不同冷冻方法对兔颈总动脉形态结构及活性的影响

目的玻璃化法和慢速冷冻法深低温保存兔颈总动脉,比较两种保存方法对血管活性及形态结构的影响。方法无菌条件下切取兔颈总动脉,采用玻璃化法和慢速冷冻法在-196℃液氮中深低温保存2周,37℃水浴复温。新鲜血管作为对照,分别观察血管的大体、组织学、超微结构;同时对冷冻复温的血管采用组织块法培养并鉴定细胞,通过细胞计数描述细胞生长曲线,观察培养后血管的活性、细胞的再生及增殖能力。结果玻璃化组和慢速冷冻组动脉出现部分内皮细胞脱落,平滑肌细胞和成纤维细胞轻度肿胀、变性,前者损伤程度轻于后者。体外培养两组动脉的细胞分别于第6、7天自组织块内长出,细胞形态结构、生物学特性与新鲜组相似。生长曲线显示玻璃化组细胞的生长增殖状态优于慢速冷冻组,两组均差于新鲜动脉。将培养后的细胞分别进行免疫组织化学染色,经鉴定为平滑肌细胞。结论玻璃化法能较好地保持血管的形态结构和组织活性,保存效果优于慢速冷冻法。     

乙型肝炎患者AMLR及非T细胞Ia抗原表达

本文用氚标胸腺嘧啶核苷,（~3H-TdR）掺入法检测102例各种类型乙肝病毒感染者自身混合淋巴细胞反应（AMLR）、并以单克隆抗体（McAb）Wu35（HLA-DR）和Wu22（HLA-DQ）,经PAP免疫酶组化技术测定非T细胞表面HLA-DR及HLA-DQ抗原。结果表明:除HBsAg携带者及慢性迁延性肝炎患者AMLR接近正常对照外,其它类型HBV感染者AMLR均有不同程度降低,尤其以重症肝炎和肝硬化降低明显。各类乙肝患者DR~+Mon和B细胞及DQ~+Mon和B细胞百分率均有不同程度的下降,以重症肝炎和肝硬化最显著。提示乙肝患者AMLR降低与刺激细胞（Mon和B细胞）表面DR和DQ抗原表达障碍有密切关系,与反应性T细胞无关。这可能是乙型肝炎疾病过程中细胞免疫功能障碍及免疫调节紊乱之机制所在。     

肝动脉缺血后供肝组织中氧自由基含量变化及意义

利用犬肝自体原位移植模型，观察了肝动脉缺血（ＨＡＩ）后供肝组织的脂质过氧化物（ＭＤＡ），黄嘌呤氧化酶（ＸＯＤ）和超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性变化。结果显示：随着ＨＡＩ时间延长，各指标活性与对照组比较差别显著（Ｐ＜０．０５）；术后血清谷丙转氨酶和胆红素含量增高更为明显（Ｐ＜０．０１），且下降缓慢（Ｐ＜０．０５）。认为，ＨＡＩ对供肝有明显的损伤作用，氧自由基是导致这一损伤作用的重要因素之一。     

硒和维生素C对白血病细胞增殖及细胞毒性的研究

目的 本文主要研究硒和维生素Ｃ影响髓系与非髓系白血病细胞增殖及其细胞毒性的异同。方法 体外培养髓系白血病细胞株ＨＬ－６０及非髓系细胞株Ｋ５６２，培养时分别设Ｓｅ（５μｍ，８μｍ、８μｍ，１１μｍ）及ＶｉｔＣ（５μｍ、１０μｍ、１００μｍ）实验组及对照组，培养２４ｈ，４８ｈ、７２ｈ后分别取样，利用台盼蓝拒染法进行细胞计数，绘制生长曲线，并通过噻唑蓝比色分析法研究Ｓｅ及ＶｉｔＣ对ＨＬ－６０，Ｋ５６２细     

