滴金法检测幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A抗体试剂盒的研制及应用

目的　建立一种快速、简易的检测血清中抗幽门螺杆菌 (Hp)细胞毒素相关蛋白A(CagA)抗体的胶体金免疫渗滤法 (DIGFA)。方法　采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒 ,标记葡萄球菌A蛋白 (SPA) ,将重组的CagA抗原固定于硝酸纤维素膜上 ,制成免疫渗滤试剂盒。血清中抗CagA抗体与试剂盒上金标记物及硝酸纤维素膜上的固相抗原结合后 ,形成肉眼可见的红色斑点。结果　用DIGFA与酶联免疫吸附试验 (ELISA)试剂盒对比检测了 32 6份血清标本中抗CagA抗体 ,本方法的特异性为 95 .8% ,敏感性为 97.3% ,两种方法符合率为 96 .6 %。结论　DIGFA检测血清中的抗CagA抗体特异性强、灵敏度高、简便快速 ,无需特殊仪器设备 ,有广泛应用价值     

氯仿对机体免疫功能的毒性作用

氯仿是工业上广泛使用的强挥发性试剂 ,也是一种常见的环境污染物。在人们的生活饮用水中氯仿的浓度有时可以达到每升几百微克。在一些食品中也检出了氯仿 ,含量为1～ 30 μg·kg- 1 [1 ] 。氯仿可经口、呼吸道和皮肤三个途径被人体吸收 ,在体内产生几种有活性的代谢中间产物。近年来研究发现高剂量的氯仿能抑制中枢神经系统 ,造成肝肾功能损害及肿瘤。小剂量 ,高浓度直接接触氯仿可引起局部皮肤的损伤[2 - 5] 。低质量浓度能明显加重花粉性变态反应性结膜炎的产生[6 ] 。有报道氯仿对机体免疫功能有一定的毒性作用[7] 。但目前尚未见报道氯…     

利用激光拉曼光谱研究^137Csγ射线照射人食管癌细胞的最佳剂量

目的：利用激光拉曼光谱研究^137Csγ食管癌细胞的最佳剂量。方法：人食管癌细胞（EC9706）经不同剂量^137Csγ4h后采集其激光拉曼光谱,并对拉曼光谱进行比对分析。结果：（1）蛋白质酰胺Ⅲ带1240cm^-1谱带在各剂量组出现不同程度蓝移,表明改变了β回折构象;色氨酸残基的吲哚环振动谱带550、762cm^-1谱带在各剂量组中出现较明显的频移,说明其内部构象的改变;空白对照组EC9706细胞中酪氨酸是＂埋藏式＂的,而在4、5、6Gy组却变成了＂暴露式;＂（2）核酸中磷酸骨架基团的785、1096cm^-1在射线剂量组出现了明显频移和散射强度变化,这可能与^137Csγ出现频移,其它剂量组基本上没有改变。结论：4、6Gy组频移明显,说明4、6Gy组为最佳照射剂量。     

螺内酯对实验大鼠肝组织TGFβ1、PDGF-BB及α-SMA表达的影响

目的　探讨螺内酯预防肝纤维化的作用机制。方法　SD大鼠 90只 ,随机分为 3组。正常对照组 (8只 ) :正常饮食 ,皮下注射花生油 ;模型组 (42只 ) :复合因素制成肝纤维化模型 ;螺内酯预防组 (40只 ) :造模方法同模型组 ,螺内酯 10 0mg·kg- 1·d- 1灌胃。分别于第 2周、4周、6周、8周末随机处死 8只大鼠 ,取肝组织用免疫组化法检测各组肝组织内转化生长因子 β1(TGFβ1)、血小板衍生生长因子 (PDGF BB)及α 平滑肌动蛋白 (α SMA)含量。结果　螺内酯预防组TGFβ1、PDGF BB及α SMA在肝组织中的表达均较模型组明显减少 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。 结论　螺内酯可通过降低TGFβ1、PDGF BB活性及抑制肝星状细胞的活化对肝纤维化的形成起预防作用     

白血病患者FasL的表达及功能研究

目的　观察白血病细胞表面FasL的表达水平及其是否具有功能性 ,探讨FasL是否在白血病的免疫逃逸中发挥作用。方法　通过链酶亲和素 碱性磷酸酶免疫组织化学法检测 10例正常人及 4 8例白血病患者外周血单个核细胞FasL的表达水平 ;将白血病细胞与Jurkat细胞混合培养 2 4h后 ,用DNA电泳法及MTT法从定性和定量两方面检测Jurkat细胞发生凋亡的情况。结果　FasL在白血病细胞膜中较正常人高表达 ,AML及ALL耐药未缓解者FasL表达水平明显高于缓解及部分缓解者 ,随着CML病情进展 ,白血病细胞膜FasL表达率升高。三种不同比例的效应细胞与靶细胞混合培养 ,效应细胞数越高 ,对靶细胞杀伤越明显。结论　FasL在白血病细胞表面高表达且对Fas阳性的敏感细胞具有杀伤功能 ,推测Fas/FasL途径可能在白血病的免疫逃逸中发挥作用。     

