Construction and characterization of hGM-CSF-expressing K-562 cell line

Objective The whole process of vaccine preparation is time-consuming and technically challenging. Here the hGM-CSF-engineered K-562 cell line was constructed to simplify tumor vaccine preparation process. Methods The eukaryocyte expressing plasmid pcDNA3. 1/GM-CSF was first constructed and its accuracy was verified through sequencing. The pcDNA3. 1/GM-CSF was transfected into COS-7 cells to verify GM-CSF expression and cytokine activity using TF-1 cell line. Then the plasmid was transfected into K-562 cell line using liposome method, and was selected under G-418 and sub-cloned by limiting dilution. GM-CSF product from the monoclone GM-CSF-K-562 cell lines was quantified using ELISA method. Results We successfully constructed the hGM-CSF eukaryocyte expressing plasmid and hGM-CSF expressing K-562 cell line. Conclusion The construction of K-562/GM-CSF line will simplify the preparation of tumor vaccine, thus facilitating the application of tumor vaccination therapy in clinical application.     

Graves眼病炎性活动期与静止期血清sICAM-1水平的变化

目的　研究可溶性细胞间黏附分子 1(solubleintercellularadhesionmolecule 1,sICAM 1)在Graves眼病 (Gravesophthalmopathy,GO)炎性活动期与静止期的水平差异及其与各项甲状腺功能指标的关系。 方法　选择来我院就诊的GO炎性活动期与静止期 (根据临床表现及 1992年AdHoC委员会推荐的评分标准划分 )患者各 2 0人 ,Graves病无眼病患者 2 0人及健康查体者 2 0人 ,分为四组 ,抽取空腹静脉全血 ,测血清sICAM 1、FT3、FT4、TG、TM ,各组间进行比较。并分析各组sICAM 1与FT3、FT4、TG、TM的相关关系。结果　①GO炎性活动期、静止期及无眼病Graves病患者血清sICAM 1均明显高于正常对照组 ,具有统计学差异。Graves眼病炎性活动期患者sICAM 1水平最高 ,与静止期GO患者及Graves病无眼病患者相比有统计学差异。②前三组各组内sICAM 1与FT3 、FT4成直线相关关系 ,与TG、TM成直线相关关系。③Graves眼病炎性活动期患者sICAM 1与GO评分成正相关。结论　Graves眼病炎性活动期、静止期及Graves病无眼病患者血清sICAM 1水平明显高于正常 ,以Graves眼病炎性活动期为最高 ,且与FT3、FT4、TG、TM成直线相关关系。因此血清sICAM 1水平可作为反映Graves眼病活动性评判的免疫指标 ,长期监测sICAM 1可预示Graves病进展为临床活动     

去甲斑蝥素在体外对白血病细胞核酸和蛋白质合成的影响

应用细胞培养、放射性核素示踪技术研究了去甲斑蝥素对白血病细胞的作用。结果表明，去甲斑蝥素对人早幼粒白血病ＨＬ－６０细胞株ＤＮＡ和蛋白质合成有抑制作用，对ＲＮＡ合成未见明显影响；对正常人骨髓细胞ＤＮＡ合成无抑制相反有一定促进作用。     

延髓头端腹内侧区甩尾相关细胞在肌梭传入镇痛中的作用

目的　探讨延髓头端腹内侧区 (rostralventromedialmedulla ,RVM)甩尾相关细胞在肌梭传入镇痛中的作用。方法　采用辐射热照射大鼠尾部引起甩尾反射 ,同步记录RVM细胞放电和甩尾反射的方法 ,观察琥珀胆碱 (succinyl choline,SCh)诱发的肌梭传入活动对甩尾相关细胞放电和甩尾反射的影响。结果　①RVM内的细胞依据其放电活动与甩尾反射的关系可区分为三类 ,即 :在甩尾动作发生前 4 0 0ms左右放电骤停的off cell,在甩尾动作发生前 2 0 0～6 0 0ms放电骤增的on cell,以及与甩尾反射没有关系的N cell。②股动脉注射SCh引起的肌梭传入活动可使绝大多数的off cell发生兴奋 ,表现为放电频率增加 ,“撤”反应延迟出现或不出现 ;可使绝大多数on cell发生抑制 ,表现为放电频率减小 ,“给”反应延迟出现 ;同时使甩尾的潜伏期明显延长。③肌肉注射布比卡因破坏肌梭后 ,股动脉注射相同剂量的SCh ,对off cell的兴奋作用较未注射组明显降低 (P <0 .0 1)。结论　SCh诱发的肌梭传入可使RVM内off cell兴奋 ,on cell抑制 ,提示RVM在肌梭传入镇痛中起着重要作用     