HEK293细胞中杂合状态下无义突变体L539fs/47对野生型HERG电流的作用

目的研究单独表达无功能的无义突变体L539fs/47在HEK293细胞中杂合状态下对野生型HERG电流的作用。方法用脂质体转染法将野生型HERG及突变体HERG-L539fs/47分别转染HEK293细胞36h后,RT-PCR检测HERG mRNA表达,免疫荧光及免疫印迹检测HERG蛋白定位及表达量,全细胞膜片钳检测IHERG电流密度。结果野生组HERG的mRNA表达量高于L539fs/47突变组(1.066±0.612 vs.0.254±0.397,P<0.01)。免疫荧光检测发现野生型HERG蛋白多于突变体,野生型HERG蛋白主要分布在细胞膜上;而HERG突变体蛋白大部分滞留胞质。免疫印迹显示:不同于野生型HERG135ku及155ku 2个条带,突变体仅60ku 1个条带。全细胞膜片钳检测WT+MT组IHERG较WT组下降55.23%(22.03±2.62 vs.49.20±2.31pApF,P<0.01)。结论 HEK293细胞中杂合状态下截断突变体L539fs/47对野生型HERG电流的不完全负显性抑制作用。     

CHOP在间歇低氧大鼠认知功能减退中的表达及意义

目的探讨C/EBP同源蛋白(CHOP)在间歇性低氧大鼠认知功能减退中的表达变化及其意义。方法将75只雄性Wistar大鼠随机分为正常组(NC组)、5%间歇低氧组(5%CIH组)、10%间歇低氧组(10%CIH组),每组25只;每组又各分为3、7、14、21、28d时间亚组,每个时间亚组5只。正常组暴露于空气中,间歇低氧组分别暴露于间歇性低氧条件下(暴露时间每天8h,持续时间3、7、14、21、28d)。采用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆功能,免疫组化检测海马CA1区CHOP表达,TUNEL法检测海马CA1区神经细胞凋亡。结果 1与NC组比较,2个CIH组动物逃避潜伏期随低氧时间的延长而延长(P<0.05),跨越目标象限的时间随低氧时间的延长而缩短(P<0.05),海马神经元凋亡指数随缺氧时间的延长均逐渐升高(P<0.05);与10%CIH组比较,5%CIH组上述变化有统计学意义(P<0.05)。2与NC组比较,2个CIH组CHOP蛋白的表达随缺氧时间的延长于各个时间点均增加(P<0.05),其中10%CIH组于28d达峰,5%CIH组于21d达峰后下降。3双变量相关分析显示,2个CIH组其CHOP表达与凋亡指数、动物逃避潜伏期时间均呈正相关,与跨越目标象限时间均呈负相关。结论间歇性低氧可以引起不同程度的认知功能减退,可能与其诱导CHOP高表达并激活CHOP介导的神经细胞凋亡密切相关。     

miRNA-141、miRNA-145在非小细胞肺癌中的表达及与临床病理的关系

目的通过检测miRNA-141、miRNA-145在非小细胞肺癌中的表达,探讨其与非小细胞肺癌临床病理的关系。方法采用Real time-PCR法对48例非小细胞肺癌组织及正常肺组织的miRNA-141、miRNA-145进行定量分析,结果由2(-△△CT)处理,并分析与临床病理资料的关系。结果 1NSCLC患者肿瘤组织中miRNA-141表达水平明显升高,而且其表达与临床分期、病理类型显著相关(P<0.05),miRNA-141在鳞癌患者肿瘤组织表达高于腺癌(P<0.05),而在不同年龄、性别、肿瘤大小患者间差异无统计学意义(P>0.05)。2NSCLC患者肿瘤组织中miRNA-145表达水平明显下降,而且其表达与临床分期、病理类型显著相关(P<0.05),miRNA-145在腺癌患者肿瘤组织表达低于鳞癌(P<0.05),而在不同年龄、性别、肿瘤大小患者间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 miRNA-141高表达及miRNA-145低表达与非小细胞肺癌的临床分期、病理分级密切相关,miRNA-141、miRNA145有可能作为非小细胞肺癌的重要肿瘤标志物。     