自身免疫性甲状腺病甲状腺内Th1/Th2平衡偏移研究

目的　探讨自身免疫性甲状腺病发生的免疫机制 ,明确在Graves病 (Graves’disease ,GD)和桥本氏甲状腺炎(hashimoto’sthyroiditis,HT)甲状腺内Th1/Th2平衡偏移在发病中的作用。 方法　用免疫组化染色方法检测 13例GD、12例HT患者甲状腺内浸润单个核细胞IFN γ、IL 4细胞因子抗原表达 ,并检测这些患者外周血甲状腺刺激抗体、甲状腺球蛋白抗体、甲状腺微粒体抗体免疫学指标。结果　与正常对照组相比 ,GD、HT患者甲状腺内浸润单个核细胞IL 4、IFN γ阳性表达高于正常 (P <0 .0 5 ) ;GD组Th2类细胞因子IL 4阳性表达明显高于Th1类细胞因子IFN γ阳性表达 (P<0 .0 1) ;而HT组Th1类细胞因子IFN γ阳性表达明显高于Th2类细胞因子IL 4阳性表达 (P <0 .0 1) ;GD患者的IL 4阳性表达均与甲状腺刺激抗体显著正相关 (r =0 .6 7) ;HT患者的IFN γ阳性表达均与甲状腺球蛋白抗体、甲状腺微粒体抗体呈显著正相关关系 (r=0 .6 8,r=0 .5 7)。结论　GD患者甲状腺以分泌IL 4的Th2浸润为主 ,而HT患者甲状腺以分泌IFN γ的Th1浸润为主 ,AITD的发病与Th1/Th2平衡偏移及其分泌的Th1/Th2细胞因子有着内在的联系     

K562细胞cDNA表达文库的构建和鉴定

目的　构建K5 6 2细胞表达型cDNA文库。方法　提取K5 6 2细胞总RNA ,分离mRNA ,反转录合成双链cDNA ,消平cDNA末端 ,连接EcoRⅠ适配子 ,磷酸化EcoRⅠ适配子 5’端 ,Sephacryl S4 0 0柱除去小于 4 0 0bpcDNA片段 ,与去磷酸化的λgt11噬菌体连接 ,体外包装后建成cDNA文库。取出 1μL倍比稀释感染E .coliY10 90 ,测定文库大小、重组率 ,并以PCR鉴定cDNA插入片段的大小。结果　构建成含 1.0 2× 10 6重组子的K5 6 2细胞cDNA文库 ,重组子平均插入外源片段长约 1.3kb。结论　所建文库合格 ,适合用于筛选目的cDNA克隆。     

CD95L和TGF-β在与胰岛细胞共同培养的Sertoli细胞上表达

目的　观察生物半透膜 (BSM)包裹胰岛样细胞团 (ICCs)与富含Sertoli细胞的睾丸样细胞团 (SC)体外培养时 ,Sertoli细胞是否同时表达CD95L和TGF β基因及体外抗免疫排斥作用的效果。方法　BSM包裹猪ICCs和SC ,与人淋巴细胞进行培养。免疫组化染色观察CD95L、TGF β的表达。通过测定胰岛素浓度和刺激释放实验 ,AO PI荧光双染色和TUNEL染色 ,观察培养细胞的结构功能状况。结果　ICCs和SC共同培养时 ,许多Sertoli细胞表达CD95L和TGF β蛋白。与淋巴细胞培养后 ,胰岛素分泌良好 ,刺激释放实验比值 >2 0 ,AO PI荧光染色超过 95 %的细胞存活 ,TUNEL染色未发现凋亡细胞。结论　Sertoli细胞与胰岛细胞共同培养时可出现CD95L和TGF β同时表达的微环境     

DETECTION OF STRAND BREAKS OF DNA IN HUMAN EARLY CHORIONIC VILLUS CELLS INDUCED BY DIAGNOSTIC ULTRASOUND USING ^32P-LABELED ALU HYBRIDIZATION

Genetic effects of ultrasound on fetus havebeen extensively studied since ultrasonograph waswidely appliedin obstetric practice.In recent years,there have been reports onin vivomolecular geneticeffects of diagnostic ultrasound[1-4].In vitroexperi-ments have found that single-stranded breaks(ssbs)and double-stranded breaks(dsbs)in DNA are themain indices for DNA lesions induced by ultra-sound[5].But,no reports on whether ultrasound cancausein vivossbs and dsbs in DNAare available.Tofurther …     

PDCD5基因在初诊Graves''''病患者PBMCs中表达情况的初步研究

目的探讨促凋亡基因PDCD5 mRNA在初诊Graves'病(GD)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中的表达。方法半定量RT-PCR法检测53例初诊GD患者外周血单个核细胞PDCD5 mRNA表达的阳性率和表达水平。结果35例PDCD5 mRNA在GD患者PBMCs中表达呈阳性,阳性率为66.1%,较正常对照者(55.6%)升高;其表达水平(1.01±0.13)显著高于正常对照(0.52±0.13,P<0.05),且GD患者高T3水平组PDCD5 mRNA的表达显著高于低T3水平组(P<0.05)。结论PDCD5 mRNA在GD患者PBMC表达升高,可能与GD淋巴细胞凋亡异常有关。