、新材料、新产品、新设备,大直径超长钻孔灌注桩按计划、高质量、高标准完成.     

肺腺癌组织学亚型与EGFR突变及临床特征的关系

目的探讨肺腺癌患者组织学亚型与表皮生长因子受体(EGFR)突变状态及临床特征之间的关系。方法收集206例非小细胞肺癌标本,采用扩增阻滞突变系统(ARMS)法检测EGFR基因突变状态。手术标本的组织学亚型依据2004年WHO分类和2011年最新国际肺癌研究学会、美国胸科学会和欧洲呼吸学会(IASLC/ATS/ERS)分类方法进行分类。采用SPSS 17.0统计软件分析肺腺癌亚型与EGFR突变状态和临床病理特征之间的关系。结果 206例患者中EGFR的突变率为44.2%(91/206),其中女性(56.6%)、不吸烟患者(51.9%)具有更高的突变率。对122例混合性肺腺癌的组织学亚型分析发现,含非黏液性细支气管肺泡癌(非黏液性BAC)成分的腺癌比不含此成分的腺癌EGFR突变率更高(61.5%vs.38.6%,P=0.012),含有乳头状成分的腺癌倾向比不含此成分的腺癌突变率高,但差异无统计学意义(P=0.057);相反,含黏液性细支气管肺泡癌(黏液性BAC)成分的腺癌比不含此成分的腺癌EGFR突变率更低(13.3%vs.53.3%,P=0.004);依据2011年最新IASLC/ATS/ERS分类标准,EGFR突变率在乳头状为主型的腺癌中比浸润性黏液腺癌和实体型为主的腺癌高(P=0.057)。结论在肺腺癌中,EGFR突变状态与组织学亚型、性别、吸烟史相关。女性、不吸烟患者、混合有非黏液性BAC成分和以乳头状成分为主的腺癌都可以预测高EGFR突变率,而含黏液性BAC成分的腺癌突变率低。     

miR-126修饰的间质干细胞来源的外泌体对大鼠早期缺血性股骨头坏死的影响

目的观察微小RNA-126(miR-126)修饰的间质干细胞来源的外泌体(MSC-126-Exos)对类固醇激素诱导的早期缺血性股骨头坏死(SANFH)的治疗作用,并探讨其潜在机制。方法分别以80 mg/L MSC-126-Exos和MSCExos处理人脐静脉内皮细胞(HUVECs)并设PBS处理组为对照,MTT、划痕实验以及成管实验分别观察各组细胞增殖、迁移和毛细血管网的形成,Western blot检测HUVECs中血管内皮生长因子A(VEGFA)的表达。构建大鼠SANFH模型,分别注射等量MSC-126-Exos、MSC-Exos和PBS,6周后,通过对股骨头区域组织进行CD31免疫荧光染色及其Micro-CT扫描,观察股骨头血管数量及骨质情况。结果体外实验中,MSC-126-Exos组的HUVECs的增殖、迁移和成管较MSC-Exos组显著增强,且VEGFA的表达水平也上调,差异有统计学意义(P<0.05)。在体实验中,MSC-126-Exos组大鼠股骨头坏死区CD31免疫荧光标记的血管数量较MSC-Exos组和模型组显著增多(P<0.05),且股骨头坏死区Micro-CT扫描显示MSC-126-Exos组的小梁厚度(Tb.Th)、小梁数(Tb.N)和每组织体积骨量(BV/TV)值也显著高于MSC-Exos组和模型组,而小梁分离度(Tb.Sp)显著降低(P<0.05)。结论 MSC-126-Exos可以促进内皮细胞功能,改善股骨头区的血运从而增强骨质沉积,对大鼠SANFH具有显著的治疗效果。     

TGF-β2诱导晶状体上皮细胞凋亡的机制

目的探讨晶状体后囊膜混浊(posterior capsular opacification,PCO)过程中转化生长因子-β2(transforming growth factorβ2,TGF-β2)诱导晶状体上皮细胞(human lens epithelial cell,HLEC)凋亡的机制。方法用不同浓度TGF-β2(0、0.1、1、10μg/L)处理HLEC后,Western blot检测TGF-β2诱导的线粒体途径依赖的细胞凋亡相关蛋白表达;流式细胞仪检测5μg/L TGF-β2诱导细胞凋亡的具体形式,以及5μg/L TGF-β2处理细胞36h对细胞周期的影响。结果 TGF-β2可明显增加Caspase3的表达(P<0.001),促凋亡蛋白Bax与抑凋亡蛋白Bcl-2的表达比例失调(P<0.001)并呈浓度依赖性,激活内源性线粒体途径的Bax/Bcl-2-caspase3通路的凋亡。5μg/L的TGF-β2可以诱导HLEC发生凋亡(P<0.05),处理细胞36h后可导致G1/S周期阻滞。结论 PCO过程中伴随TGF-β2诱导的线粒体途经的细胞凋亡,可能参与了PCO的形成过程,将为PCO发病机理及药物开发提供新思路。     

