成人脂肪源Flk1~+CD31~-CD34~-细胞体外定向诱导分化为胰岛样细胞

目的体外定向诱导成人脂肪源Flk1+CD31-CD34-细胞向胰岛样细胞分化。方法首先将成人脂肪源Flk1+CD31-CD34-细胞培养在含适当浓度的B27、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及表皮生长因子(EGF)的培养基中诱导,接着更换诱导培养基,用含适当浓度的β细胞调节素、尼克酰胺等高糖无血清培养基诱导细胞向胰岛样细胞分化。用RT-PCR法检测诱导前后nestin、ngn3、胰岛素启动子因子1(IPF-1)、胰岛素及胰高血糖素基因的表达;免疫荧光染色法检测诱导前后nestin、胰岛素及胰高血糖素的表达;放射免疫分析法检测诱导前后细胞分泌胰岛素情况。结果成人脂肪源Flk1+CD31-CD34-细胞经第一阶段的诱导后可分化成nestin阳性的祖细胞,继续诱导6 d后变圆的细胞逐渐增多,并最终聚集成团。免疫荧光实验证明经诱导后的细胞表达胰岛素、胰高血糖素、生长抑素等内分泌激素;放免分析结果表明,诱导的胰岛样细胞团可以分泌胰岛素。结论成人脂肪源Flk1+CD31-CD34-细胞具有胰腺干祖细胞的固有特征,极有可能作为种子细胞用糖尿病的细胞治疗。     

多抗甲素对小鼠腹腔巨噬细胞的作用

本文研究多抗甲素对S_(180)荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞的作用,结果表明,多抗甲素能促进巨噬细胞定向趋化及活化强度,并提高其吞噬鸡红血球和产生TNF_α能力。提示增强单核—巨噬细胞吞噬能力和TNF_α细胞毒作用可能是多抗甲素抗肿瘤作用的一个主要机制。     

人大肠癌nm23基因与癌组织浸润转移关系的研究

应用免疫组化ABC法，研究43例大肠癌组织中nm23基因产物／NDPK的表达与癌组织浸润转移的关系。结果显示，NDPK在大肠癌原发灶中有较高的表达，阳性率为74．4％，无区域淋巴结转移者阳性率（84．0％）比有区域淋巴结转移者阳性率（61．0％）高，两者比较具有显著性差异（P＜0．05）。原发灶中nm23／NDPK的阳性表达与癌组织浸润深度密切相关，说明nm23／NDPK对肿瘤的浸润转移有重要的抑制作用。还提示，nm23／NDPK的表达不仅与肿瘤的浸润转移有关，还与大肠癌的组织学类型有关。因此，检测大肠癌组织中nm23／NDPK的表达情况，可预测肿瘤的转移和复发。     

三硝基苯磺酸/乙醇灌肠液诱导大鼠溃疡性结肠炎TLR4/NF-κB和PI3K/AKT/NF-κB信号通路的表达及电针的干预作用

目的探讨三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇灌肠液诱导大鼠溃疡性结肠炎TLR4/NF-κB和PI3K/AKT/NF-κB信号通路的表达及电针的干预作用。方法雄性Wistar大鼠240只,随机分为正常对照组、模型组、电针组、TLR4单克隆抗体(TLR4mAb)组、LY294002组和TLR4mAb-LY294002联合治疗(T&L)组。以TNBS/乙醇溶液灌肠诱导大鼠溃疡性结肠炎模型,电针组造模同时给予电针足三里穴治疗,TLR4mAb组给予TLR4mAb腹腔注射,LY294002组则予LY294002注射液腹腔注射,T&L组则同时给与上述TLR4mAb和LY294002腹腔注射,共4周,每日行疾病活动指数(DAI)评分。造模4周后处死大鼠取结肠组织标本,评价结肠黏膜损伤指数(CMDI)和组织学损伤指数(TDI);免疫印迹法测定结肠黏膜磷酸化AKT(P-AKT)和活化NF-κB含量;RT-PCR法检测结肠组织中TLR4mRNA、PI3K mRNA、AKT mRNA、NF-κB mRNA、TNF-αmRNA及IL-1βmRNA表达。结果与正常对照组比较,模型组结肠组织TLR4mRNA、PI3K mRNA、P-AKT、活化NF-κB、TNF-αmRNA、IL-1βmRNA表达和DAI、CMDI及TDI均显著升高(P<0.01);与模型组比较,TLR4mAb组TLR4mRNA表达显著下降(P<0.01),LY294002组PI3K mRNA、P-AKT表达显著下降(P<0.01),而在电针组和T&L组TLR4mRNA、PI3K mRNA及P-AKT表达均明显降低(P<0.01);与上述变化相对应,与模型组相比,各治疗组活化NF-κB、TNF-αmRNA、IL-1βmRNA表达和DAI、CMDI及TDI均明显降低(P<0.05或P<0.01),电针组和T&L组上述6指标优于TLR4mAb组和LY294002组,活化NF-κB与TNF-αmRNA及IL-1βmRNA表达呈正相关(r1=0.579,P<0.05;r2=0.561,P<0.05)。结论电针足三里穴能显著降低实验性溃疡性结肠炎大鼠的NF-κB活性及TNF-αmRNA、IL-1βmRNA表达,从而减轻结肠组织损害程度,这与其阻断TLR4/NF-κB和PI3K/AKT/NF-κB信号通路有密切关系。     