Survivin反义核酸联合紫杉醇对皮下荷瘤Balb/c小鼠模型的治疗作用

目的研究survivin反义核酸与紫杉醇联合应用对皮下荷瘤Bal b/c小鼠模型的治疗作用,并初步探讨对其抗癌作用的机制。方法在Bal b/c小鼠皮下注射C26细胞,建立皮下瘤模型,采用瘤内注射的方式,将实验分空白组(C)、lipo2000对照组(L)、紫杉醇组(T)、survivin反义核酸组(A)、survivin反义核酸联合紫杉醇组(A+T)5个不同组,观察肿瘤的生长状态,TUNEL法检测凋亡细胞,Western blot法检测survivin蛋白表达。结果 1各治疗组均达到了(T/C)<60%,与L组比较差异有统计学意义(P<0.05),体内证实给药干预有效;小鼠瘤重的抑瘤率结果显示,与C组比较,T、A、A+T各给药组均能抑制小鼠瘤重,差异具有统计学意义(P<0.05),从抑制肿瘤质量增长方面而言,二者联合用药[瘤重抑瘤率为(54.16±0.32)%]将紫杉醇[瘤重抑瘤率为(21.82±0.84)%]的抗癌活性提高了59%以上;2TUNEL法检测凋亡细胞:空白对照组几乎没有肿瘤细胞凋亡。T组及A组有一定量的凋亡细胞,以上试验结果提示,紫杉醇具有促进肿瘤细胞凋亡的能力,A+T不仅加强了对肿瘤细胞的杀伤作用,而且二者的协同作用可能对肿瘤耐药性有所影响,最终使得其促肿瘤细胞凋亡的作用尤为显著;3survivin蛋白表达:结果显示,A+T组survivin蛋白的表达明显降低,而不影响β-actin的表达,C组和L组相比无明显变化,T组、A组、A+T组A值的比值分别为0.895±0.011、0.704±0.121、0.345±0.019,经方差分析,A+T组与C、L、A、T组的表达量差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 survivin反义核酸与紫杉醇联合用药,可能通过下调survivin蛋白的表达从而促进肿瘤细胞凋亡,联合用药可降低机体耐药性,发挥协同作用。     

三七皂苷对激素性股骨头坏死早期细胞凋亡的影响及其机制

目的探讨三七皂苷(panax notoginseng saponins,PNS)对激素性股骨头坏死(steonecrosis of the femoral head,SONFH)早期细胞凋亡的影响及其作用机制。方法选取健康成年新西兰兔24只,分为正常对照组、模型组及PNS组3组。模型组采用马血清(10mL/kg)加激素(40mg/kg)的方法建立兔SONFH模型;PNS组在模型组基础上同时给予PNS(50mg/kg)干预;正常对照组常规饲养。2周后处死动物取双侧股骨头进行脱钙包埋,TUNEL染色观察细胞内凋亡变化,BCA法检测股骨头内caspase-3活性变化,免疫组化及Western blot检测各组股骨头内Bax及Bcl-2含量的变化。结果 TUNEL染色结果发现,模型组骨组织内可见大量凋亡细胞,PNS组骨组织内凋亡细胞明显减少(P<0.05);与模型组相比,经PNS预处理后股骨头组织内的caspase-3活性明显下降(P<0.05);免疫组化染色及Western blot检测结果证实,模型组骨组织内Bax蛋白表达量明显增加,而Bcl-2蛋白表达量明显减少,而与之相反的是PNS组骨组织内检测到的Bax蛋白表达量明显下降(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达量明显增加(P<0.05)。结论PNS可能通过增强Bcl-2表达,降低Bax表达,抑制caspase-3活性,减少早期SONFH股骨头组织内的细胞凋亡。