人工冬虫夏草菌粉提高大鼠肝脏保存质量的实验研究

目的　探讨人工冬虫夏草菌粉提取液对大鼠肝脏低温保存损伤的保护作用。方法　将一定剂量的虫草提取液加入乳酸林格液内,分别低温保存大鼠肝脏6、12 h后,再灌注30 min。通过高压液相色谱法(HPLC)检测肝脏组织内的ATP、ADP、AMP含量,测定再灌注流出液内的AST、ALT、MDA及ET含量。并切取肝脏标本,光镜及电镜观察肝组织损伤情况。结果　于保存6 h后,实验组AST、ALT、MDA和ET均低于对照组,但无统计学显著差异(P>0.05)。光镜下除轻度细胞水肿外,无其他明显病理改变;保存12 h后,实验组流出液ALT、MDA及ET含量明显低于对照组(P<0.05),肝脏组织内ATP、TAN及AEC显著高于对照组(P<0.01)。实验组细胞凋亡指数显著低于对照组(P<0.01)。实验组和对照组在光镜及电镜下的超微结构改变亦有明显差异。结论　人工冬虫夏草菌粉提取液可以显著提高保存肝脏的质量。     

芪丹通脉片对急性缺血再灌注大鼠心肌信号转导系统PI3K/Akt和Erk1/2的影响

目的观察中药芪丹通脉片对缺血再灌注大鼠心肌梗死面积、细胞凋亡和细胞信号转导系统中磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、丝(苏)氨酸激酶(Akt)和细胞外信号调节激酶(Erk1/2)的影响。方法雄性SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组(模型组)和芪丹通脉片预处理组。生理盐水或芪丹通脉片灌胃7 d后,大鼠麻醉开胸,结扎冠状动脉前降支40 min,再灌注4 h。伊文氏兰和TTC染色测定心肌梗死范围,计算梗死面积(IS)与缺血区面积(AAR)的比值(%,IS/AAR);TUNEL方法定性和定量检测心肌细胞凋亡指数;Westernblot测定信号蛋白的表达。结果芪丹通脉片组的心肌梗死范围明显小于模型组[(28.8±8.4)%vs.(49.1±10.3)%,P<0.01];其心肌细胞凋亡指数亦显著低于模型组[(11.6±2.3)%vs.(20.3±4.5)%,P<0.01];而其Akt和Erk1/2的磷酸化表达水平增加,与模型组比较分别增加了2.5倍和1.9倍(P<0.01,P<0.05)。结论芪丹通脉片能够抑制缺血再灌注所致的心肌细胞损伤,并影响生存信号通路PI3K/Akt和Erk1/2的活化水平。     

地塞米松对重症急性胰腺炎胰腺细胞凋亡的影响

目的　探讨地塞米松对大鼠重症急性胰腺炎胰腺细胞凋亡及凋亡调控基因bax蛋白表达的影响。方法　 3 2只SD大鼠以 40g·L-1牛磺胆酸钠诱导建立急性胰腺炎模型 ,随机分为治疗组和非治疗组各 16只 ,对照组 6只。各组术后 6h、12h分别行TUNEL法染色检测胰腺细胞凋亡 ,免疫组化SP法检测胰腺组织中bax蛋白的表达。结果　治疗组大鼠 12h生存率明显高于非治疗组。HE染色显示治疗组胰腺组织炎症较非治疗组明显减轻。TUNEL染色显示治疗组 6h、12h胰腺细胞凋亡指数明显高于非治疗组 (P <0 .0 1)。免疫组化显示bax基因蛋白表达治疗组 6h、12h表达阳性率显著高于非治疗组 (P <0 .0 1) ,正常胰腺组织未见bax基因蛋白表达。结论　地塞米松治疗急性胰腺炎的机制可能与通过诱导胰腺细胞凋亡有关。     

慢性粒细胞白血病树突状细胞的体外无血清培养及杀瘤效应

目的　建立慢性粒细胞白血病 (CML)树突状细胞 (DCs)体外无血清培养体系。方法　小牛血清 (FCS)、无血清 (SFM)及自体血清分别培养CML病人CD34 + 细胞或单个核细胞 (MNCs) ,以SCF、GM CSF、TNF α、IL 4 (A)与GM CSF、TNF α、IL 4 (B)两组不同的细胞因子作对照。结果　CML DCsHLA DR高表达 ,CD80、CD83和CD86表达比例不高 ,异体混合淋巴细胞反应能力不强。SFM同FCS体系相比无显著差异。 5例CML DCsPh染色体比例与培养前MNCsPh染色体比例基本吻合 ;同时以CML DCs同自身T细胞、自体Ph+ MNCs共孵育 ,测其杀伤率为 (38.5± 6 .5 ) %。结论　CML DCs携带Ph染色体 ,能刺激自体T细胞杀伤自身白血病细胞 ,但需进一步改善其功能。     

人胎胰组织培养后的B细胞功能测定及电镜观察

本文报道了经Ham's F_(10)培养的人胎胰组织胰岛细胞功能状况及扫描电镜检查所见.发现培养物的胰岛素和C 肽分泌功能从被培养后的第3天开始增强,第7天后减弱,第10天后明显低落,分泌曲线呈抛物线型。在其分泌功能旺盛的3～7天期间,电子显微镜下可见群集的胰岛B 细胞颗粒占总体的3/4,也可见散在的胰岛A 细胞.7天以后的功能衰退期,则见A、B 细胞分泌颗粒电子密度减低,影像模糊,难以辨认.