结核分支杆菌phoS2重组质粒的构建、表达、纯化及生物信息学预测

目的构建结核分支杆菌phoS2表达重组质粒、原核表达及纯化重组蛋白,并对重组蛋白进行免疫学特性的初步鉴定。方法将目的基因亚克隆到pET32a表达载体,成功构建的重组质粒双酶切鉴定并测序。加IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE鉴定后用含Ni 2+的His-bind树脂柱亲和层析纯化phoS2,并用Western blot对其进行鉴定。应用DNAstar等生物分析软件对该蛋白的理化特性、跨膜区域、二级结构、三维结构进行预测。结果双酶切鉴定及测序分析表明,成功构建了基因工程菌株高效表达质粒phoS2/pET32a。IPTG诱导表达的SDS-PAGE鉴定结果显示,上清液中只见极少量的特异蛋白表达带,沉淀部分可见明显的特异表达带,说明phoS2主要是包涵体表达。经免疫印迹分析获得的phoS2分子质量为37 953ku。生物信息学预测该蛋白分子质量为37 953.1ku,理论等电点为5.75,具有1个跨膜区,位于1¹9位,结构域位于119位,结构域位于1³70位。结论成功构建了结核分支杆菌phoS2/pET32a重组质粒,phoS2能够高效表达。蛋白结构功能的预测对本实验的实施及进一步的研究提供了理论依据。     

结核杆菌DnaA蛋白的原核表达及免疫血清的制备和检测

目的 在大肠杆菌中表达重组结核杆菌DnaA蛋白,对表达产物进行纯化、鉴定后制备DnaA蛋白特异性免疫血清并进行Western blot检测.方法 以结核分枝杆菌标准菌株H37Rv基因组为模板,PCR扩增DnaA基因,构建DnaA原核表达质粒pET-DnaA,转化表达宿主大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白表...     

结核分枝杆菌Ag85A基因DNA疫苗的构建和免疫原性研究

目的　构建编码结核分枝杆菌蛋白Ag85A基因为基础的DNA疫苗。 方法　采用聚合酶链反应从结核杆菌H37Rv株基因组中 ,扩增出分泌蛋白Ag85A成熟蛋白的编码基因 ,用限制性内切酶消化后 ,插入克隆载体 pGEM TEasy中。经酶切鉴定与序列测定证实后 ,以亚克隆法构建于真核表达载体 pcDNA3.1的相应酶切位点。重组质粒肌注免疫小鼠 ,4周后用ELISA法检测抗体滴度。结果　结核分枝杆菌H37Rv株Ag85A成熟蛋白的编码基因经序列测定证实无突变 ;经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切鉴定证实克隆基因正确插入载体 pcDNA3.1。ELISA法检测几何平均滴度为 1∶10 0 0。结论　以Ag85A成熟蛋白的编码基因为基础的DNA疫苗的成功构建和表达 ,为进一步研究其在结核病与肿瘤防治方面的作用奠定了基础     

终末期肾病患者并发结核感染后的肾移植治疗

目的　探讨尿毒症并发结核感染患者的肾移植手术时机、免疫抑制及抗痨治疗方案的选择 ,并观察移植效果。方法　对 1 2例有结核感染的尿毒症患者行 2～ 4月化疗后行肾移植术 ,术后常规应用免疫抑制剂 ,术后继续抗痨 6月～ 1年 ,观察移植效果及结核复发情况。结果　短期化疗后所有患者均可耐受手术。术后CsA浓度谷值明显低于对照组 ,排斥反应未见明显增加 ,但肝功能损害发生增多。除一例因自停抗痨药而复发外 ,其余病例均未见结核复发或加重。结论　终末期肾病患者并发结核感染后经短期化疗可行肾移植术 ,移植效果较好。应注意肝功损害的发生。术后给予 6月～ 1年抗痨治疗可有效防止复发。     

结核蛋白芯片对肺结核及肺外结核的诊断价值

目的通过临床诊断和医学检验报告,评价了结核蛋白芯片在肺结核及肺外结核中的辅助诊断作用。方法应用蛋白芯片对107例肺结核患者及134例肺外结核患者进行结核菌蛋白16ku、38ku和脂阿拉伯甘露糖(LAM)的相应抗体的检测。结果①结核蛋白芯片对结核病的诊断有辅助诊断的价值。②联合三项蛋白芯片抗体指标(16ku蛋白、38ku蛋白、LAM)进行辅助诊断肺结核的价值大于辅助诊断肺外结核的价值,其中肺结核组结核蛋白芯片阳性率为66.4%,肺外结核组阳性率35.8%。③在结核病中三项蛋白芯片抗体指标灵敏性依次为LAM、38ku蛋白、16ku蛋白。④联合蛋白芯片指标灵敏性高于单一蛋白芯片指标。⑤16ku+LAM与16ku+38ku+LAM有近似相同的诊断价值。结论结核蛋白芯片对于检测肺结核和肺外结核有一定的辅助诊断价值。     

上海软土地区盾构遇到的块石成因分析和施工对策

上海西藏南路越江隧道工程中盾构穿越黄浦江时遇到块石。通过对块石结构和成份的分析,确定其为钙质结核体。探讨了块石形成成因和分布规律,在掌握块石分布规律的基础上,通过调整盾构掘进工艺和施工参数等技术措施,使盾构顺利通过了块石分布区域。     

