免疫抑制因子对宫颈癌患者来源的树突状细胞的体外作用

目的　观察白细胞介素 10 (IL 10 )及血管内皮生长因子 (VEGF)对宫颈癌患者来源的树突状细胞 (DC)的体外抑制作用。方法　培养宫颈癌患者自体DC的小牛血清体系中加入粒 -巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)、IL 4和肿瘤坏死因子 α(TNF α) ;流式细胞术检测免疫表型 ;甲基噻唑蓝法 (MTT)法检测异体混和淋巴细胞反应 (MLR)和细胞毒实验 ;酶联免疫吸附实验 (ELISA)法检测培养细胞上清液中IL 10和VEGF含量。结果　 10例宫颈癌患者外周血单个核细胞培养 10d后 ,获得 (40± 2 0 ) %的DC ,此类DC共刺激分子的表达减低 ,刺激自体T细胞杀伤癌细胞能力不足 ,分泌IL 10及VEGF的含量却升高。结论　IL 10和VEGF抑制了宫颈癌患者自体DC的功能。     

基于分类回归树的中国健康成年男性血清CA19-9参考值冷热点联合空间分布

目的为临床制定中国健康成年男性血清糖类抗原19-9(CA19-9)参考值统一标准提供科学依据。方法建立9 382例分布于全国64个市县的健康成年男性血清CA19-9参考值数据库,结合主成分分析、变异系数、相关分析进行地理指标体系降维并建立分类回归树模型;依据2 322个观测数据点绘制血清CA19-9参考值冷热点联合空间分布图。结果血清CA19-9参考值空间分布总体表现为南高北低,东北地区的吉林、辽宁等地高于中东部地区。热点多分布于南部地区,冷点多分布于北部地区。结论健康成年男性CA19-9参考值空间分布存在差异性,临床诊断需考虑地域性差异。     

siRNA下调AEG-1基因表达对胶质瘤细胞血管拟态形成的影响

目的探讨下调星型细胞上调基因-1(AEG-1)表达对胶质瘤细胞血管拟态(VM)形成的影响及其可能的机制。方法利用siRNA下调U87胶质瘤细胞中AEG-1表达,通过体外构建胶质瘤VM模型,研究下调AEG-1表达对胶质瘤VM形成的影响;Real-time PCR及Western blot分别检测AEG-1表达下调对U87细胞中血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-2(MMP2)mRNA及蛋白表达的影响;免疫荧光法检测AEG-1表达下调对VM模型中VEGF及MMP2表达的影响。结果 siRNA下调AEG-1表达能显著降低U87细胞体外VM的形成(P<0.01),同时下调AEG-1基因能够显著抑制U87细胞及其构成的VM中VEGF及MMP2的表达(P<0.01)。结论 siRNA下调AEG-1表达能显著抑制胶质瘤细胞VM的形成,其部分机制可能是通过下调VEGF及MMP2表达实现。     

辛伐他汀通过调控PI3K/AKT通路介导的EMT参与放疗诱导的食管癌细胞耐受

目的明确辛伐他汀对食管癌细胞放疗耐受性、上皮间充质细胞转化(epithelialmesenchymal transition,EMT)发生的影响及其作用机制。方法食管癌细胞经辛伐他汀(5μmol/L)预处理8h后进行X线放射处理,克隆平板形成实验测定细胞生存分数;MTT检测放疗后细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡;试剂盒检测caspase-3活性;Western blot检测对PI3K/AKT通路的影响。结果辛伐他汀预处理降低放疗细胞的克隆存活分数(P<0.05),放疗后细胞的增殖能力进一步降低(P<0.05),而细胞的凋亡率及caspase-3活性上调(P<0.05)。此外,辛伐他汀增加6Gy细胞处理组中上皮标记物E-cadherin的表达,同时抑制间充质标记物N-cadherin及Vimentin的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。机制分析证实,放疗后细胞中p-AKT的表达水平明显增加,而辛伐他汀预处理可明显抑制p-AKT的表达。当用PI3K/AKT通路激动剂IGF-1预处理后,辛伐他汀介导的放疗细胞增敏效应及逆转放疗细胞EMT发生的能力明显减弱(P<0.05)。结论辛伐他汀可以阻断PI3K/AKT通路的活化,抑制放疗引发的食管癌细胞EMT发生,从而增加食管癌细胞的放疗敏感性,提示本研究将为食管癌放疗增敏的临床研究提供新的策略。     

PM2.5对呼吸系统疾病的影响及其机制的研究进展

PM2.5的化学成分极其复杂,可携带部分病毒和病菌,富集很多有毒有害物质。呼吸系统是PM2.5暴露和作用的主要靶器官,呼吸系统疾病种类繁多,病因复杂,结局较难把握。已有报道,PM2.5对呼吸系统阻塞性、感染性、过敏性疾病及肿瘤等发生发展有重要影响,其机制可能与氧化应激、炎症反应、基因毒性、细胞凋亡、细胞自噬及细胞周期紊乱等相关。     

shRNA干扰LGR5对HeLa细胞增殖及耐药性的影响

目的探讨富含亮氨酸重复序列G-蛋白偶联受体5(LGR5)基因在HeLa细胞增殖及耐药性中的作用及可能机制。方法采用shRNA技术干扰LGR5表达,构建LGR5干扰(shLGR5)的HeLa细胞,并设对照组(shCon)。采用细胞计数、平板克隆以及MTT实验观察shLGR5对HeLa细胞增殖及耐药性的影响;采用Western blot检测LGR5、β-catenin在HeLa细胞中的表达。结果成功构建了LGR5干扰的HeLa细胞系;与shCon组相比,shLGR5组细胞生长速度及克隆形成率明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01);shLGR5组与shCon组HeLa细胞对顺铂的耐药性差异亦具有统计学意义(P<0.01);且干扰LGR5抑制HeLa细胞中β-catenin蛋白的表达。结论 LGR5基因在HeLa细胞增殖及耐药性中有重要作用,且与Wnt/β-catenin通路有关。     