蛋白酶体抑制剂硼替佐米对MC3T3-E1细胞成骨分化和增殖的影响

目的观察蛋白酶体抑制剂硼替佐米(bortezomib)对于小鼠MC3T3-E1细胞系成骨分化、增殖和凋亡的影响。方法用不同浓度梯度的硼替佐米作用于培养的MC3T3-E1细胞,利用茜素红染色检测成骨分化,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期和凋亡,Western blot分析细胞周期相关蛋白变化。结果①硼替佐米剂量依赖性地抑制MC3T3-E1细胞的增殖活力[IC_(50)=(7.37±0.34)nmol/L];②低浓度硼替佐米能够诱导MC3T3-E1细胞发生成骨分化;③高浓度硼替佐米对于MC3T3-E1细胞表现出明显的毒性,诱导细胞凋亡发生;④低浓度硼替佐米所诱导的MC3T3-E1成骨分化进程中,伴随有明显的G_0/G_1期细胞周期阻滞。Western blot检测发现,G_0/G_1期细胞周期阻滞与细胞周期素依赖性激酶CDK2和CDK4表达水平降低,以及细胞周期蛋白内质网应激活化引起的细胞周期抑制蛋白p21Cip1和p27Kip1的表达上调有关。结论低剂量蛋白酶体抑制剂硼替佐米能够诱导成骨前体细胞MC3T3-E1发生成骨分化,并引起G_0/G_1期细胞周期阻滞介导的增殖抑制。     

血管内皮生长因子基因多态性与陕西汉族阿尔茨海默病的相关性研究

目的旨在探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因8个单核苷酸多态性(single-nucleotide polymorphism,SNP)位点与陕西汉族阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)的相关性。方法选取陕西汉族AD患者214名(疾病组)及健康体检者(对照组)249名提取基因组DNA,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术对9个SNP的基因型进行分型,采用SPSS 16.0及Haploview 4.2软件统计分析各基因型、等位基因及单倍型频率在病例组及对照组中的差异。结果 VEGF基因rs3025039(3非翻译区)基因型及等位基因频率分布在AD组及正常对照组差异有统计学意义(P<0.05)。AD组T等位基因频率显著高于正常对照组(P=0.008,OR=1.527,95%CI=1.116~2.088)。连锁不平衡分析发现2个单倍型高度连锁(单倍型1:rs699947-rs1570360-rs2010963;单倍型2:rs3024997-rs3024998-rs3025006)(D>0.9)。然而,其单倍型频率在AD组及正常对照组均无统计学差异(P>0.05)。结论 VEGF基因功能区rs3025039位点可能与AD有关,携带有rs3025039T等位基因的个体可能更容易患AD。     

胆囊癌相关成纤维细胞分泌IGFBP3促进淋巴内皮细胞的迁移

目的探讨胆囊癌相关成纤维细胞(CAFs)对淋巴内皮细胞(LECs)迁移能力的影响及相关分子机制。方法通过酶消化法提取胆囊癌的原代CAFs和正常胆囊的纤维细胞(NFs),收集相应细胞上清液(condition medium, CM),采用半定量蛋白因子芯片和ELISA实验筛查两者CM中IL-6、类胰岛素生长因子结合蛋白3(IGFBP3)等常见细胞因子水平。通过免疫组化检测胆囊癌和癌旁组织中α-SMA(CAFs标志物)和IGFBP3表达,分析其与患者临床病理特征的关系;培养LECs细胞,根据不同的处理方法将其分为无血清培养基组(Control组)、CAF-CM共培养组、NF-CM共培养组、IGFBP3组和CAF-CM+IGFBP3抑制剂(2-Deoxy-D-glucose)组,Transwell迁移实验和划痕实验检测各组中LECs迁移能力的变化;Western blotting检测不同处理条件下LECs的E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白的表达。结果蛋白因子芯片和ELISA检测发现CAF-CM较NF-CM中IGFBP3水平明显升高,免疫组化染色显示胆囊癌组织α-SMA高表达,且与淋巴结转移、TNM分期和IGFBP3高表达存在明显正相关。CAF-CM组中的IGFBP3可明显促进LEC迁移,并上调N-cadherin、Vimentin表达;下调E-cadherin表达;采用2-Deoxy-D-glucose处理后,可以逆转CAF-CM对LECs迁移和相关蛋白的表达变化。结论 CAFs通过分泌IGFBP3影响EMT过程,从而促进LEC细胞迁移。