结核分枝杆菌Hsp16.3表达与感染小鼠肺泡巨噬细胞凋亡的关系

目的探讨结核分枝杆菌(MTB)小分子热休克蛋白Hsp16.3表达与感染小鼠肺泡巨噬细胞凋亡的关系。方法分别将MTB国际标准强毒株H37Rv株Hsp16.3基因缺失突变菌株(△H37Rv)、结核杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株(H37Rv)以及无菌生理盐水溶液(空白对照)通过小鼠尾静脉注入小鼠体内以建立小鼠的感染模型,并在感染后的1、3、5、7、9、11、13、15d分离及鉴定小鼠肺泡巨噬细胞,用激光共聚焦显微镜技术检测及鉴定MTB感染小鼠肺泡巨噬细胞;流式细胞术检测不同时间点感染小鼠肺泡巨噬细胞的凋亡率;Western blot技术检测小鼠肺泡巨噬细胞内半胱天冬酶-3(Caspase-3)和B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白的表达。结果△H37Rv菌株感染组和H37Rv菌株感染组凋亡率均高于空白对照组,△H37Rv组的巨噬细胞凋亡率在感染1⁷d内逐渐升高,至感染7d时达到高峰,随后呈下降趋势,与H37Rv组相比,17d内逐渐升高,至感染7d时达到高峰,随后呈下降趋势,与H37Rv组相比,1⁷d及137d及13¹5d,△H37Rv组的巨噬细胞凋亡率高于H37Rv组,差异有统计学意义(P<0.05);H37Rv组和△H37Rv组的巨噬细胞Caspase-3和Bcl-2蛋白表达水平均高于空白对照组;115d,△H37Rv组的巨噬细胞凋亡率高于H37Rv组,差异有统计学意义(P<0.05);H37Rv组和△H37Rv组的巨噬细胞Caspase-3和Bcl-2蛋白表达水平均高于空白对照组;1⁷d内,H37Rv感染组和△H37Rv感染组的巨噬细胞Caspase-3表达水平逐渐升高,至第7天达到高峰,且△H37Rv感染组在第13天时出现第二次高峰,但Caspase-3表达水平均高于H37Rv感染组,差异有统计学意义(P<0.05);在感染的早期(17d内,H37Rv感染组和△H37Rv感染组的巨噬细胞Caspase-3表达水平逐渐升高,至第7天达到高峰,且△H37Rv感染组在第13天时出现第二次高峰,但Caspase-3表达水平均高于H37Rv感染组,差异有统计学意义(P<0.05);在感染的早期(1⁷d),△H37Rv感染组Bcl-2的表达水平无明显变化(P<0.05),但在9d后逐渐升高;H37Rv感染组巨噬细胞内Bcl-2的表达水平17d),△H37Rv感染组Bcl-2的表达水平无明显变化(P<0.05),但在9d后逐渐升高;H37Rv感染组巨噬细胞内Bcl-2的表达水平1⁷d内无明显变化(P<0.05),7d后逐渐升高,但△H37Rv感染组Bcl-2的表达水平始终低于H37Rv组且7d后表现更为显著。结论在MTB感染的早期和晚期,MTB小分子热休克蛋白Hsp16.3的表达能够有效抑制小鼠肺泡巨噬细胞的凋亡,而这种抑制作用可能是通过抑制凋亡蛋白酶Caspase-3的表达,同时促进Bcl-2蛋白的表达来实现的。     

福建铁路企业尘肺流行病学调查

按１９８７年全国尘肺流行病学调查方法，对福建铁路企业进行尘肺流行病学调查。结果：管内共有尘肺病例２０５例，主要病种为矽肺病，主要发病工种为开挖隧道的隧道工，其次为采石作业的采石工和破碎工；尘肺合并结核率为３２．２０％，明显高于１７．１％和１９．１％的报道；尘肺病死率为４２．９３％，主要死因为合并肺结核，其次为慢性肺心病。提示：应加强铁路开挖隧道作业和铁路采石作业等粉尘作业点的防尘措施；应加强对尘肺患者，尤其是对尘肺并发合并症患者的健康监护工作。     

经纤维支气管镜对支气管结核诊断的临床研究

支气管结核 (Ｂｒｏｎｃｈｉａｌｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ,ＢＴＢ)是结核病在呼吸系统的一种表现形式 ,晚期可导致支气管狭窄的严重后果。随着纤维支气管镜检查 (Ｆｉｂｅｒｏｐｔｉｃｂｒｏｎｃｈｏｓｃｏｐｙ ,ＦＢ)的推广应用 ,经纤维支气管镜诊断支气管结核受到重视。我院自 1990 0 1～ 2 0 0 0 12间有 193例经纤维支气管镜检确诊为支气管结核 ,现报告如下。1　材料和方法1 1　对象选择　 1990 0 1～ 2 0 0 0 12间 ,经我院呼吸科支气管镜室确诊ＢＴＢ 193例 ,男 10 8例 ,女 85例 ,年龄 18～ 72岁 ,发病时间 5ｄ～ 1月。1.2　方法　…