成年大鼠窦房结活细胞分离方法的建立及钠通道各亚型表达的观察

目的建立急性分离成年大鼠窦房结细胞的方法,了解其形态结构特点,系统观察钠通道各亚型在窦房结细胞的表达情况,为进一步研究钠通道在窦房结功能中的作用及分子机制提供依据。方法取成年大鼠窦房结组织,Ⅱ型胶原蛋白酶联合蛋白酶酶解分离活性窦房结细胞,行钠通道亚型Nav1.1、Nav1.2、Nav1.3、Nav1.5、Nav1.6、Nav1.7、Nav1.8、Nav1.9的免疫荧光染色,激光共聚焦显微镜观察各亚型在窦房结细胞的表达。结果在急性分离的窦房结细胞中观察到梭形、弧形、细长弯曲形等细胞形态,以梭形为主,细胞横纹清楚、活性好,可存活6~8h;钠通道Nav1.1、Nav1.5、Nav1.6、Nav1.7、Nav1.8、Nav1.9在大鼠窦房结细胞呈阳性表达,Nav1.2、Nav1.3表达呈阴性。结论Ⅱ型胶原蛋白酶联合蛋白酶酶解分离方法是可靠的成年大鼠活性窦房结细胞分离方法,钠通道各亚型在成年大鼠窦房结细胞呈差异性表达。     

九自由度乘坐动力学模型的人体振动特性仿真

为高效预测动态环境下人-车系统的人体振动响应特性及汽车乘坐舒适性, 依据人-车-路系统间的相互作用和多体动力学原理, 建立了9自由度汽车乘坐动力学模型, 应用拉格朗日原理推导了乘坐动力学方程。基于路面不平度激励及汽车行驶速度变化, 构建了路面随机激励的时域模型。利用MATLAB/Simulink仿真工具, 建立了人-车-路系统仿真模型, 并对某轻型车辆在不同路面、不同车速下的人体振动响应进行了仿真分析。仿真结果表明: 在同样车速下, 随着路面等级的降低, 人体各部位的加速度响应幅值明显增大; 当车辆行驶在随机路面上时, 路面不平度随机激励引起的人体振动能量主要集中在低频段, 约在5 Hz出现第1阶共振频率, 大约在10 Hz出现第2阶峰值, 这与众多试验结果一致。可见, 9自由度汽车乘坐动力学模型及其仿真模型, 不仅能快速计算动态激励下人体的振动特性和乘坐舒适性, 而且具有较好的可信度。     

胆囊癌相关成纤维细胞分泌IGFBP3促进淋巴内皮细胞的迁移

目的探讨胆囊癌相关成纤维细胞(CAFs)对淋巴内皮细胞(LECs)迁移能力的影响及相关分子机制。方法通过酶消化法提取胆囊癌的原代CAFs和正常胆囊的纤维细胞(NFs),收集相应细胞上清液(condition medium, CM),采用半定量蛋白因子芯片和ELISA实验筛查两者CM中IL-6、类胰岛素生长因子结合蛋白3(IGFBP3)等常见细胞因子水平。通过免疫组化检测胆囊癌和癌旁组织中α-SMA(CAFs标志物)和IGFBP3表达,分析其与患者临床病理特征的关系;培养LECs细胞,根据不同的处理方法将其分为无血清培养基组(Control组)、CAF-CM共培养组、NF-CM共培养组、IGFBP3组和CAF-CM+IGFBP3抑制剂(2-Deoxy-D-glucose)组,Transwell迁移实验和划痕实验检测各组中LECs迁移能力的变化;Western blotting检测不同处理条件下LECs的E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白的表达。结果蛋白因子芯片和ELISA检测发现CAF-CM较NF-CM中IGFBP3水平明显升高,免疫组化染色显示胆囊癌组织α-SMA高表达,且与淋巴结转移、TNM分期和IGFBP3高表达存在明显正相关。CAF-CM组中的IGFBP3可明显促进LEC迁移,并上调N-cadherin、Vimentin表达;下调E-cadherin表达;采用2-Deoxy-D-glucose处理后,可以逆转CAF-CM对LECs迁移和相关蛋白的表达变化。结论 CAFs通过分泌IGFBP3影响EMT过程,从而促进LEC细胞迁移。     

牛膝多糖通过Notch1通路影响骨髓间充质干细胞向髓核样细胞分化的机制

目的探讨牛膝多糖(achyranthes bidentata polysaccharides,ABPS)对骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)向髓核样细胞分化的影响及机制。方法 取5只4周龄SD大鼠,处死后解剖分离BMSCs,反复贴壁纯化,取第3代BMSCs,不同浓度ABPS作用48 h,MTT法检测细胞存活率,选择对BMSCs生长无毒性的ABPS最高浓度进行后续实验。根据处理方式不同将细胞分为对照组(常规培养)、ABPS组(200 mg/L ABPS)、Notch1组(转染Notch1)、Notch1阴性对照组(转染Notch1阴性对照)和ABPS+Notch1组(转染Notch1后加入200 mg/L ABPS)。诱导培养14 d后MTT法检测细胞增殖能力,qPCR和Western blotting分别检测collagenⅡ、聚集蛋白聚糖(aggrecan)、Notch1、Hes1 mRNA和蛋白表达水平,取第1、4、7、10、14天细胞培养基阿尔新蓝法检测葡糖胺聚糖(GAG)。结果400 mg/L ABPS作用BMSCs 48 h...