sCD14在痛风性关节炎患者炎症反应中的变化及其意义

目的探讨可溶性白细胞分化抗原14(sCD14)在痛风性关节炎(GA)患者炎症反应中的变化及其意义。方法选取31例急性GA(AGA)患者、23例非AGA(NAGA)患者和20名健康对照者(HC),用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测其外周血单个核细胞(PBMCs)中CD14的mRNA表达水平;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组血浆sCD14、白介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)蛋白表达水平,用免疫比浊法测定各组血浆C反应蛋白(CRP)含量;检测各组白细胞计数(WBC)、嗜中性粒细胞绝对值(GR)、淋巴细胞绝对值(LY)、单核细胞绝对值(MO)等血常规及血尿酸(UA)等指标变化,比较3组指标的差异并分析其与PBMCs的CD14mRNA表达及血浆sCD14表达的相关性。结果 AGA组PBMCs中CD14mRNA表达量高于HC组(P<0.05);HC与NAGA组血浆sCD14蛋白表达低于AGA组(P<0.01),且NAGA组表达低于HC组(P<0.05);AGA组CRP蛋白水平高于HC与NAGA组(P<0.01);AGA、NAGA组血浆IL-1β、TNF-α蛋白水平均显著高于HC组(P<0.01),且AGA组IL-1β蛋白水平高于NAGA组(P<0.01);AGA组和NAGA组WBC高于HC组(分别P<0.01,P<0.05);AGA组GR、MO均高于HC组(P<0.05),AGA组MO高于NAGA组(P<0.05);AGA与NAGA组UA均显著高于HC组(P<0.01)。AGA组PBMCs的CD14mRNA表达与IL-1!呈正相关(rs=0.362,P=0.045);NAGA组血浆sCD14蛋白表达与GR呈正相关(rs=0.397,P=0.030)。结论 sCD14在GA患者的炎症反应中表达异常,提示sCD14在GA患者的炎症反应中可能发挥重要的调控作用。     

牛膝多糖通过Notch1通路影响骨髓间充质干细胞向髓核样细胞分化的机制

目的探讨牛膝多糖(achyranthes bidentata polysaccharides,ABPS)对骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)向髓核样细胞分化的影响及机制。方法 取5只4周龄SD大鼠,处死后解剖分离BMSCs,反复贴壁纯化,取第3代BMSCs,不同浓度ABPS作用48 h,MTT法检测细胞存活率,选择对BMSCs生长无毒性的ABPS最高浓度进行后续实验。根据处理方式不同将细胞分为对照组(常规培养)、ABPS组(200 mg/L ABPS)、Notch1组(转染Notch1)、Notch1阴性对照组(转染Notch1阴性对照)和ABPS+Notch1组(转染Notch1后加入200 mg/L ABPS)。诱导培养14 d后MTT法检测细胞增殖能力,qPCR和Western blotting分别检测collagenⅡ、聚集蛋白聚糖(aggrecan)、Notch1、Hes1 mRNA和蛋白表达水平,取第1、4、7、10、14天细胞培养基阿尔新蓝法检测葡糖胺聚糖(GAG)。结果400 mg/L ABPS作用BMSCs 48 h...